皮肤鳞状细胞癌组织微RNA-103a-2-5p、钙黏附蛋白11表达及其临床意义

目的分析皮肤鳞状细胞癌组织中微RNA-103a-2-5p(miR-103a-2-5p)和钙黏附蛋白11(CDH11)的表达水平,探讨二者在临床研究中的意义。方法选取2017年1月至2019年6月宝鸡市人民医院诊治的98例皮肤鳞状细胞癌病人为研究对象,收集病人术中切除的癌组织及癌旁正常组织。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测组织中miR-103a-2-5p的表达水平。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测CDH11表达水平。TargetScanHuman网站预测miR-103a-2-5p与CDH11的靶向关系;Pearson相关性分析癌组织中miR-103a-2-5p和CDH11水平的关系;Kaplan-Meier生存曲线分析miR-103a-2-5p、CDH11表达与皮肤鳞状细胞癌病人预后的关系;影响皮肤鳞状细胞癌病人预后的因素采用Cox回归分析;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析miR-103a-2-5p和CDH11的表达对皮肤鳞状细胞癌的诊断价值。结果与癌旁正常组织[1.03±0.12,(5.06±1.43)µg/L]相比,皮肤鳞状细胞癌组织miR-103a-2-5p表达水平(1.46±0.38)显著升高(P<0.05),CDH11表达水平[(2.96±0.62)µg/L]明显降低(P<0.05);TargetScanHu-man网址预测miR-103a-2-5p与CDH11间存在结合位点;经Pearson相关性分析,miR-103a-2-5p与CDH11水平呈负相关(P<0.05);两者均与病人病理分级、TNM分期、淋巴结转移、侵袭程度相关(P<0.05);miR-103a-2-5p高表达组和CDH11低表达组复发率显著高于miR-103a-2-5p低表达组和CDH11高表达组(P<0.05);TNM分期、淋巴结转移、miR-103a-2-5p是影响病人预后的危险因素(P<0.05),CDH11是影响病人预后的保护因素(P<0.05);miR-103a-2-5p、CDH11二者联合诊断皮肤鳞状细胞癌的ROC曲线下面积(AUC)为0.836,显著优于其各自单独诊断(P=0.018、0.021)。结论皮肤鳞状细胞癌病人miR-103a-2-5p表达水平升高,CDH11表达水平降低,二者均与病人临床病理特征及预后有密切关系,且二者联合可较好的诊断皮肤鳞状细胞癌。

miR-103a-3P调控PFK-2对结直肠癌细胞增殖及糖酵解的作用机制

目的探究微小RNA(miR)-103a-3P调控6-磷酸果糖激酶(PFK)-2对结直肠癌细胞增殖及糖酵解的作用机制研究。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测正常结肠上皮细胞及4种结直肠癌细胞系中miR-103a-3p、PFK-2表达水平,将阴性对照、miR-103a-3P、PFK-2类似物转染至结直肠癌细胞中,EdU法检测细胞增殖,葡萄糖检测试剂盒和乳酸检测试剂盒检测糖酵解相关指标,双荧光素酶报告实验证实miR-103a-3P和PFK-2的相互作用。结果结直肠癌细胞系中的miR-103a-3P、PFK-2 mRNA表达量显著高于正常结直肠癌上皮细胞系NCM460(P<0.05),其中HCT116的miR-103a-3P、PFK-2 mRNA升高最大(P<0.05),选其备用。与CC组相比,MN组及PN组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量无统计学差异(P>0.05),MI组、PI组、MP组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量明显降低(P<0.05)。与MN组相比,MM组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量明显升高(P<0.05)。与MM组相比,MI组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量明显降低(P<0.05)。与PN组相比,PM组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量明显升高(P<0.05)。与PM组相比,PI组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量明显降低(P<0.05);MI组与PI组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量无统计学差异(P>0.05)。与PI组相比,MP组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告结果显示,转染miR-103a-3P后可显著促进PFK-2-3′-UTR-WT的荧光素酶活性(P<0.05),但对突变基因无显著影响(P>0.05),且PFK-2与miR-103a-3P呈正相关。结论抑制miR-103a-3P表达可降低结直肠癌细胞增殖,并有效改善糖酵解,其作用机制可能与抑制PFK-2有关。

安神定志方对阿尔茨海默病细胞模型miR-103a-3p及Tau蛋白磷酸化的影响

目的观察安神定志方对阿尔茨海默病细胞模型miR-103a-3p及其介导的Tau蛋白磷酸化的影响,探讨其可能作用机制。方法采用β淀粉样蛋白_(25-35)诱导PC12细胞构建阿尔茨海默病体外模型,将细胞分为空白组、模型组、安神定志方组、过表达组和安神定志方+过表达组(联合组),采用安神定志方含药血清和miR-103a-3p模拟剂进行干预。流式细胞仪检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量,RT-qPCR检测细胞miR-103a-3p mRNA表达,Western blot检测细胞脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶受体B(TrkB)、p-TrkB、Tau、p-Tau蛋白表达。结果与空白组比较,模型组PC12细胞各时点细胞活力明显降低,凋亡率明显增加,LDH活性和MDA含量明显增加,SOD和GSH-Px活性明显降低,miR-103a-3p mRNA表达明显升高,p-Tau蛋白表达明显升高,BDNF、p-TrkB蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,安神定志方组和联合组PC12细胞各时点细胞活力明显升高,凋亡率明显降低,LDH活性和MDA含量明显降低,SOD和GSH-Px活性明显增加,miR-103a-3p mRNA表达明显降低,p-Tau蛋白表达明显降低,BDNF、p-TrkB蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论安神定志方能通过下调miR-103a-3p表达激活BDNF/TrkB信号通路,从而抑制Tau蛋白磷酸化,发挥对PC12细胞的保护作用。

天然小分子HEP-14抗黑色素瘤细胞SK-Mel-103的作用研究

目的初步探讨天然小分子HEP-14对黑色素瘤SK-Mel-103细胞的抑制作用及相关机制。方法用不同浓度的HEP-14(2.5~40μmol/L)处理黑色素瘤SK-Mel-103细胞后,CCK-8和平板克隆形成实验检测细胞的存活率和克隆的形成,流式细胞术检测细胞周期变化和细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移能力,RT-qPCR检测CD271和STAT3基因水平的表达,Western blot检测CD271、STAT3、p-STAT3蛋白水平的表达,细胞免疫荧光检测进一步证实CD271在细胞内的表达。结果与对照组比较,天然小分子HEP-14能有效抑制SK-Mel-103细胞的生长和克隆的形成(P<0.05),诱导细胞G2/M期阻滞(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05)和抑制细胞的迁移。HEP-14显著抑制SK-Mel-103、SK-Mel-147和SK-Mel-28细胞STAT3的磷酸化(P<0.05),下调CD271的表达(P<0.05)。结论天然小分子HEP-14能有效抑制黑色素瘤细胞生长并诱导其凋亡;可能通过抑制STAT3的激活下调CD271的表达,从而抑制黑色素瘤细胞的迁移。

微RNA-103a-3p靶向调节Kazal基序富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白表达对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的探讨胃癌细胞中微RNA(miR)-103a-3p与Kazal基序富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(RECK)表达的关系及其对胃癌细胞迁移、侵袭能力的影响。方法将对数生长期人胃癌细胞系MKN-45细胞随机分为阴性对照(NC)组、miR-103a-3p组、RECK组、miR-103a-3p+RECK组。NC组细胞共转染miR-103a-3p-NC(miR-NC)和pCDH空表达载体,miR-103a-3p组细胞共转染miR-103a-3p模拟物(miR-103a-3p mimics)和pCDH空表达载体,RECK组细胞共转染miR-NC和含RECK的pCDH表达载体(pCDH-RECK),miR-103a-3p+RECK组细胞共转染miR-103a-3p mimic和pCDH-RECK。采用划痕试验检测各组细胞的迁移能力,采用Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力,采用Western blot法检测各组细胞中RECK蛋白相对表达量。应用Starbase数据库通过生物信息分析预测miR-103a-3p与RECK的3′非翻译区(3′-UTR)是否存在结合位点,构建含有预测结合位点的野生型(Wt)、突变型(Mt)RECK 3′-UTR片段的荧光素酶报告基因载体Wt-RECK和Mt-RECK,使用脂质体2000将Wt-RECK或Mt-RECK载体与miR-NC或miR-103a-3p mimics共转染入MKN-45细胞,将转染后的细胞设为miR-NC+Wt-RECK组、miR-103a-3p+Wt-RECK组、miR-NC+Mt-RECK组、miR-103a-3p+Mt-RECK组,使用双荧光素酶检测试剂盒检测4组细胞的相对荧光素酶活性。结果4组细胞的划痕愈合率、侵袭细胞数比较差异有统计学意义(F=16.044、60.975,P<0.05);RECK组细胞划痕愈合率显著低于NC组,miR-103a-3p组细胞划痕愈合率显著高于RECK组,miR-103a-3p+RECK组细胞划痕愈合率显著低于miR-103a-3p组(P<0.05);miR-103a-3p组、miR-103a-3p+RECK组与NC组细胞划痕愈合率比较差异无统计学意义(P>0.05);RECK组与miR-103a-3p+RECK组细胞划痕愈合率比较差异无统计学意义(P>0.05)。RECK组侵袭细胞数显著少于NC组,miR-103a-3p组侵袭细胞数显著多于NC组(P<0.05);miR-103a-3p组、miR-103a-3p+RECK组侵袭细胞数显著多于RECK组(P<0.05);miR-103a-3p+RECK组侵袭细胞数显著少于miR-103a-3p组(P<0.05);NC组与miR-103a-3p+RECK组侵袭细胞数比较差异无统计学意义(P>0.05)。4组细胞中RECK蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=33.473,P<0.05);RECK组细胞中RECK蛋白相对表达量显著高于NC组,miR-103a-3p组、miR-103a-3p+RECK组细胞中RECK蛋白相对表达量显著低于RECK组(P<0.05);NC组与miR-103a-3p组、miR-103a-3p+RECK组细胞中RECK蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);miR-103a-3p组与miR-103a-3p+RECK组细胞中RECK蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。Starbase数据库预测显示,miR-103a-3p与RECK的3′UTR存在结合位点。miR-NC+Wt-RECK组、miR-NC+Mt-RECK组、miR-103a-3p+Mt-RECK组细胞的相对荧光素酶活性显著高于miR-103a-3p+Wt-RECK组(P<0.05);miR-NC+Wt-RECK组、miR-NC+Mt-RECK组、miR-103a-3p+Mt-RECK组细胞的相对荧光素酶活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-103a-3p可能通过靶向抑制RECK的表达而促进胃癌细胞的侵袭和迁移。

微小RNA-103a-3p通过肿瘤蛋白53调控凋亡抑制剂1/P53对骨质疏松症的影响

目的探讨微小RNA(miR)-103a-3p调控细胞肿瘤蛋白53调控凋亡抑制剂1(TRIAP1)对成骨细胞分化以及去卵巢小鼠骨量的影响。方法MC3T3-E1细胞分为正常对照(NC)组、miR-103a-3p-NC组、miR-103a-3p模拟(mimc)组、miR-103a-3p mimic+TRIAP1-NC组、miR-103a-3p mimic+TRIAP1 mimic组。Real-time PCR检测细胞miR-103a-3p、TRIAP1、P53的mRNA表达,MTT法和流式细胞术检测细胞增殖及凋亡,免疫荧光染色和茜红素染色检测细胞骨架F-actin表达和矿化情况,ELISA检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性。24只雌性小鼠设为sham组、骨质疏松症(OP)组、miR-103a-3p antagonist-NC组和miR-103a-3p antagonist组,每组6只摘取双侧卵巢制备OP模型,sham组仅分离卵巢组织周围脂肪。测定骨组织miR-103a-3p、TRIAP1、P53、ALP、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的mRNA表达,microCT测定骨密度(BMD)、骨矿物质含量(BMC),HE染色观察骨组织病理改变。结果细胞转染miR-103a-3p mimic后,miR-103a-3p及P53表达升高、TRIAP1表达降低,细胞增殖降低、凋亡增加,F-actin表达减弱,钙结节数量减少,ALP活性降低(P<0.01);而在增加转染TRIAP1 mimic后,以上miR-103a-3p mimics导致的结果均得到显著逆转(P<0.01)。OP组小鼠骨组织miR-103a-3p、P53表达升高,TRIAP1、ALP、OCN、OPN基因表达降低,BMD、BMC降低,骨组织结构破坏(P<0.05);miR-103a-3p antagonist组小鼠骨组织miR-103a-3p及P53表达降低,TRIAP1、ALP、OCN、OPN基因表达升高,BMD、BMC升高,骨组织结构改善(P<0.05)。结论MiR-103a-3p可介导TRIAP1/P53抑制成骨细胞增殖及矿化,而miR-103a-3p拮抗治疗可减少OP小鼠骨量丢失。

龙胆苦苷通过抑制miR-103-3p表达促进成骨细胞成骨分化的研究

目的探讨龙胆苦苷(GPS)对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化的影响,分析其对miR-103-3p的调控作用。方法采用不同剂量GPS分别处理小鼠成骨细胞系MC3T3-E1,用MTT法检测细胞增殖活性;用qRT-PCR法检测miR-103-3p表达量;用qRT-PCR、Western blot法分别检测Runt相关转录因子2(RUNX2)、骨保护素(OPG)、骨钙素(OCN)表达量;用试剂盒检测碱性磷酸酶(ALP)活性。后续实验中设置anti-miR-NC组、anti-miR-103-3p组、GPS-H+miR-NC组、GPS-H+miR-103-3p组,比较各组细胞增殖活性、ALP活性及OPG、OCN、RUNX2蛋白和mRNA表达量。结果GPS处理后细胞增殖活性、ALP活性升高,OPG、OCN、RUNX2 mRNA及蛋白表达升高,miR-103-3p表达量降低,且呈剂量依赖性(P<0.05);与anti-miR-NC组比较,anti-miR-103-3p组细胞增殖活性、ALP活性和OPG、OCN、RUNX2 mRNA及蛋白表达水平均升高(P<0.05);与GPS-H+miR-NC组比较,GPS-H+miR-103-3p组细胞增殖活性、ALP活性和OPG、OCN、RUNX2 mRNA及蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论GPS可通过下调miR-103-3p表达促进MC3T3-E1细胞增殖、分化,miR-103-3p可能为GPS治疗骨折的潜在靶点。

组织驻留记忆T细胞在实体瘤治疗中的研究进展

血液循环中存在大量的免疫细胞,它们能够阻止病原微生物的感染和入侵,并在肿瘤防治中发挥重要作用。组织驻留记忆T细胞(TRM)是一个特殊的肿瘤浸润淋巴细胞亚群,能够无限期地驻留在组织中,对其同源抗原作出快速的免疫应答。TRM包括CD4^(+)和CD8^(+)两个亚群,均以表达CD69和CD103标记物为主要特征,通过产生杀伤性细胞因子等方式,激活固有免疫和适应性免疫应答。TRM在减缓肿瘤发生发展、抑制转移和降低肿瘤复发等方面的作用已在多种实体瘤中得到证实。为深入研究这些细胞的生物学特性和免疫机制,在查阅文献的基础上,梳理组织驻留记忆T细胞的基本生物学特征,综述CD8^(+)TRM细胞在乳腺癌、非小细胞肺癌和肝癌等实体瘤治疗中的作用和研究进展,旨在为肿瘤治疗提供新的策略和靶点。

miR-103靶向PTEN并激活PI3K/AKT通路促进肺癌细胞A549对达沙替尼耐药

目的:探讨miR-103靶向PTEN并激活PI3K/AKT信号通路促进肺癌细胞对达沙替尼(dasatinib,DASA)耐药的机制。方法:收集2014年4月至2018年1月昆明医科大学第一附属医院胸外科收治的资料完整的肺癌DASA耐药组织和不耐药组织各35例。采用q PCR实验检测miR-103在肺癌DASA耐药组织和细胞中的表达水平,同时,采用CCK-8、Transwell和Wb实验检测敲降miR-103对A549/DASA细胞增殖、迁移和上皮间质转化(EMT)的影响,双荧光素酶报告基因验证miR-103与PTEN的靶向关系。进一步采用CCK-8、Transwell和Wb实验检测miR-103通过PTEN-PI3K/AKT信号通路对A549/DASA细胞恶性生物学行为的影响。结果:miR-103在肺癌DASA耐药组织和A549/DASA细胞中均高表达(均P<0.01)。敲降miR-103可显著抑制A549/DASA细胞的增殖、迁移和EMT(P<0.05或P<0.01)。此外,双荧光素酶报告基因证实miR-103靶向作用PTEN并下调其表达水平(P<0.01)。进一步实验显示,过表达mi R-103通过靶向下调PTEN并激活PI3K/AKT信号通路进而显著促进A549/DASA细胞增殖、迁移和EMT(P<0.05或P<0.01),从而上调A549/DASA细胞对DASA的耐药性。结论:miR-103/PTEN/PI3K/AKT信号通路与肺癌DASA耐药性存在调控关系,敲降miR-103可逆转A549/DASA对DASA耐药。

lncRNA NEAT1/miR-103a/STAMBPL1轴对胃癌细胞增殖和侵袭的调控作用

目的探讨长链非编码RNA NEAT1(lncRNA NEAT1)在胃癌组织和细胞中的表达,以及其通过调控miR-103a/STAMBPL1轴对胃癌细胞增殖和侵袭的影响。方法采用qRT-PCR法检测胃癌组织及癌旁组织中lncRNA NEAT1的表达水平;采用qRT-PCR法检测人正常胃上皮GES-1细胞及胃癌细胞SGC-7901和BGC-823中lncRNA NEAT1的表达水平。胃癌细胞SGC-7901和BGC-823中分别转染si-NEAT1(si-NEAT1组)和si-NC(si-NC组)。采用CCK-8法和Transwell检测细胞增殖和侵袭;采用qRT-PCR和Western blot法分别测定胃癌细胞中miR-103a mRNA和STAMBPL1蛋白的表达变化。结果与癌旁正常组织或正常细胞GES-1相比,lncRNA NEAT1在胃癌组织及胃癌SGC-7901和BGC-823细胞中表达水平明显增加(P<0.05)。与si-NC组相比,si-NEAT1组中胃癌SGC-7901和BGC-823细胞增殖和侵袭能力明显减少(P<0.05),miR-103a mRNA水平增高以及STAMBPL1蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论lncRNA NEAT1在胃癌中可能通过调控miR-103a/STAMBPL1信号途径改变胃癌细胞增殖及侵袭的能力。

pEGFC1-IGFBP7诱导恶性黑素瘤SK-MEL-28细胞的凋亡

目的:构建胰岛素样生长因子结合蛋白7(insulin-like growth factor binding protein7,IGFBP7)表达质粒(pEGFC1-IGFBP7),研究IGFBP7对恶性黑素瘤细胞SK-MEL-28凋亡的影响。方法:构建pEGFC1-IGFBP7质粒,并将pEGFC1-IGFBP7质粒及空质粒分别转染入SK-MEL-28细胞,荧光显微镜观测细胞转染效率,Annexin-FITC/PI检测转染后SK-MEL-28细胞的凋亡。结果:成功构建pEGFC1-IGFBP7质粒,用Effectene试剂能将pEGFC1-IGFBP7质粒有效转染入SK-MEL-28细胞,转染效率达61%。流式细胞仪结果显示pEGFC1-IGFBP7可明显促进SK-MEL-28细胞凋亡,转染24h后的凋亡率达(28.4±2.57)%,转染空质粒及未转染组细胞凋亡率分别为(5.8±0.44)%和(6.4±0.71)%(F=406.138,P<0.05)。结论:pEGFC1-IGFBP7能有效诱导黑素瘤SK-MEL-28细胞凋亡,为IGFBP7为基础的黑素瘤基因治疗提供了实验依据。

PI-103在体外抗急性髓细胞白血病效应的实验研究

目的研究急性髓细胞白血病(AML)细胞PI3K-Akt-mTOR信号转导通路各基因的表达及PI-103在体外对AML细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法RT-PCR法检测AML细胞PI3K、Akt、mTOR mRNA的表达;四甲基偶氮唑蓝法检测PI-103对AML细胞的增殖作用;流式细胞仪检测PI-103对AML细胞的凋亡率和细胞周期的影响。结果①81.25%的AML患者表达PI3K基因,87.5%的患者表达mTOR基因,50%的患者同时表达此两种基因。②PI-103能明显提高PI3K-Akt-mTOR信号通路持续活化的AML细胞的增殖抑制率和凋亡率、阻滞细胞于G0/G1期(P均<0.05),且与剂量显著相关(P均<0.05)。结论大部分AML患者存在PI3K-Akt-mTOR信号转导通路的异常活化;PI-103可通过PI3K、mTOR信号通路抑制AML细胞增殖、促进其凋亡。

miR-103通过抑制MED26的表达促进小细胞肺癌细胞的增殖

目的:研究miR-103对小细胞肺癌细胞增殖的影响及其作用机制。方法:Real-time PCR法检测miR-103在人小细胞肺癌组织和细胞中的表达。将miR-103 inhibitor转染到人小细胞肺癌细胞中,通过CCK8实验检测小细胞肺癌细胞的增殖活性。Real-time PCR和Western blotting检测转染miR-103 inhibitor后小细胞肺癌细胞中MED26 mRNA和蛋白的表达变化。通过双萤光素酶报告基因验证miR-103与MED26的作用机制。结果:miR-103在小细胞肺癌组织和人小细胞肺癌细胞系NCI-H1688中的表达均高于癌旁组织和对照细胞系。转染miR-103 inhibitor后小细胞肺癌细胞的增殖活性显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Real-time PCR和Western blotting结果显示,转染miR-103 inhibitor后小细胞肺癌细胞中MED26的mRNA表达水平高于对照组。双萤光素酶报告基因实验结果显示,与对照组相比,转染miR-103mimics的实验组中MED26 3'-UTR报告基因活性显著降低(P<0.05)。转染MED26后能显著抑制小细胞肺癌细胞增殖活性。结论:miR-103可以通过抑制MED26的表达来促进小细胞肺癌细胞的增殖。

LncRNA FGD5-AS1靶向miR-103a-3p对IL-1β诱导的关节软骨细胞凋亡的机制研究

目的探讨LncRNA FGD5-AS1靶向miR-103a-3p对IL-1β诱导的关节软骨细胞损伤及细胞凋亡的影响与分子机制。方法体外培养大鼠关节软骨细胞,分为NC组、IL-1β组(IL-1β浓度为10 ng/mL)。采用qRT-PCR检测细胞中FGD5-AS1、miR-103a-3p的表达水平。分别将pcDNA-FGD5-AS1、miR-103a-3p mimics转染至软骨细胞,随后使用IL-1β处理48 h。采用ELISA检测IL-6、TNF-α、IL-8水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证FGD5-AS1与miR-103a-3p的靶向关系;Western blot检测Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3、p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达量。结果与NC组相比,IL-1β组软骨细胞中FGD5-AS1的表达水平显著降低(P<0.05),miR-103a-3p、Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3的表达水平显著升高(P<0.05),IL-6、TNF-α、IL-8水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05);FGD5-AS1过表达后可明显降低IL-6、TNF-α、IL-8、p-NF-κB p65、p-IκBα水平(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.05),抑制Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3表达(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实FGD5-AS1靶向结合miR-103a-3p并可负向调控miR-103a-3p的表达(P<0.05);miR-103a-3p过表达可明显逆转FGD5-AS1过表达对细胞凋亡及炎症反应的抑制作用(P<0.05)。结论LncRNA FGD5-AS1可通过靶向负调控miR-103a-3p的表达从而抑制IL-1β诱导的关节软骨细胞炎症反应及细胞凋亡,其作用机制可能通过抑制NF-κB信号通路激活有关。

miR-103通过抑制LATS2促进肝细胞肝癌侵袭转移的机制

目的研究原发性肝癌中miR-103的表达及对肝癌细胞系转移能力的影响。方法 RT-PCR检测miR-103在肝癌组织及肝癌源性细胞系中的表达。分别转染miR-103 mimic至L02细胞、转染miR-103抑制剂至HepG2细胞,CCK8法检测miR-103对细胞增殖的影响,TUNEL法检测miR-103对细胞凋亡的影响,Transwell实验检测miR-103对肿瘤细胞侵袭和转移的影响。生物信息学分析miR-103的靶基因,western blot验证靶基因表达与rmiR-103的相关性。结果 miR-103在肝癌标本和肝癌源性细胞系中表达上调,miR-103可以促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,Transwell实验结果表明miR-103增加细胞侵袭和转移能力。生物信息学分析表明拉特抑癌基因同源分子2(LA,TS2)为miR-103的潜在靶基因。miR-103的表达与LATS2呈负相关。结论以上数据证明miR-103通过抑制LA,TS2促进肝细胞肝癌侵袭转移,miR-103/LA,TS2失调有可能成为治疗肝癌的新靶点。

^(103)pd诱导犬胆管增殖平滑肌细胞凋亡及对相关基因的影响

目的:探讨γ射线对胱冬肽酶-3(caspase-3),Fas和bcl-2基因在犬胆管壁增殖平滑肌细胞凋亡中的活性影响及意义. 方法:犬12只随机分2组,每组6只;建立胆管损伤后狭窄模型,在犬胆管内分别植入103pd(103钯)放射性支架和普通胆管支架,采用HE,TUNEL,RT—PCR, 免疫组化检测增殖内膜中胆管平滑肌细胞增殖、凋亡及相关caspase-3,bcl-2和Fas基因表达,在JEM- 1200EX电镜下观察凋亡细胞超微结构变化,并用计算机图像检测系统检2组胆管腔面积. 结果:103pd支架组犬胆管组织中caspase-3和Fas基因表达较普通支架组明显(0.44±0.09 vs 0.16±0.02, 83.33% vs 50.00%,P<0.05),出现明显增殖平滑肌细胞凋亡(87.90±7.96 vs 5.60±0.51,P<0.05)。肝外胆管无明显狭窄;而普通支架caspase-3和Fas基因低表达,胆管未出现增殖平滑肌细胞明显凋亡,而肝外胆管有明显狭窄.103pd支架组犬胆管组织中bcl-2基因表达较普通支架组弱(16.66%vs 83.33%,P<0.05), 且bcl-2基因低表达组犬胆管出现明显增殖平滑肌细胞凋亡,而且犬肝外胆管无明显狭窄;bcl-2基因高表达组犬胆管未出现增殖平滑肌细胞明显凋亡,而肝外胆管有明显狭窄. 结论:103pd放射性支架可以激活caspase-3和Fas基因, 促进犬胆管增殖平滑肌细胞凋亡;bcl-2基因表达水平与细胞对辐射的敏感性有关,103pd放射性支架通过降低bcl-2基因表达,促进犬胆管增殖平滑肌细胞凋亡,从而抑制犬肝外胆管狭窄.

miRNA103在高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化中的作用

目的观察微小RNA103(microRNA103,miR-103)在高磷诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化过程中的作用及机制。方法体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,将VSMCs随机分为正常组和高磷(HP)组(给予10 mmol/Lβ-甘油磷酸盐刺激),刺激4 d后,收集细胞。采用ELISA法测定VSMCs中碱性磷酸酶(ALP)的活性变化;采用邻甲酚酞络合酮比色法及茜素红染色检测VSMCs的钙化情况;采用qPCR测定VSMCs中miR-103及成骨转录因子Runx2的表达情况,Western blot检测Runx2蛋白表达情况。为进一步验证miR-103对VSMCs的作用,将细胞分为6组:正常组、NC inhi-bitor组、miR-103 inhibitor组、高磷组、NC mimic+HP组、miR-103 mimic+HP组,测定各组VSMCs钙化情况以及Runx2表达和ALP活性的变化。结果与正常组比较,高磷组大鼠VSMCs钙化增加(P<0.05),Runx2表达及ALP活性显著升高(P<0.05),而miR-103 RNA水平显著降低(P<0.05)。转染miR-103 inhibitor后,与正常组和NC inhibitor组比较,miR-103 inhibitor组VSMCs钙化增加,Runx2表达及ALP活性显著升高(均P<0.05);转染miR-103 mimic后,与高磷组和NC mimic+HP组比较,miR-103 mimic+HP组VSMCs钙化减少,Runx2表达及ALP活性显著降低(均P<0.05)。结论高磷可能是通过抑制miR-103表达,促进VSMCs表型转化,从而诱导VSMCs钙化。

^(103)钯支架诱导犬胆管增殖平滑肌细胞凋亡与防治胆管狭窄关系研究

目的探讨103钯(103Pd)放射性支架诱导犬胆管增殖平滑肌细胞凋亡与防治犬胆管损伤后胆管狭窄的关系。方法将12只犬随机均分为103Pd支架组和普通支架组,然后将103Pd放射性支架和普通支架分别植入2组犬的肝外胆管内,30d处死全部动物,取出胆管标本,用凝胶电泳和免疫组化染色进行凋亡细胞检测,并用计算机图像检测系统检侧两组胆管腔面积。结果103Pd支架组犬胆管组织中出现明显增殖平滑肌细胞凋亡,而且犬肝外胆管无明显狭窄;普通支架组犬胆管增殖平滑肌细胞凋亡不明显,而且犬肝外胆管有明显狭窄。结论103Pd放射性支架通过促进犬胆管增殖平滑肌细胞凋亡,从而抑制犬肝外胆管损伤后的胆管狭窄。

联合应用PI-103和AG1478抑制SH-SY5Y细胞增殖并促进其凋亡

目的观察联合应用PI-103和AG1478对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用。方法以m TOR拮抗剂PI-103、EGFR拮抗剂AG1478分别单独和联合处理SH-SY5Y细胞后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定不同浓度梯度的PI-103和AG1478对SH-SY5Y细胞增殖的影响并计算相应的半数抑制浓度(IC50),流式细胞术检测细胞凋亡,Hoechst-33528染色观察细胞凋亡的形态改变,Western blot检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白的水平变化。结果 PI-103和AG1478均能抑制SH-SY5Y细胞增殖且半数抑制浓度(IC50)分别为3.2μmol/L,215.5μmol/L。IC50浓度作用24h后,Hoechst-33528染色和流式细胞术分析显示,联合用药的细胞凋亡率远高于单一用药。Western blot检测单独用药后磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化核糖体蛋白S6激酶(p-p70s6k)表达水平降低,且联合用药后p-Akt和p-p70s6k的水平降低更明显。结论 PI-103和AG1478联合用药能提高肿瘤细胞死亡率,其抗肿瘤效果有协同效应。

^(103)钯放射性支架对Fas基因表达影响及与胆管癌细胞凋亡关系研究

目的探讨103钯(103Pd)放射性支架释放的γ射线对Fas表达的影响以及与胆管癌细胞凋亡的关系及意义。方法培养瓶中胆管癌细胞消化后形成细胞悬液,采用血细胞计数法计数细胞,按1×105/ml的浓度分装到2ml塑料冻存管中。分别设置普通支架组及103Pd支架组,应用TUNEL法和免疫组化染色方法检测γ射线诱导胆管癌细胞凋亡的情况和Fas表达的情况。结果103Pd支架组胆管癌细胞的Fas表达较普通支架组明显增高(P<0.05),且胆管癌细胞出现明显细胞凋亡,凋亡细胞数明显高于普通支架组(P<0.01)。结论Fas表达水平与胆管癌细胞凋亡的发生有关,103Pd放射性支架可能通过增强Fas表达,促进胆管癌细胞凋亡,从而为临床应用103Pd放射性支架治疗胆管癌提供理论依据。