人心房肌KChlP2和SK2基因表达检测及方法研究

目的检测人心房肌KChIP2和SK2基因表达,并构建相应质粒标准品,为进一步研究基因功能奠定基础。方法提取人心房肌组织总RNA,采用RT-PCR方法获取KChIP2、SK2、GAPDH、β-actin目的片段,与pMD-18Tvector连接成重组质粒,转化到大肠杆菌DH5α中,通过PCR和测序鉴定。提取含目的基因的质粒作为标准品。采用Taqman探针法与SYBR Green I法分别检测人心房肌SK2与KChIP2基因表达和构建标准曲线。结果人心房肌存在KChIP2和SK2基因表达,质粒标准品经过PCR鉴定并测序,与Pubmed数据库完全一致,标准曲线线性关系好,相关系数R2>0.99。结论成功检测人心房肌KChIP2和SK2基因表达,构建的质粒标准品能用于后续实验。

小鼠SK2基因亚克隆的构建和鉴定(英文)

背景:小电导Ca2+激活钾(small conductance Ca2+-activated potassium channels,SK channels)通道存在于大多数可兴奋性细胞并在动作电位的复极化中发挥着重要作用。但SK通道与Ca2+及其他分子的偶合及调控途径尚未明确。目的:为观察SK2通道基因区段与Ca2+及其他分子的偶合及调控,构建pGBAT7和SK2基因片段重组子。方法:根据SK2基因的全长序列,设计3个SK2基因片段引物,经PCR扩增,测序鉴别后,分别亚克隆到酵母表达质粒pGBKT7。构建的pGBKT7-SK2亚克隆通过电转染法分别转染到酵母AH109菌中并被激活。pGBKT7-SK2亚克隆从酵母AH109菌中提取,电泳和测序鉴定。结果与结论:SK2目的基因PCR扩增产物分别为411,546,729bp。成功构建了3个含有411,546,729bp的pGBKT7-SK2亚克隆,电泳和测序鉴别表明构建的pGBKT7-SK2亚克隆完全符合设计要求。转染到酵母AH109菌中pGBKT7-SK2亚克隆可被激活,为探讨SK2通道与其他分子的功能相关提供了重要的物质基础。