LRIG3基因过表达对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC细胞生物学行为的影响

目的探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白3(LRIG3)基因过表达对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC细胞生物学行为的影响。方法体外培养人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC细胞,分成空白对照组(A组,不转染任何载体或质粒)、载体组(B组,转染载体)和LRIG3过表达组(C组,转染含LRIG3基因过表达质粒)。荧光定量PCR和免疫印迹法检测LRIG3、Cas⁃pase-3和Caspase-9的mRNA和蛋白表达水平。Transwell试剂盒检测细胞侵袭能力,AV-PI试剂盒检测细胞凋亡水平,CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力。结果C组Caspase-3和Caspase-9的mRNA和蛋白表达水平以及细胞凋亡率明显高于A组和B组(P<0.05),细胞增殖率和细胞侵袭能力明显低于A组和B组(P<0.05),而A组和B组之间均无统计学差异(P>0.05)。结论LRIG3过表达可以抑制人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC细胞增殖和侵袭,促进其凋亡,其机制可能与促进Caspase-3和Cas⁃pase-9表达有关。

四环素调控表达的反义bcl-2对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC生长和凋亡的作用

目的 研究由四环素调控的反义bcl 2的表达对人神经母细胞瘤细胞系SK N MC细胞的生长和凋亡的作用并初步探讨其相关机制。方法 非定向克隆构建携带反义bcl 2cDNA片段的由四环素调控表达的真核细胞表达载体PUCCOMB1CMV/Asbcl 2 ;应用脂质体LipofectamineTM 介导转染SK N MC细胞 ,同时以空载体转染细胞作为对照。MTT法研究细胞的生长和增殖状况 ,提取DNA梯带和应用流式细胞术检测凋亡细胞。逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)研究细胞凋亡中bcl xL/bcl xS 基因在mRNA水平上表达的变化。Western杂交检测bcl 2及其上下游相关基因caspase 3、PARP的变化。结果 转染反义bcl 2的细胞生长增殖缓慢 ,在去血清培养的相同的时间内其凋亡细胞数也明显多于对照组细胞 ,提前出现DNA梯带。在细胞的凋亡过程中检测到非活性caspase 3酶原蛋白减少并检测到bcl 2、PARP蛋白的降解产物条带。但bcl xL/bcl xS 基因在mRNA水平上表达无明显改变。结论反义bcl 2mRNA可抑制SK N MC细胞的生长和增殖 ,促进去血清培养所诱导的SK N MC细胞的凋亡。在细胞凋亡过程中caspase 3被激活 ,bcl 2和PARP蛋白被裂解 ,但bcl xL/bcl xS 在反义bcl 2mRNA诱导的SK N MC细胞的凋亡过程中无变化。

冬凌草甲素对神经母细胞瘤抗肿瘤的作用研究

目的在体内体外水平探讨冬凌草甲素(oridonin)对神经母细胞瘤的抗肿瘤作用。方法 CCK-8法检测冬凌草甲素对细胞增殖的影响;AO/EB双荧光染色后荧光显微镜观察细胞凋亡情况;免疫印迹检测细胞内活化的caspase-3和剪切的PARP表达水平;构建SHSY-5Y神经母细胞裸鼠异种移植瘤模型,Ki-67免疫组化染色分析冬凌草甲素对肿瘤组织增殖的影响。结果冬凌草甲素作用HSY-5Y和SK-N-MC细胞24h后,可以剂量依赖性抑制细胞增殖。不同浓度冬凌草甲素处理24h后AO/EB双荧光染色显示,随着药物浓度增加细胞凋亡明显增多。免疫印迹结果证实冬凌草甲素可以浓度依赖性增加活化的caspase-3和剪切的PARP蛋白的表达。冬凌草甲素处理组裸鼠移植瘤体积增量显著小于对照组,Ki-67免疫组化显示冬凌草甲素处理组肿瘤组织增殖细胞比率较对照组显著降低。结论冬凌草甲素可以抑制SHSY-5Y和SK-N-MC细胞增殖并诱导其凋亡,并在动物水平抑制裸鼠移植瘤的生长。