去氢木香内酯诱导乳腺癌SK-BR-3细胞凋亡的机制研究

目的观察去氢木香内酯(Dehydrocostuslactone,Dehy)对乳腺癌SK-BR-3细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法体外培养乳腺癌SK-BR-3细胞,分别加入不同浓度Dehy(5、10、20、30、40、50、60、80、100μmol·L-1)作用24、48、72 h,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率。将SK-BR-3细胞分为空白对照组(0μmol·L-1)和Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组,干预48 h后,利用倒置显微镜观察乳腺癌SK-BR-3细胞的形态;采用流式细胞术检测细胞周期;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡的形态学变化;Western Blot法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3和Cleaved Caspase-3蛋白的表达。结果Dehy干预SK-BR-3细胞24、48、72 h后的IC50值分别为24.84、19.39、11.45μmol·L-1,且呈现浓度和时间依赖性。与空白对照组比较,Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的SK-BR-3细胞数量明显减少,细胞结构松散、轮廓消失、变圆,贴壁不良;Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的G2/M期细胞比例及细胞凋亡率均显著升高(P<0.05,P<0.01),呈明显的浓度依赖性;Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的SK-BR-3细胞出现不同程度的细胞核浓染、固缩及碎裂等凋亡现象,且细胞核致密浓染的比例显著升高(P<0.05,P<0.01);Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的Bax、Caspase-3和Cleaved Caspase-3蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01),Bax/Bcl-2比值明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论Dehy能够抑制乳腺癌SK-BR-3细胞的增殖及诱导其凋亡,可能与其调控Bax/Bcl-2/Caspase-3凋亡信号通路来抑制乳腺癌细胞的抗凋亡能力有关。

肿瘤坏死因子α调节乳腺癌SK-BR-3细胞中KLF4表达及其机制研究

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)对乳腺癌SK-BR-3细胞中Krüppel样因子4(KLF4)表达的影响,明确KLF4在促进乳腺癌SK-BR-3细胞凋亡中的作用机制。方法用不同浓度TNFα(0、1、5、10、20 ng/ml)刺激乳腺癌SK-BR-3细胞,采用Western blot法检测KLF4表达水平;用流式细胞术和DAPI染色法分析细胞凋亡情况。结果随着刺激浓度的增高,KLF4表达水平呈剂量依赖性逐渐增多。流式细胞术和DAPI染色显示,TNFα可诱导乳腺癌SK-BR-3细胞凋亡。构建p Ad-GFP和p Ad-GFPKLF4腺病毒表达载体,在乳腺癌SK-BR-3细胞中过表达GFP或GFP-KLF4,再给予TNFα刺激后,流式细胞术观察结果显示,KLF4过表达可促进乳腺癌SK-BR-3细胞凋亡。结论 TNFα可诱导乳腺癌SKBR-3细胞中KLF4表达,KLF4参与了TNFα诱导的乳腺癌SK-BR-3细胞凋亡过程。

木香烃内酯对人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖、迁移和凋亡的影响及机制研究

目的:研究木香烃内酯对乳腺癌SK-BR-3细胞增殖、迁移和凋亡的影响及机制。方法:取对数生长期的SK-BR-3细胞,分别加入不同浓度(10、20、30、40、50μmol/L)的木香烃内酯作用24、48、72 h,采用CCK-8法检测细胞的增殖抑制率。将细胞分为空白对照组和木香烃内酯10、20、30μmol/L浓度组,采用Hoechst 33258荧光染色法观察细胞形态及凋亡情况,并计算细胞凋亡率;采用细胞划痕试验检测细胞的迁移能力,并计算迁移率;采用Western blotting法检测细胞中B淋巴细胞瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)和分裂型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)蛋白的相对表达水平。结果:木香烃内酯对SK-BR-3细胞具有显著的增殖抑制作用(P<0.05或P<0.01),且呈现浓度和时间依赖趋势。空白对照组细胞轮廓清晰、形态规则、贴壁较好;与空白对照组比较,木香烃内酯10、20、30μmol/L浓度组细胞数量明显减少,细胞结构松散、体积缩小、间隙变大,且多数细胞轮廓消失、变圆,贴壁不良;细胞迁移率和Bcl-2蛋白的相对表达水平均显著降低,细胞凋亡率和Bax、Caspase-3及Cleaved Caspase-3蛋白的相对表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:木香烃内酯能抑制人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖和迁移,诱导其凋亡,其作用机制可能与上调Bax、Caspase-3和Cleaved Caspase-3表达,下调Bcl-2表达有关。

木香烃内酯对乳腺癌SK-BR-3细胞周期分布及凋亡的影响

目的:研究木香烃内酯(COS)对人乳腺癌SK-BR-3细胞周期分布及凋亡的影响,并探讨其机制。方法:将人乳腺癌SK-BR-3细胞分为空白对照组和COS10、20、30、40、50μmol/L组,用MTT法检测COS对细胞增殖的影响。另将细胞分为空白对照组和COS低、中、高浓度组(10、20、30μmol/L),培养24h后,采用流式细胞仪检测细胞周期分布情况,采用Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡情况,采用Westernblot法检测抑癌因子p53、胱天蛋白酶3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(p21)、周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)和细胞周期蛋白E(cyclinE)蛋白的表达情况。结果:与空白对照组比较,COS可显著抑制SK-BR-3细胞的增殖(P<0.05或P<0.01),且呈浓度和时间依赖趋势。低、中、高浓度的COS均可诱导细胞凋亡并阻滞细胞周期于G1/S期(P<0.05或P<0.01);并可显著上调p53、caspase-3、Bax、p21蛋白的表达(P<0.05或P<0.01),显著下调Bcl-2、CDK2、cyclinE蛋白的表达(P<0.01)。结论:COS能抑制人乳腺癌SK-BR-3细胞的增殖,并诱导细胞凋亡和周期阻滞;其作用机制可能与调控p53/Bax/Bcl-2/caspase-3凋亡信号通路有关。

两种培养方法用于乳腺癌SK-BR-3细胞克隆形成实验的对比研究

目的观察平板克隆形成实验(PCF)和软琼脂克隆形成实验(SACF)用于乳腺癌SK-BR-3细胞学研究的价值。方法接种1×103～6×104个细胞于12.5 cm2培养瓶(设4个平行样本),分别利用PCF和SACF培养,计数形成克隆数、计算克隆形成率。结果 PCF克隆形成率为0.50%～10.64%,其中接种密度≥1.6×103/cm2者细胞间迅速汇合、难以分辨形成的克隆;SACF克隆形成率为0%～0.33%,接种密度<6.4×102/cm2者无克隆形成。PCF克隆形成率显著高于SACF(P<0.05)。结论检测SK-BR-3细胞对药物或其他治疗方式的敏感性时采用PCF优于SACF。

重组人血管内皮抑素与紫杉醇不同给药方案对乳腺癌SK-BR-3细胞的生长作用

目的探讨重组人血管内皮抑素(恩度)与紫杉醇不同给药方案作用后,乳腺癌SK-BR-3细胞的生长变化,并对二者联合用药时间及剂量关系进行研究。方法 MTT法检测二者不同用药方案作用后对乳腺癌SK-BR-3细胞的生长抑制率,流式细胞仪检测乳腺癌细胞SK-BR-3的凋亡率。结果恩度、紫杉醇分别作用于乳腺癌SK-BR-3细胞48 h后的半数抑制浓度(IC50)分别为4. 18μg/ml、1. 08μg/ml。恩度单药组(1μg/ml、48 h)、紫杉醇单药组(1μg/ml、24 h)、同时给药组(恩度1μg/ml、48 h+紫杉醇1μg/ml、24 h)、先恩度(1μg/ml、48 h)后紫杉醇组(1μg/ml、24 h)和先紫杉醇(1μg/ml、24 h)后恩度组(1μg/ml、48 h),作用乳腺癌SK-BR-3细胞的抑制率分别为(28. 72±0. 08)%、(37. 41±1. 28)%、(59. 29±0. 64)%、(35. 68±1. 16)%和(40. 69±0. 88)%。恩度、紫杉醇单药组对乳腺癌SK-BR-3细胞均有明显的抑制作用(P <0. 05),同时给药组的抑制率高于其他组(P <0. 05)。恩度1μg/ml作用48 h后的细胞凋亡率为11. 6%(P <0. 05),Bcl-2表达下调,而Bax表达无明显改变。紫杉醇1μg/ml作用24 h后的细胞凋亡率为12. 4%,Bcl-2表达下调,而Bax表达则轻微升高。二者联合且同时给药后SK-BR-3细胞的凋亡率为22. 74%,明显高于其他药物组,同时对Bcl-2表达下调作用明显增加。结论恩度与紫杉醇均对乳腺癌SKBR-3细胞的生长有抑制作用,恩度与紫杉醇均可诱导乳腺癌SK-BR-3细胞凋亡,二者同时给药产生的效果最佳。

重组人血管内皮抑素与紫杉醇联合应用对乳腺癌SK-BR-3细胞中VEGF表达的影响

目的探讨重组人血管内皮抑素(恩度)与紫杉醇联合应用对乳腺癌SK-BR-3细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法应用Western-blot法及免疫细胞化学法观察在不同给药方案下乳腺癌SK-BR-3细胞中VEGF表达的情况。结果恩度单药与紫杉醇单药均能下调SK-BR-3细胞中VEGF的表达,而紫杉醇单药下调VEGF的表达作用较为明显(P <0. 05)。二者序贯给药及同时用药均能下调VEGF的表达,而同时给药下调最为明显(P <0. 05)。结论恩度与紫杉醇联合应用均能够抑制VEGF的表达,同时给药抑制显著。

柴胡皂苷D对人乳腺癌SK-BR-3细胞株增殖与凋亡的影响

目的:探讨柴胡皂苷D对人乳腺癌SK-BR-3细胞株增殖与凋亡的影响。方法:设置对照组、150 mg·L-1柴胡皂苷D组、100 mg·L-1柴胡皂苷D组、50 mg·L-1柴胡皂苷D组和25 mg·L-1柴胡皂苷D组,采用CCK-8实验方法检测柴胡皂苷D对人乳腺癌SK-BR-3细胞株增殖的影响;采用流式细胞术检测柴胡皂苷D对人乳腺癌细胞株SK-BR-3的细胞周期及细胞凋亡的影响。结果:柴胡皂苷D各浓度组细胞存活率分别为(85.3±4.13)%、(68.85±3.85)%、(45.28±3.25)%、(23.51±2.23)%,与对照组相比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。柴胡皂苷D各浓度组G1期细胞比例分别为(58.23±2.21)%、(55.51±2.34)%、(45.67±3.23)%、(33.55±4.12)%,S期细胞的比例分别为(12.67±2.32)%、(10.34±2.45)%、(8.23±3.12)%、(7.34±3.98)%,G2期细胞所占的比例分别为(29.10±2.25)%、(34.15±3.45)%、(46.10±3.01)%、(59.11±2.34)%。柴胡皂苷D各浓度组G2期细胞所占比例与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。柴胡皂苷D各浓度组细胞凋亡率分别为(9.00±1.35)%、(20.20±1.45)%、(38.50±2.50)%、(50.25±3.75)%,均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:柴胡皂苷D可明显阻滞SK-BR-3细胞株的增殖,将SK-BR-3细胞株的细胞周期阻滞于G2期,以促进该细胞的凋亡。

慢病毒介导下干涉酪氨酸激酶B表达对乳腺癌SK-BR-3细胞增殖的影响

目的 探讨慢病毒介导下干涉酪氨酸激酶B（TrkB）表达对乳腺癌细胞SK-BR-3增殖的影响及其作用机制.方法 对MCF-7、BCAP-37、SK-BR-3和MDA-MB231乳腺癌细胞进行筛选,选取TrkB表达水平相对较高的细胞进行慢病毒感染以干涉TrkB表达,构建稳定干涉TrkB的乳腺癌细胞系Lv-sh-TrkB,通过蛋白质印迹（Western blot）实验检测TrkB干涉效果,同时构建乱序干涉细胞系Lv-scramble.采用噻唑蓝方法、流式细胞仪检测干涉TrkB后细胞的增殖情况以及细胞周期变化.结果 4株乳腺癌细胞中,SK-BR-3细胞TrkB表达水平相对较高,通过慢病毒感染SK-BR-3细胞后筛选稳定干涉TrkB表达的细胞株Lv-sh-TrkB,Western blot实验结果表明,Lv-sh-TrkB细胞中TrkB表达水平明显低于空白对照和Lv-scramble 细胞.细胞增殖检测表明Lv-sh-TrkB细胞增殖速度明显低于空白对照和Lv-scramble细胞;流式细胞仪检测细胞周期结果显示Lv-sh-TrkB细胞发生G1期阻滞,空白对照、Lv-scramble和Lv-sh-TrkB细胞G1期比例分别为61％、62％和78％.结论 干涉TrkB基因后乳腺癌细胞SK-BR-3增殖受到明显抑制,细胞周期发生G1期阻滞.

海兔素对人乳腺癌SK-BR-3细胞的抑制作用及机制研究

本文阐述了海兔素(Aplysin)对人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖和凋亡的影响,并探讨了其可能的作用机制。分别采用CCK-8法和流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法测定不同剂量海兔素对SK-BR-3细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,并以Western blot测定SK-BR-3细胞中EGFR、Akt及ERK表达水平和磷酸化水平。结果发现,20、30、40、45、50、55、60 mg/L海兔素处理SK-BR-3细胞24 h后,细胞的生长增殖明显受到抑制,呈量效依赖性,其IC25和IC50值为分别为29.4和33.7 mg/L;IC25和IC50剂量海兔素可明显诱导细胞凋亡,并下调SK-BR-3细胞EGFR、Akt及ERK的磷酸化蛋白表达水平,但是不影响总蛋白表达水平。表明海兔素对人乳腺癌SK-BR-3细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用,其作用机制可能与海兔素抑制细胞中EGFR蛋白磷酸化,进而阻断下游效应分子Akt和ERK的活化有关。

抑制葡萄糖调节蛋白78表达对阿霉素诱导人乳腺癌SK-BR-3细胞凋亡的增敏作用

目的:探讨特异性下调葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对阿霉素(adriamyc in,ADR)诱导人乳腺癌SK-BR-3细胞凋亡的影响,以期为乳腺癌化疗提供新的靶点。方法:培养人乳腺癌SK-BR-3细胞,用ADR(1 mg/L)处理人乳腺癌SK-BR-3细胞0、6、12、24、36 h,W estern b lot检测GRP78的表达;ADR处理SK-BR-3细胞48 h后,用溴化丙啶染色测定细胞凋亡率;用小分子干扰RNA siRNA预处理SK-BR-3细胞,再予ADR同上处理,检测细胞凋亡率,比较siRNA作用前后细胞凋亡率的变化。结果:ADR可诱导内质网应激,上调GRP78的表达,SK-BR-3细胞对ADR诱导的细胞凋亡率<30%;siRNA可明显阻断GRP78的表达,显著增加ADR诱导的细胞凋亡作用,凋亡率达到(62.30±0.88)%(P<0.01)。结论:抑制GRP78的表达可增强人乳腺癌SK-BR-3细胞对ADR经内质网应激途径诱导细胞凋亡的敏感性,促进肿瘤细胞的凋亡,增强其抗肿瘤作用。

山慈菇含药血清对人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖、凋亡以及迁移能力影响的实验研究

目的观察山慈菇含药血清对人乳腺SK-BR-3细胞增殖、凋亡以及迁移能力的影响。方法选用20只SD雌性大鼠,2月龄,体重(200±20)g,使用随机数字表法将大鼠随机分为实验组和空白对照组,每组10只,实验组大鼠按0.01 mL/g灌胃山慈菇浓煎剂,对照组大鼠给予等体积的生理盐水,每日灌胃1次,连续6d,末次灌胃后,腹主动脉取血,制作含药血清;同时培育人乳腺癌SK-BR-3细胞。使用MTT法检测人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖情况、荧光显微镜观察SK-BR-3凋亡情况以及划痕试验检测SK-BR-3细胞迁移情况。结果与对照组比较,实验组能够明显抑制人乳腺癌SK-BR-3细胞的增殖、诱导细胞凋亡以及延缓人乳腺癌SK-BR-3细胞向划痕中央聚集。结论山慈菇含药血清能够有效抑制人乳腺癌SK-BR-3细胞活性,并加速细胞凋亡以及延缓细胞的迁移能力。

联合应用重组人血管内皮抑素与紫杉醇对乳腺癌细胞株SK-BR-3诱导凋亡作用研究

目的:观察重组人血管内皮抑素(恩度)与紫杉醇联合用药作用于乳腺癌细胞株SK-BR-3后的生长情况及凋亡率。方法:光学显微镜下观察细胞生长状况,流式细胞仪检测乳腺癌细胞SKBR-3的凋亡率,Realtime PCR法观察凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax的表达。比较不同给药方案对乳腺癌细胞SK-BR-3的诱导凋亡作用。结果:恩度1μg/m L作用48h后的细胞凋亡率为11.6%(P<0.05),Bcl-2表达下调,而Bax表达无明显改变。紫杉醇1μg/m L作用24h后的细胞凋亡率为12.4%(P<0.05),Bcl-2表达下调,而Bax表达则相对升高。紫杉醇与恩度分别先后序贯给药,凋亡率分别为16.50%和14.18%(P<0.05),且能够使Bcl-2表达下调,Bax表达升高。二者联合且同时给药后SK-BR-3细胞的凋亡率为22.74%,明显高于其他给药组(P<0.05),同时对Bcl-2表达下调明显且Bax表达升高。结论:恩度与紫杉醇均可抑制乳腺癌细胞SK-BR-3的生长,且对细胞凋亡有诱导作用。二者同时给药产生的效果最佳。

不同质量浓度磁性c-erbB-2反义探针对SK-Br-3肿瘤细胞株形态及表达的影响

目的探讨不同质量浓度磁性c-erbB-2反义探针转染乳腺癌SK-Br-3细胞株后,对其形态及表达的影响。方法将反义探针含铁质量浓度分别定为5、10、25、50、100 mg/L,转染乳腺癌SK-Br-3细胞24 h。采用普鲁士蓝染色并在光学显微镜及透射电镜下直接观察细胞铁颗粒,原子吸收光谱法测定细胞内铁含量,台盼蓝排除实验、CCK-8试剂盒观察细胞活性,Western blot法检测蛋白质表达,磁共振成像研究信号强度的变化。结果 SK-Br-3细胞对反义探针在一定质量浓度范围内(5、10、25 mg/L)呈依赖式摄取。当探针质量浓度为25 mg/L时,细胞内铁含量为(18.38±0.28)pg,细胞活力、存活率及细胞内c-erbB-2蛋白表达量明显降低(P均<0.05),磁共振扫描图像显示该组细胞T2值出现明显降低(P<0.05)。50及100 mg/L组各项结果与25 mg/L组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论当磁性c-erbB-2反义探针质量浓度为25 mg/L时,可有效转染并特异性抑制SK-Br-3细胞株的表达,并被磁共振成像所检测。

下调lncRNA LINC00263靶向miR-4458调控乳腺癌SK-BR-3细胞放射敏感性

目的研究下调lncRNA LINC00263靶向miR-4458对乳腺癌SK-BR-3细胞增殖、运动、侵袭及放射敏感性影响。方法qRT-PCR方法分别检测乳腺癌组织、癌旁组织、正常乳腺上皮细胞和乳腺癌细胞中LINC00263表达差异。SK-BR-3细胞中转染LINC00263shRNA下调LINC00263表达,克隆实验检测放射敏感性。SK-BR-3细胞给予6Gy照射处理,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术检测凋亡,Transwell小室检测细胞运动和侵袭,蛋白印迹法检测C-Caspase-3、C-Caspase-9、MMP-2、MMP-9蛋白表达。生物信息学软件预测LINC00263和miR-4458有互补结合位点,荧光素酶报告系统测定二者的靶向关系。在SK-BR-3细胞中共转染LINC00263shRNA和miR-4458 inhibitor,给予6Gy照射处理,检测细胞增殖、运动、侵袭和凋亡变化。结果乳腺癌组织中LINC00263表达水平高于癌旁组织。乳腺癌细胞中LINC00263表达水平高于正常乳腺上皮细胞。转染LINC00263shRNA以后的SK-BR-3细胞放射敏感性增加。转染LINC00263shRNA和放射联合具有协同作用,共同抑制细胞增殖、运动、侵袭,促进细胞凋亡,提高细胞中C-Caspase-3、C-Caspase-9蛋白表达水平,降低细胞中MMP-2、MMP-9蛋白表达水平。下调LINC00263靶向促进miR-4458表达。miR-4458 inhibitor逆转LINC00263shRNA联合放射对SK-BR-3细胞增殖、运动、侵袭的抑制作用和凋亡促进作用。结论下调lncRNA LINC00263靶向miR-4458抑制SK-BR-3细胞增殖、运动、侵袭,提高细胞放射敏感性。

他莫昔芬对乳腺癌SK-BR-3细胞侵袭能力的影响及其机制

目的探讨他莫昔芬(tamoxifen,TAM)对乳腺癌SK-BR-3细胞侵袭能力的影响及其作用机制。方法收集处于对数生长期的乳腺癌SK-BR-3细胞,利用不含血清的RPMI 1640培养基培养24 h,然后将其消化重悬,接种至6孔板中(每孔1 ml,1×105/ml),分为对照组(无血清RPMI 1640培养基)和TAM(0.5、2.5、12.5 mol/L)3组(无血清RPMI 1640培养基)。给药刺激24 h后,采用Western blot法检测各组SK-BR-3细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotein-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)及血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达水平,采用划痕实验和Transwell法检测SK-BR-3细胞的侵袭能力。结果划痕实验和Transwell实验结果显示,TAM(0.5、2.5、12.5 mol/L)3组SK-BR-3细胞的侵袭能力相对数均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),且随着TAM浓度的增加SK-BR-3细胞的侵袭能力逐渐增强;Western blot检测结果表明,TAM各组SK-BR-3细胞中VEGF、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平均明显高于对照组,且随着TAM浓度的增加SK-BR-3细胞中VEGF、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平逐渐升高。结论他莫昔芬可使乳腺癌SK-BR-3细胞侵袭能力的提高,其机制与增加SK-BR-3细胞中VEGF、MMP-2、MMP-9等蛋白表达有关。

磁性c-erbB2反义探针对SK-Br-3肿瘤细胞株形态及表达的影响

目的:探讨磁性c-erbB2反义寡脱氧核苷酸探针对SK-Br-3肿瘤细胞株形态及表达的影响,阐明该探针是否同时具有诊断与治疗功能。方法:磁性c-erbB2反义探针转染高表达c-erbB2的SK-Br-3肿瘤细胞作为实验组,磁性c-erbB2反义探针转染Fuda肿瘤细胞株、SPIO及ASODN转染SK-Br-3肿瘤细胞、未转染的SK-Br-3肿瘤细胞设置为4个对照组,普鲁士蓝染色光镜观察细胞内铁的分布,透射电镜观察其超微结构,并检测细胞cerbB2蛋白表达变化及铁含量,行体外MR成像。结果:光镜显示SK-Br-3肿瘤细胞胞浆内散在分布铁颗粒,透射电镜观察到SK-Br-3肿瘤细胞胞浆内铁颗粒、团状吞饮体,细胞出现胞膜空泡化、细胞固缩、核固缩及凋亡小体,而对照组细胞无上述改变;与对照组比较,实验组SK-Br3细胞蛋白的表达抑制率明显升高,细胞铁含量增加(P<0.01),MR扫描显示信号减低(P<0.05)。结论:磁性c-erbB2反义探针能够顺利进入SK-Br-3肿瘤细胞,不仅能导致SK-Br-3细胞的凋亡,还能够被体外MR成像所检测,可能成为一种具有治疗与诊断意义的双功能探针。

PDGF-BB对SK-BR-3乳腺癌细胞迁移、增殖的影响

目的观察血小板源性生长因子(PDGF)-BB对乳腺癌SK-BR-3细胞迁移、增殖的促进作用。方法分别以0.5、1、2、4 ng/mL质量浓度的PDGF-BB干预对数期SK-BR-3乳腺癌细胞,细胞计数法和內盐法(MTS)检测细胞增殖情况,细胞迁移试验检测细胞迁移能力。结果与未加入任何药物的SK-BR-3乳腺癌细胞相比,4 ng/mL的PDGF-BB对SK-BR-3乳腺癌细胞的迁移及增殖有明显促进作用,该促进作用与药物质量浓度呈正相关。结论在一定质量浓度范围内,PDGF-BB能明显促进人源性SK-BR-3细胞的迁移和增殖。

小干扰RNA沉默己糖激酶2对人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的在体外研究小干扰RNA(siRNA)沉默己糖激酶2(HK2)对人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法在SK-BR-3细胞中分别转染siRNA阴性、siHK2-A和siHK2-B,分别采用荧光定量PCR和Western Blot法检测HK2 mRNA和蛋白的表达水平;MTT法检测细胞的增殖;Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭;葡萄糖检测试剂盒检测细胞对葡萄糖的摄取。结果与阴性对照组比较,siHK2能显著降低SK-BR-3细胞的HK2 mRNA及蛋白水平,抑制细胞增殖、迁移和侵袭能力,减少细胞对葡萄糖的摄取。结论 siHK2可能通过降低葡萄糖摄取来抑制SK-BR-3细胞的增殖、迁移和侵袭。

PROM2通过β-catenin/HER2通路调控乳腺癌细胞SK-BR-3的迁移、侵袭、增殖和凋亡

乳腺癌是当今威胁女性健康最主要的恶性肿瘤之一。虽然当前在乳腺癌的诊治方面获得了一定的进展,但其发病率和死亡率仍然较高,寻找有效的乳腺癌预后标记和治疗靶点是当前研究的热点。本研究通过对高通量基因表达数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)分析发现,Prominin 2(PROM2)在诱导、增强和增殖成瘤能力的3组MCF7乳腺癌细胞中的表达,高于3组对照组MCF7细胞。且在诱导具有侵袭性的MCF10A细胞中的表达,高于未处理非侵袭性MCF10A细胞。研究选择了人乳腺癌细胞系SK-BR-3,成功地将过表达或敲减PROM2质粒转染到细胞中,并检测PROM2对SK-BR-3细胞的迁移、侵袭和增殖和凋亡的作用。划痕结果显示,敲减PROM2的SKBR-3细胞愈合面积更小(P<0.01),过表达PROM2的SK-BR-3细胞愈合面积更大(P<0.01);Transwell的结果显示,敲减PROM2的SK-BR-3细胞侵袭数量更少(P<0.01),过表达PROM2的SK-BR-3细胞侵袭数量更多(P<0.01);流式细胞术的结果显示,敲减PROM2的SK-BR-3细胞增殖能力减弱且凋亡比率增高(2.50%vs.0.93%),过表达PROM2的SK-BR-3细胞增殖能力增强且凋亡比率降低(0.43%vs.0.72%)。然后,探讨PROM2作用的可能机制。通过基因表达谱交互分析(gene expression profiling interactive analysis,GEPIA),对肿瘤基因图谱数据库(The Cancer Genome Atlas,TCGA)中的乳腺癌数据分析发现,PROM2与β-联蛋白(β-catenin)、人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)之间表达正相关。通过定量实时聚合酶链反应、免疫荧光和蛋白质印迹也发现,PROM2促进了β-联蛋白和HER2的表达。证明PROM2可能通过激活β-catenin/HER2通路,促进乳腺癌细胞SK-BR-3的迁移、侵袭和增殖,并抑制其凋亡。