蒽醌修饰物KA-4s抑制SKOV3/DDP细胞增殖并诱导铁死亡

目的:探讨蒽醌修饰物KA-4s在体外对人顺铂耐药卵巢癌SKOV3/DDP细胞增殖的影响和诱导细胞铁死亡的机制。方法:将SKOV3/DDP细胞分为对照组和不同浓度(2μmol/L、5μmol/L和7μmol/L)的蒽醌修饰物KA-4s组。采用MTT法检测单药KA-4s和顺铂(DDP)对SKOV3/DDP细胞活力的影响,划痕实验检测细胞的迁移能力,线粒体绿色荧光探针(Mito-Tracker Green)检测线粒体形态改变,透射电镜观察线粒体超微结构。以铁死亡诱导剂RSL3为阳性对照组,用DCFA-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,比色法检测细胞内总铁蛋白含量,western blotting检测铁死亡相关蛋白GPX4、FSP1的表达情况。结果:KA-4s和顺铂作用48 h后,卵巢癌SKOV3/DDP细胞增殖均明显受到抑制,相比顺铂,KA-4s的抑制作用更强(P<0.001),并能抑制细胞迁移。经KA-4s处理后线粒体受损,线粒体结构改变,膜密度增大,嵴减少甚至消失。与空白对照组相比,阳性RSL3组和KA-4s组SKOV3/DDP细胞内ROS水平升高(均P<0.001),5μmol/L KA-4s组总铁离子含量显著升高(P<0.001),卵巢癌SKOV3/DDP细胞中GPX4、FSP1蛋白的表达均降低(P<0.01),但正常卵巢IOSE80细胞中GPX4表达均无改变。结论:KA-4s能抑制SKOV3/DDP细胞增殖、迁移并诱导细胞铁死亡。

洛铂诱导顺铂耐药卵巢癌SKOV3/DDP细胞的凋亡

目的探讨洛铂体外诱导人卵巢癌顺铂耐药SKOV3/DDP细胞凋亡及其机制。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定不同浓度和时间洛铂对SKOV3/DDP细胞的生长抑制作用,并与其亲本细胞SKOV3(敏感株)相比较;进一步通过光镜及透射电镜观察SKOV3/DDP细胞的形态学改变;并采用流式细胞仪检测细胞周期变化。结果洛铂作用SKOV3/DDP细胞的增殖呈时间剂量依赖模式受到抑制,与SKOV3细胞相比,差异无统计学意义(P>0.05);一定浓度的SKOV3/DDP作用一定时间,可诱导SKOV3/DDP细胞发生凋亡;光镜和透射电镜下可见典型的凋亡细胞形态学改变;流式细胞技术分析发现洛铂作用首先引起细胞周期分布的改变,随用药时间的延长,凋亡率逐渐升高。结论洛铂通过诱导凋亡而抑制体外培养的SKOV3/DDP细胞生长,其机制可能与细胞G0/G1期阻滞有关。

雷公藤多苷增强耐顺铂人上皮性卵巢癌SKOV3/DDP细胞株顺铂敏感性的体外研究

目的:探讨雷公藤多苷(GTW)对耐顺铂人上皮性卵巢癌细胞株(SKOV3/DDP)的顺铂(DDP)增敏作用及机制。方法:将对数生长期的SKOV3/DDP细胞随机分为8组:空白对照组、10μg/mL DDP组、50μg/mL GTW组、800μg/mL GTW组、3 200μg/mL GTW组、10μg/mL DDP+50μg/mL GTW组、10μg/mL DDP+800μg/mL GTW组、10μg/mL DDP+3 200μg/mL GTW组,利用CCK-8法、流式细胞术、Western blot法检测各组细胞生长、细胞凋亡以及细胞谷胱甘肽S转移酶-π(GST-π)基因蛋白、P-糖蛋白(MDR1)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、p-STAT3的表达。结果:DDP与GTW联用在抑制SKOV3/DDP细胞生长作用上呈现相加效应;800、3 200μg/mL GTW分别与10μg/mL DDP联用后,可显著促进SKOV3/DDP细胞凋亡,下调p-STAT3的表达(P<0.05)。结论:GTW可显著增强SKOV3/DDP细胞对DDP的敏感性,其作用机制可能是下调STAT3信号通路中的p-STAT3表达。

柚皮苷逆转人卵巢癌耐药SKOV3/DDP细胞耐药性及逆转机制的研究

目的 研究柚皮苷对卵巢癌顺铂（DDP）耐药细胞SKOV3/DDP体外增殖的影响及耐药逆转作用,并初步探讨相关耐药机制。方法 采用MTT法测定DDP对SKOV3和SKOV3/DDP细胞的半数抑制浓度（IC_（50））,柚皮苷对SKOV3/DDP细胞的增殖抑制作用及柚皮苷联合DDP对SKOV3/DDP细胞的增殖抑制作用。筛选出非细胞毒性的柚皮苷浓度,将实验细胞分为空白对照组、2.5μg/ml DDP组、10μmol/L柚皮苷组、10μmol/L柚皮苷联合2.5μg/ml DDP组,分别采用RTPCR和Western blotting测定各组作用48 h后耐药基因MDR1 mRNA及MRP2 mRNA的表达及其相应的表达产物P-gp、MRP2蛋白的表达水平。结果 1-32μg/ml DDP处理SKOV3及SKOV3/DDP细胞48 h后,SKOV3细胞的IC_（50）为5.48μg/ml,SKOV3/DDP细胞为14.93μg/ml,耐药指数为2.72。柚皮苷对SKOV3/DDP细胞有明显的增殖抑制作用,且呈剂量和时间依赖性。选取10μmol/L柚皮苷作为逆转耐药实验浓度,10μmol/L柚皮苷联合DDP作用48 h后,SKOV3/DDP细胞对DDP的耐药指数为1.62,逆转倍数为1.68。RT-PCR及Western blotting检测显示,柚皮苷联合DDP组与DDP单药组比较,MDR1mRNA、MRP2 mRNA表达及P-gp、MRP2蛋白表达均明显下降,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 柚皮苷对卵巢癌SKOV3/DDP细胞的体外增殖具有明显抑制作用,并能逆转SKOV3/DDP细胞的耐药性,其逆转耐药的机制可能与下调耐药基因MDR1 mRNA及MRP2 mRNA及相应的P-pg、MRP2蛋白的表达有关。

PI-103对人卵巢癌细胞株SKOV3/DDP顺铂化疗效果的影响

目的:探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)双抑制剂PI-103对卵巢癌耐顺铂株SKOV3/DDP顺铂化疗效果的影响。方法:将PI-103、顺铂及两者联合分别作用于SKOV3/DDP细胞,采用CCK-8法检测细胞生长情况,流式细胞技术检测药物单独或联合作用对细胞凋亡的影响;应用Western blot检测蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、核糖体蛋白(rpS6)、磷酸化rpS6(p-rpS6)以及凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax蛋白表达变化。结果:PI-103能够抑制SKOV3/DDP细胞增殖,且呈浓度、时间依赖性;联合用药可以明显增加对细胞生长抑制和凋亡作用。PI-103能下调Akt和rpS6的磷酸化水平,促DDP上调Bax和下调Bcl-2的表达。结论:PI-103抑制PI3K/Akt/mTOR信号传导通路,促DDP上调促凋亡蛋白及下调抗凋亡蛋白的表达,从而抑制癌细胞生长,诱导其凋亡,增加卵巢癌耐顺铂株SKOV3/DDP细胞对DDP的化疗效果。

干扰LRP16基因表达对人卵巢癌耐药SKOV3/DDP细胞耐药性的影响及机制研究

目的:探究干扰人白血病相关蛋白16(LRP16)基因表达对人卵巢癌耐药SKOV3/DDP细胞耐药性的影响及其相关机制。方法:采用Real-time PCR和蛋白免疫印迹(WB)检测LRP16在敏感组(SKOV3细胞)、耐药组(SKOV3/DDP细胞)、LRP16干扰组(SKOV3/DDP细胞-稳定转染LRP16 shRNA质粒)和NC组(即阴性对照组,SKOV3/DDP细胞-稳定转染阴性对照质粒)细胞中的表达情况;MTT试验检测LRP16对SKOV3/DDP细胞耐药性的影响;彗星试验检测LRP16对顺铂(DDP)诱导DNA损伤的影响;流式细胞术(FCM)试验检测细胞凋亡变化;WB试验检测PTEN、p-Akt和NF-κB蛋白表达水平。结果:LRP16干扰组细胞的耐药指数(RI)值(3.19±0.21)显著低于耐药组细胞(6.84±0.37)(P<0.05)。DDP(25μmol/L)处理24 h后,LRP16干扰组DNA损伤的细胞百分比、细胞凋亡百分比均显著低于耐药组和NC组(P均<0.05),而耐药组和NC组比较差异无统计学意义(P>0.05);LRP16干扰组细胞PTEN蛋白相对表达量高于耐药组和NC组(P均<0.05),而p-Akt和NF-κB相对表达量低于耐药组和NC组(P均<0.05)。结论:干扰LRP16基因表达可逆转卵巢癌耐药SKOV3/DDP细胞的耐药性,PTEN/Akt/NF-κB可能是其中的关键信号通路。

磁性纳米四氧化三铁颗粒对卵巢癌细胞株SKOV3/DDP耐药的逆转作用

目的探讨磁性纳米四氧化三铁颗粒(Fe3O4-MNPs)逆转人卵巢癌顺铂耐药细胞株(SKOV3/DDP)耐药性的机制。方法将SKOV3/DDP细胞分为对照组、顺铂(DDP)组、Fe3O4-MNPs组和DDP+Fe3O4-MNPs组,用Westernblot方法检测P-糖蛋白(P-gp)、肺耐药相关蛋白(LRP)和多耐药相关蛋白1(MRP1),电感耦合等离子体原子发射光谱(ICP)法测定细胞内铂含量。结果 DDP+Fe3O4-MNPs组P-gp、LRP和MRP1蛋白表达水平较DDP组下降明显(P<0.05)。DDP+Fe3O4-MNPs组细胞内铂含量明显高于DDP组(P<0.05)。结论 Fe3O4-MNPs逆转耐药的作用机制可能与Fe3O4-MNPs促进DDP进入细胞内,下调P-gp、LRP和MRP1蛋白表达,提高细胞内DDP浓度有关。

磁性纳米Fe_3O_4颗粒逆转卵巢癌SKOV3/DDP耐药性的研究

目的探讨磁性纳米四氧化三铁颗粒(Fe3O4-MNPs)逆转人卵巢癌顺铂耐药细胞株(SKOV3/DDP)耐药性的可能性。方法将SKOV3/DDP细胞分为对照组、顺铂(DDP)组、Fe3O4-MNPs组和DDP+Fe3O4-MNPs组,体外培养后MTT法测定细胞生长半数抑制浓度(IC50),流式细胞术测定细胞凋亡及电感耦合等离子体原子发射光谱(ICP)法测定细胞内DDP含量。结果DDP组IC50为39.31μM,DDP+Fe3O4-MNPs组为17.4μM(P<0.05)。DDP+Fe3O4-MNPs组细胞凋亡率较DDP组明显提高(P<0.05)。DDP+Fe3O4-MNPs组细胞内顺铂含量明显高于DDP组(P<0.05)。结论Fe3O4-MNPs可与化疗药物顺铂协同,逆转卵巢癌细胞对DDP的耐受性。其作用可能是通过提高细胞内药物聚集量实现的。

脂多糖通过调节iNOS表达影响人卵巢癌SKOV3/DDP细胞顺铂耐药性的研究

目的观察脂多糖诱导的SKOV3/DDP细胞内分泌型一氧化氮合酶(iNOS)表达变化对人卵巢癌SKOV3/DDP细胞株顺铂耐药性的影响,并初步探讨机制。方法体外培养SKOV3/DDP细胞,分为对照组、顺铂组、脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)组和联合用药组共4组,对照组给予常规不加血清培养基,顺铂组给予10μg/ml顺铂,LPS组给予浓度为1μg/ml的LPS,联合用药组给予10μg/ml顺铂和1μg/ml LPS,均作用24 h。MTT法检测各组细胞活力;蛋白免疫印迹法观察各组iNOS表达;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;间接免疫荧光法观察各组细胞激活型Caspase-3表达。结果联合用药组细胞活力明显低于顺铂组(P<0.05);顺铂组与对照组iNOS表达差异无统计学意义(P>0.05),LPS组和联合用药组iNOS表达水平明显高于对照组(P<0.05),且联合用药组高于LPS组(P<0.05);流式细胞术结果显示联合用药组细胞凋亡率明显高于顺铂组(P<0.05),且通过间接免疫荧光法显示联合用药组细胞激活型Caspase-3表达高于顺铂组(P<0.05)。结论 LPS能够降低人卵巢癌SKOV3/DDP细胞顺铂耐药性,这可能与其提高SKOV3/DDP细胞内iNOS表达水平有关。

BH3模拟物ABT737诱导人卵巢癌SKOV3/DDP细胞凋亡与自噬

目的观察ABT737作用于人卵巢癌顺铂耐药SKOV3/DDP细胞后,细胞凋亡和自噬的发生,探讨抑制自噬后对凋亡的影响。方法体外培养SKOV3/DDP细胞,按ABT737药物终浓度0、2.5、5.0和10.0μmol/L分为4组,分别作用12和24 h。流式细胞术检测各组细胞凋亡率,分别采用免疫荧光和免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞自噬相关蛋白LC3和Beclin-1表达水平。将细胞分为对照组、ABT737组、3-Ma组和联合用药组,分别以细胞培养基、ABT737(5.0μmol/L)、3-Ma(1.0 mmol/L)和ABT737联合3-Ma作用于SKOV3/DDP细胞,Western blot法检测12和24 h后凋亡相关蛋白active Caspase-3和cyto C的表达水平。结果与对照组比较,12和24 h各剂量ABT737组细胞凋亡率均明显增高,差异有统计学意义(P<0.01)。间接免疫荧光法检测LC3和Beclin-1蛋白表达,结果显示随着ABT737药物终浓度增加和作用时间的延长,两蛋白阳性表达亮度均越来越强,提示蛋白表达增强。Western blot检测LC3和Beclin-1蛋白表达水平,结果显示随着ABT737药物终浓度增加和作用时间的延长,细胞中LC3(F=10.878,F=13.256,P<0.05)和Beclin-1(F=6.589,F=7.365,P<0.05)蛋白表达水平均逐渐升高。3-Ma抑制自噬后,与ABT737组相比,联合用药组active Caspase-3 12和24 h表达水平明显增强,12和24 h cyto C表达水平也明显增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ABT737诱导人卵巢癌顺铂耐药SKOV3/DDP细胞凋亡的同时伴随着自噬的发生,抑制自噬能够促进凋亡。

雷公藤红素对卵巢癌SKOV3/DDP细胞的抑制作用及其机制

目的探讨雷公藤红素(celastrol)对卵巢癌顺铂(cisplatin,DDP)耐药细胞SKOV3/DDP的抑制作用及其机制。方法 MTT法检测不同浓度雷公藤红素对SKOV3/DDP细胞增殖的影响;显微镜下观察不同浓度雷公藤红素对SKOV3/DDP细胞形态的影响;流式细胞术检测不同浓度雷公藤红素对SKOV3/DDP细胞周期及凋亡的影响;细胞划痕试验检测不同浓度雷公藤红素对SKOV3/DDP细胞迁移能力的影响;Transwell体外侵袭试验检测不同雷公藤红素对SKOV3/DDP细胞侵袭能力的影响;Western blot法检测SKOV3/DDP细胞中凋亡及侵袭相关蛋白的表达水平。结果经雷公藤红素作用后,SKOV3/DDP细胞的增殖抑制率显著上升(P<0.05);镜下观察SKOV3/DDP细胞数目显著减少(P<0.05);G1期细胞比例明显升高(P<0.05);细胞凋亡率显著增加(P<0.05);细胞迁移距离明显减小(P<0.05);穿膜细胞数目明显减少(P<0.05);SKOV3/DDP细胞中Cyclin A、p-AKT、NF-KB、MMP-2、MMP-9和P-GP蛋白的表达水平均明显下降(P<0.05)。结论雷公藤红素对SKOV3/DDP细胞抑制作用显著,为临床晚期失去手术机会卵巢癌患者的治疗提供了参考。

奥曲肽对人卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3/DDP移植瘤增殖的影响

目的探讨奥曲肽对人卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3/DDP裸鼠移植瘤生长的影响。方法将SKOV3/DDP细胞接种雌性BALB/c-nu/nu裸鼠右腋前皮下构建移植瘤动物模型,成瘤后随机分成4组。奥曲肽组(A):奥曲肽100μg.kg-1.d-1,用药28 d;顺铂组(B):顺铂4 mg.kg-1.d-1,成瘤后第1、8、15、22天用药;联合组(C):奥曲肽和顺铂联用;对照组(D):生理盐水对照。用药4周后处死裸鼠,取肿瘤标本计算瘤重和瘤体积,并采用免疫组织化学法检测瘤块中生长抑素受体2(SSTR2)和表皮生长因子受体(EGFR)的表达。结果各用药组肿瘤标本的瘤重、瘤体积均低于D组,C组的瘤重、瘤体积低于A、B组(P<0.01)。各组移植瘤细胞均有SSTR2表达;EGFR表达量D组显著高于其他各组(P<0.01),C组及A组EGFR表达量低于其他两组(P<0.01)。结论奥曲肽能抑制人卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3/DDP的裸鼠移植瘤的生长,并与顺铂有协同作用。

固体脂质纳米姜黄素联合顺铂对卵巢癌SKOV3的增殖及Bax/Bcl-2蛋白表达的实验研究

目的:研究固体脂质纳米姜黄素(Curcumin-loaded solid lipid nanoparticles,SLN-Cur)与顺铂(Cisplatin,DDP)联用对人卵巢癌SKOV3细胞株生长的影响及促凋亡作用。方法:姜黄素(Curcumin,Cur)制备成SLN-Cur新型给药系统,分别检测DDP、Cur、SLN-Cur、DDP+Cur、DDP+SLN-Cur对人卵巢癌SKOV3细胞株凋亡形态学变化及超微结构变化,细胞凋亡率及凋亡相关基因蛋白的表达。结果:SLN-Cur可抑制SKOV3细胞生长,抑制率与药物浓度及作用时间成依赖关系,24 h IC50=40.14μmol/L,DDP与SLN-Cur联合诱导细胞凋亡作用增强,具有显著协同作用;Bcl-2表达减弱,Bax表达增强。结论:SLN-Cur合用DDP对SKOV3细胞株具有较好的抑制增殖及促凋亡作用,通过下调Bcl-2表达及上调Bax表达而诱导细胞凋亡。

磁性纳米Fe_3O_4对卵巢癌细胞耐药性的逆转作用及其与凋亡相关基因的关系

背景与目的:目前认为多药耐药(multi-drug resistance,MDR)是卵巢癌化疗失败和复发的主要原因。本研究探讨磁性纳米Fe3O4颗粒对卵巢癌细胞(SKOV3/DDP)耐药性的逆转作用及其与凋亡相关基因的关系。方法:将卵巢癌细胞的耐药株SKOV3/DDP分为对照组、顺铂组(DDP组)、磁性纳米Fe3O4颗粒组(Fe3O4-MNPs组)、DDP+磁性纳米Fe3O4颗粒组(DDP+Fe3O4-MNPs组)4个组,用MTT比色法检测对细胞增殖的抑制作用,流式细胞术测定细胞凋亡,电感耦合等离子体原子发射光谱法测细胞内顺铂的含量,RT-PCR检测凋亡相关基因Bcl-2和Survivin mRNA在SKOV3/DDP中的表达。结果:Fe3O4-MNPs组细胞耐药性的逆转倍数为2.259。DDP+Fe3O4-MNPs组细胞凋亡率[(42.1±5.6)%vs.(26.9±4.1)%]及细胞内铂含量[(0.074±0.006)μmol/Lvs.(0.057±0.003)μmol/L]均高于DDP组(P<0.05),其差异有统计学意义(P<0.05)。DDP+Fe3O4-MNPs组细胞bcl-2、survivin mRNA表达均低于DDP组,其差异有统计学意义(P<0.05)。结论:磁性纳米Fe3O4颗粒可逆转卵巢癌细胞对顺铂的耐受性,作用机制可能与其降低抗凋亡基因bcl-2和survivin mRNA表达有关。

ERCC1基因表达与磁性Fe_3O_4纳米颗粒逆转卵巢癌细胞耐药性的关系

目的探讨磁性Fe3O4纳米颗粒(Fe3O4-MNPs)逆转人卵巢癌顺铂耐药细胞株(SKOV3/DDP)的耐药性的可能性及其机理。方法将SKOV3/DDP分为对照组、顺铂组、Fe3O4-MNPs组、顺铂+Fe3O4-MNPs组等4个组,流式细胞技术测定细胞凋亡、电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)测细胞内顺铂的含量,及RT-PCR检测切除DNA修复基因ERCC1 mRNA在SKOV3/DDP中的表达。结果在顺铂+Fe3O4-MNPs组中,细胞凋亡率及细胞内铂含量均高于顺铂组(P<0.05);ERCC1 mRNA的表达明显低于顺铂组(P<0.05)。结论Fe3O4-MNPs可以逆转卵巢癌细胞对顺铂的耐药性,其作用可能是通过提高细胞内铂浓度、下调ERCC1表达来逆转SKOV3/DDP对顺铂的耐药。

Beclin1表达抑制SKOV3／DDP细胞增殖机制探讨

目的:探讨自噬基因Beclin1通过影响血管生成素的表达对SKOV3/DDP细胞增殖抑制的可能机制。方法:脂质体包裹重组构建pcDNA3.1-Beclin1和pSUPER-Beclin1质粒后,分别体外转染SKOV3/DDP细胞,并筛选稳定表达株,通过实时荧光定量RT-PCR检测不同细胞株中Beclin1、Ang-1、Ang-2及Tie-2受体mRNA表达,蛋白质印迹法检测Beclin1、Ang-1、Ang-2及Tie-2蛋白水平变化,MTT法测定细胞生长增殖情况。结果:pcDNA3.1-Bec组Beclin1mRNA定量为31.39±3.16,明显高于未转染对照组的1.03±0.08,P<0.001;而pSUPER-Bec组为0.29±0.05,较对照组明显降低,P=0.003。pcDNA3.1-Bec组Ang-1mRNA定量为6.13±0.29,明显低于对照组的9.28±0.53,P=0.023。pSUPER-Bec组Ang-2mRNA定量为7.33±0.35,较对照组的11.36±0.59明显降低,P=0.021。pSUPER-Bec组Tie-2mRNA定量为7.96±0.38,与空白对照组的13.23±0.61相比亦明显降低,P=0.018。MTT法检测结果提示,pcDNA3.1-Bec组转染48h吸光度值为1.13±0.06,72h为1.21±0.05,96h为1.39±0.06;与未转染对照组的1.24±0.05、1.49±0.05及1.93±0.06比较,细胞增殖均明显减慢,F值分别为11.136、20.827和41.633,P值分别为0.029、0.011和0.005。pSUPER-Bec组转染48h为1.52±0.06,72h为1.88±0.06,96h为2.16±0.08,与对照组比较,细胞增殖均明显增快,F值分别为18.976、33.819和15.265,P值分别为0.012、0.007和0.016。结论:Beclin1过度表达能抑制SKOV3/DDP细胞增殖,其机制可能与Ang及其Tie-2受体的异常表达和平衡失调有关。

奈达铂体外诱导人卵巢癌顺铂耐药细胞凋亡的机制

目的探讨研究奈达铂(NDP)体外对人卵巢癌顺铂原发耐药细胞株SKOV3和继发耐药株SK-OV3/DDP的抑制作用及其机制。方法采用MTT法检测体外不同时间不同浓度的NDP对SKOV3及SKOV3/DDP细胞的杀伤作用,计算半数抑制浓度(IC50);流式细胞术(FCM)测定给药前后细胞凋亡率及周期分布变化;半定量PCR分析凋亡基因Bcl-2,Bax,caspase-3,caspase-9及反应肿瘤细胞侵袭力的基因MMP-2的表达变化。结果 NDP能明显抑制SKOV3及SKOV3/DDP生长,呈时间-剂量依赖性;流式结果显示随时间、浓度增加,SKOV3和SKOV3/DDP细胞凋亡明显增加,S期细胞的比例增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,Bcl-2、MMP-2表达减少,Bax,caspase-3,caspase-9表达增加。结论 NDP可抑制SKOV3和SKOV3/DDP细胞增殖,其机制可能与诱导细胞凋亡,细胞S期阻滞,下调Bcl-2及上调Bax,caspase-3,caspase-9的表达有关;同时可下调MMP-2的表达,有利于降低卵巢癌细胞的侵袭力。

腹腔热化疗中卵巢癌细胞对顺铂敏感性影响的体外研究

目的:探讨腹腔热疗对卵巢癌细胞顺铂敏感株的化疗增敏作用及对顺铂耐药株的逆转耐药作用,并分析其作用机制.为腹腔热疗增加顺铂化疗敏感性及逆转卵巢癌顺铂耐药提供实验依据。方法:MTT法研究常温及41℃不同作用时间下温热联合顺铂对卵巢癌细胞敏感株SKOV3、卵巢癌细胞顺铂耐药株SKOV3/DDP的生长抑制作用。Western bloting法检测常温及41℃不同作用时间下ERCC1基因表达水平。结果:41℃下作用60、90min时对SKOV3细胞生长的抑制作用大,差异有显著性,P<0.001。热处理对SKOV3/DDP细胞生长有抑制作用,不同时间差异有统计学意义。热疗联合顺铂在常温或41℃下,SKOV3细胞对顺铂的敏感性不同,差异有统计学意义(P<0.001)。且41℃作用90min时敏感性最大(P=0.002),对顺铂的敏感性提高79.885%。热处理不同时间,SKOV3/DDP细胞对顺铂的敏感性增加,差异有显著性,P<0.001。41℃ 90min SKOV3/DDP细胞对顺铂的敏感性提高37.129%。在SKOV3细胞中,ERCC1表达水平较SKOV3/DDP细胞降低,F=32.175,P<0.001。热疗联合顺铂与常温下相比,SKOV3、SKOV3/DDP细胞中ERCC1基因表达水平差异无统计学意义,F=0.962,P=0.443。结论:热疗对卵巢癌细胞SKOV3及其顺铂耐药亚株SKOV3/DDP细胞有生长抑制作用;热疗联合顺铂可以增加SKOV3细胞对顺铂的敏感性,可以部分逆转SKOV3/DDP细胞对顺铂的耐药性,且最佳作用时间为41℃90min;ERCC1表达增加与卵巢癌顺铂耐药有关,但热疗联合顺铂对ERCC1基因表达水平无明显影响,热疗可能通过其他途径增加肿瘤细胞对顺铂的敏感性。

雷公藤多甙对耐顺铂人上皮卵巢癌细胞体外活性的影响及机制研究

目的:探讨传统中药雷公藤多甙(Tripterygium Wilfordii Hook.F.,GTW)对耐顺铂人上皮卵巢癌细胞体外活性的影响及机制研究。方法:将顺铂、不同浓度雷公藤多甙及二者联合处理SKOV3/DDP细胞24 h,于倒置相差显微镜及荧光倒置显微镜下观察细胞形态学变化;采用Hochest 33258染色法计算细胞平均凋亡率;流式细胞术检测细胞周期变化;Western blot检测P13K/Akt/NF-κB信号通路相关因子PI3K、T-AKT、p-AKT(ser473)、IκBα、NF-κB、Bcl-2的表达变化。结果:SKOV3/DDP细胞经不同浓度雷公藤多甙处理24 h后,出现典型的凋亡样改变;且凋亡率呈浓度依赖性,顺铂联合组凋亡率较相应单药组明显升高;SKOV3/DDP细胞经雷公藤多甙处理24 h后,S期细胞比例明显升高,升高程度呈浓度依赖性(P<0.05),雷公藤多甙与顺铂联合组S期细胞比例与相应单药组相比均明显升高;雷公藤单药及雷公藤、顺铂联合处理SKOV3/DDP细胞24 h后,p-AKT、NF-κB、Bcl-2蛋白表达明显下调。结论:雷公藤多甙可使耐顺铂人上皮卵巢癌SKOV3/DDP细胞周期阻滞于S期并诱导其凋亡,与小剂量顺铂联用效用明显增加,其机制可能与p-AKT、NF-κB、Bcl-2表达下调,抑制P13K/Akt/NF-κB信号通路有关。

hMLH1基因对人卵巢癌耐药细胞株顺铂敏感性的研究

目的探讨错配修复基因hMLH1对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP顺铂耐药的逆转作用及其机制。方法分别用重组质粒pcDNA3.1-hMLH1和空质粒pcDNA3.1转染SKOV3/DDP细胞。RT-PCR和Western blot检测hMLH1的表达。MTT检测转染前后SKOV3/DDP细胞对顺铂敏感性的变化。经顺铂DDP作用后,流式细胞术和Westernblot法检测细胞凋亡情况。结果与对照组相比,瞬时转染24h后,SKOV3/DDP细胞中hMLH1 mRNA和蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05)。MTT结果显示,转染细胞的IC50值(13.95±2.45)较未转染的细胞(94.16±5.18)明显减小。流式细胞仪和Westernblot检测结果表明,顺铂作用24h后,转染了重组质粒的耐药细胞的凋亡率提高到(33.33±2.31)%,同时凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达受到抑制(1.35±0.39),与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 hMLH1基因能增强卵巢癌耐药细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与降低该耐药细胞内Bcl-2的表达水平,促进细胞凋亡有关。