真皮干细胞SKPs对银屑病样小鼠模型治疗作用分析

目的探讨真皮干细胞即皮肤源性前体细胞(SKPs)对银屑病样小鼠模型的治疗效果及其可能的作用机制。方法将20只BALB/c无毛小鼠随机分为:模型组[仅外用咪喹莫特乳膏(IMQ)]、治疗组(外用IMQ+皮内注射SKPs)、对照组(外用IMQ+皮内注射培养基)和凡士林组(仅外用凡士林)。肉眼观察小鼠皮肤外观,行银屑病面积与严重指数(PASI)评分。分离小鼠脾脏计算脾脏体重指数(SI);取背部皮肤行HE染色检测病理组织学改变;采用ELISA法检测各组血清中SOD、GSH、CAT、MDA、ROS、IL-17、IL-23的蛋白水平;qPCR检测皮肤组织中MAPK、NF-κb、SOD、GSH、iNOS、ROS、CAT、IL-17、IL-23 mRNA等基因的表达。结果模型组小鼠皮肤出现片状红斑/斑块上覆厚层鳞屑,局部浸润明显,PASI评分显著升高,病理可见角化过度、角化不全、棘层增厚,颗粒层变薄,真皮大量炎症细胞浸润等,而凡士林组则无上述表现。然而经SKPs局部注射后,治疗组小鼠皮肤红斑大部分消退、鳞屑减少,局部浸润减轻,PASI评分降低和病理表现明显改善(P<0.05);但对照组皮损和病理表现无改善、PASI评分无下降。同时模型组SI升高,MDA、ROS、IL-17、IL-23蛋白水平及MAPK、NF-κb、iNOS、ROS、IL-17、IL-23基因表达显著升高(P<0.05),而CAT、SOD、GSH蛋白及基因表达明显降低(P<0.05)。但SKPs明显降低SI以及上述炎症因子和氧化物的蛋白/基因表达水平,提升CAT等抗氧化物蛋白/基因水平(P<0.05),即治疗组均较模型组和对照组显著改善(P<0.05);而对照组较模型组无明显变化(P>0.05)。结论SKPs能较好改善银屑病样鼠皮损,减轻炎症及氧化应激损伤,可能是通过阻断MAPK/NF-κB表达进而抑制炎症因子释放、增强抗氧化能力而作用。

基于网络药理学探讨山奈酚-7-O-新橘皮糖苷抗前列腺癌的作用机制

目的 探讨山奈酚-7-O-新橘皮糖苷(kaempferol-7-O-neohesperidoside, K7ON)抗前列腺癌细胞(prostate cancer, PCa)的作用及潜在分子机制。方法 采用CCK-8法检测K7ON对PCa细胞PC3、DU145、C4-2和LNCap增殖的影响;应用细胞划痕实验检测K7ON对DU145细胞迁移能力的影响;SuperPred等数据库获取K7ON和PCa的靶点;从Venny在线平台获取K7ON与PCa的共同靶点,应用String和Cytoscape构建蛋白相互作用(protein-protein interaction, PPI)网络;通过DAVID数据库进行GO和KEGG功能富集分析,构建“药物-靶点-疾病-通路”网络模型。通过流式细胞术检测K7ON对PCa细胞周期的影响;采用Western blot法检测周期相关蛋白Skp2、p27和p21蛋白的表达;应用Sybyl X2.0将Skp2与K7ON进行分子对接。结果 K7ON可显著抑制PCa细胞的增殖和迁移能力。筛选出药物与疾病的交集靶点共34个,其中Skp2、p27等是K7ON治疗PCa的关键靶点,进一步的GO和KEGG功能功能富集表明其机制主要与细胞周期相关。流式细胞术结果表明,K7ON处理可使DU145细胞周期阻滞在S期。与对照组相比,Skp2蛋白表达水平明显下调,p27和p21的蛋白表达水平上调。分子对接结果显示K7ON与受体Skp2具有较好的结合能力。结论 K7ON可抑制PCa细胞的增殖和迁移,使细胞周期阻滞在S期,其机制可能与调控Skp2-p27/p21信号通路相关。

高强低合金钢焊接接头在海水中的初期腐蚀行为

通过电化学方法和表面分析技术,研究了高强低合金钢焊接接头在海水中的初期腐蚀行为。结果表明:浸泡前母材区的初始电位较低,腐蚀倾向最大,浸泡后母材区电位波动最大;该焊接接头在初期腐蚀呈现阳极溶解速率由高向低转变的特征,其中母材区阳极溶解电流密度最大;焊接接头在海水中的初期腐蚀以全面腐蚀和点蚀两种形式发展,腐蚀产物主要成分为α-Fe_(2)O_(3),α-FeOOH和γ-FeOOH。在海水中浸泡初期,焊接接头各区域耐蚀性从低到高排序为母材区、热影响区、焊缝区。

松果菊苷下调Skp2的表达抑制胶质母细胞瘤上皮间质转化及胶质瘤干细胞干性

目的研究松果菊苷(ECH)对胶质母细胞瘤(GBM)的上皮间质转化(EMT)及其对GBM干细胞的影响,并探讨其分子机制。方法①体外实验:将GBM U87和U251细胞以0、5、10和20μmol·L^(-1) ECH浓度处理24 h。采用CCK-8法评估细胞活性;进行克隆形成实验以测定克隆能力;通过Transwell实验评估迁移和侵袭能力;利用球形成实验评价GBM干细胞的成球能力;通过细胞免疫荧光检测干细胞标志物;使用Western blot分析EMT和干细胞相关蛋白表达。②体内实验:在裸鼠皮下注射U87细胞,每组5只。实验组腹腔注射ECH,对照组注射等体积溶剂。最后测定肿瘤体积、重量和体重,并用Western blot分析肿瘤中的Skp2、EMT和干细胞相关蛋白表达。结果①体外实验显示,相较于0μmol·L^(-1) ECH组,10、20μmol·L^(-1) ECH处理显著降低了细胞活性(P<0.05);在5、10和20μmol·L^(-1) ECH组中克隆形成数量显著减少(P<0.05);迁移和侵袭能力在5、10μmol·L^(-1) ECH组中随浓度升高而降低(P<0.05);成球能力和干细胞标志物表达及Skp2、EMT和干细胞特性相关蛋白表达在5、10μmol·L^(-1) ECH组中均显著降低(P<0.05)。②体内实验显示,ECH处理小鼠的肿瘤体积和重量显著小于对照组(P<0.05),且Skp2、EMT(Vimentin、Snail)和干细胞标志物(Sox2、Nestin)的表达显著减少(P<0.05);两组小鼠体重差异无统计学意义(P>0.05)。结论ECH通过降低Skp2表达抑制GBM的EMT和干细胞特性。

CircCSNK1G1调节miR-381-3p/Skp2轴对胃癌细胞增殖、凋亡和迁移的研究

目的探究CircCSNK1G1调节miR-381-3p/S期激酶相关蛋白2(Skp2)轴对胃癌(GC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法将HGC-27细胞分为未转染组、si-NC组、si-CircCSNK1G1组、si-CircCSNK1G1+anti-miR-NC组、si-CircCSNK1G1+anti-miR-381-3p组。qRT-PCR分别检测GC肿瘤组织和GC不同细胞系中CircCSNK1G1、miR-381-3p、Skp2 mRNA的表达;MTT法检测细胞增殖;克隆形成实验检测细胞克隆数量;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell小室法测定细胞迁移和侵袭能力;Western Blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin的表达;双荧光素酶实验验证CircCSNK1G1、miR-381-3p、Skp2三者的靶向关系。结果与癌旁组织和人正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,GC肿瘤组织和GC细胞系中的CircCSNK1G1、Skp2 mRNA高表达,miR-381-3p低表达(P<0.05),且HGC-27细胞中miR-381-3p表达水平最低,CircCSNK1G1、Skp2 mRNA表达最高,因此后续选用HGC-27细胞并敲低CircCSNK1G1进行实验。与未转染组和si-CircCSNK1G1-NC组相比,转染si-CircCSNK1G1能够降低HGC-27细胞中CircCSNK1G1、Skp2 mRNA表达、细胞增殖活性、细胞迁移数以及Vimentin蛋白表达(P<0.05),提高miR-381-3p的表达、细胞凋亡率和E-cadherin蛋白表达(P<0.05)。双荧光素酶实验验证了CircCSNK1G1、Skp2均与miR-381-3p存在靶向关系,而且CircCSNK1G1可作为miR-381-3p的海绵RNA,进一步调节Skp2的表达和活性。结论敲低CircCSNK1G1能够靶向上调miR-381-3p表达,抑制Skp2表达,进而促进GC细胞凋亡,抑制其增殖和迁移。

疏水板在地下工程底板地坪中的应用

结合成都SKP项目地下车库疏水板施工实例,阐述了疏水板在施工中的应用,包括疏水板材质、节点做法、布置方式、施工工艺等。以“引水止漏”的思路解决了地下室底板渗漏的问题,取得了较好的效果。

金属涂装预处理新技术与涂层性能研究方法进展

评述了近年发展起来的硅烷化和原位磷化两种金属涂装预处理新技术和有机涂层金属体系腐蚀降解行为的现代研究方法(红外照相法、红外技术)的最新进展。此两种金属表面处理方法能够显著增强有机涂层与金属基体的结合力,有望取代对环境具有危害的传统磷化和铬酸盐转化技术。红外照相技术可更直观地了解涂层下金属的腐蚀发展过程及腐蚀类型;结合SKP和SAM两种技术能够更深入认识涂层金属发生腐蚀过程中腐蚀电位及腐蚀区域的发展变化。

PI3K信号通路通过Skp2、p27调节肝癌细胞的增殖

探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路调节肝癌细胞增殖的机制.用LY294002特异性阻断PI3K信号通路后,人肝癌细胞(SMMC-7721)的增殖明显被抑制.RT-PCR及蛋白质印迹结果显示,LY294002增加了p27蛋白的表达,但不影响p27的mRNA表达.在LY294002处理的细胞中转入p27的RNAi质粒以干扰p27蛋白的表达后,肝癌细胞的增殖能力可部分恢复.放线菌酮(Chx)处理实验表明,阻断PI3K信号通路使p27蛋白的半衰期延长,稳定性增加.进一步研究发现,LY294002可抑制介导p27蛋白降解的关键分子Skp2的mRNA表达,还可缩短Skp2蛋白的半衰期,降低Skp2蛋白的稳定性.但在SMMC-7721中分别转染PI3K下游重要靶分子Akt的持续激活和失活突变体,却并不影响p27蛋白的表达.这些结果表明,PI3K信号通路在转录及翻译后水平调节Skp2的表达而影响p27蛋白的降解,从而调节肝癌细胞的增殖,但Akt并没有参与这种调节.

转化生长因子β1/Smads信号传导通路在哺乳动物卵巢发育中的调控作用及其作用机制

不同信号转导通路间的彼此协调保证了机体的正常运行。在众多的信号通路中,转化生长因子(TGF)β1/Smads信号传导通路越来越受到学者们的关注,已经成为分子生物学和细胞生物学研究的一大热点。已有研究证实,TGF-β1/Smads信号传导通路是调控卵泡发育的重要途径。本文就TGF-β1/Smads信号传导通路与哺乳动物卵巢卵泡的发育进行综述,分别从TGF-β受体、Smads蛋白、骨形态发生蛋白(BMP)、血小板反应蛋白1(THB-S1)、S期激酶相关蛋白1(SKP1)和其他调节机制阐述TGF-β1/Smads信号传导通路在哺乳动物卵巢发育中的调控作用及其机制,旨在引起人们对TGF-β1/Smads调控卵巢发育的关注,并为卵巢发育过程中某些疾病的治疗提供一些参考。

Skp2和P27^(kip1)在前列腺癌组织中的表达与临床病理特征的相关性研究

背景及目的:F-box蛋白Skp2参与细胞周期抑制蛋白P27kip1泛素化降解,研究发现Skp2在乳腺癌、胃癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤中表达增加。本研究旨在探讨Skp2和P27kip1在前列腺癌组织中的表达及与前列腺癌各项临床病理特征的关系,并探讨两者的相关性。方法:用免疫组化EnVisionTM方法检测Skp2和P27kip1蛋白在41例前列腺癌和20例良性前列腺增生组织中的表达情况。结果:在前列腺癌中的Skp2蛋白阳性率犤(8.52±2.40)%犦显著高于良性前列腺增生犤(0.21±0.15)%犦(P<0.001)。Skp2蛋白表达与前列腺癌术前血清前列腺特异性抗原(PSA)水平(r=0.360,P=0.021)、局部浸润(r=0.570,P<0.001)、肿瘤分期(r=0.531,P<0.001)、病理分级(r=0.514,P=0.001)呈正相关。在前列腺癌中的P27kip1蛋白阳性率犤(70.71±4.25)%犦显著低于良性前列腺增生犤(97.21±2.10)%犦(P<0.001)。P27kip1蛋白表达与前列腺癌术前PSA水平(r=-0.399,P=0.010)、局部浸润(r=-0.329,P=0.036)、肿瘤分期(r=-0.453,P=0.003)、病理分级(r=-0.290,P=0.046)呈负相关。前列腺癌中P27kip1蛋白与Skp2表达呈负相关(r=-0.572,P<0.001)。结论:前列腺癌中Skp2蛋白表达与靶蛋白P27kip1蛋白降解有关,提示Skp2蛋白可能与前列腺癌的发生发展有关。

甲状腺乳头状癌及相关病变Jab1、Skp2和p27蛋白的表达及意义

目的探讨细胞周期有关的因子c-Jun激活区域结合蛋白-1(Jab1)、S期激酶相关蛋白2(Skp2)和细胞周期素依赖激酶抑制剂p27蛋白在结节性甲状腺肿、桥本甲状腺炎和甲状腺乳头状癌中的表达及意义。方法采用免疫组织化学方法检测结节性甲状腺肿、桥本甲状腺炎、伴结节性甲状腺肿的甲状腺乳头状癌和伴桥本甲状腺炎的甲状腺乳头状癌中Jab1、Skp2和p27蛋白的表达。结果Jab1、Skp2蛋白的阳性表达率在伴结节性甲状腺肿的甲状腺乳头状癌者(86.9%、82.6%)和伴桥本甲状腺炎的甲状腺乳头状癌者(83.3%、66.7%)均分别明显高于结节性甲状腺肿者(26.3%、0%)和桥本甲状腺炎者(23.8%、4.8%)(P<0.01)。p27蛋白的阳性表达率在伴结节性甲状腺肿的甲状腺乳头状癌者(39.1%)和伴桥本甲状腺炎的甲状腺乳头状癌者(45.6%)均分别明显低于结节性甲状腺肿者(89.5%)和桥本甲状腺炎者(100%)(P<0.01)。甲状腺乳头状癌中,癌组织>1 cm者Jab1蛋白阳性表达率明显高于癌组织≤1 cm者(P<0.01);Jab1和Skp2蛋白表达与p27蛋白表达均呈负相关性(rs=-0.344,P=0.028;rs=-0.421,P=0.006);Jab1蛋白表达与Skp2蛋白表达呈正相关性(rs=0.43,P=0.005);肿瘤侵袭区域Jab1蛋白表达阳性的细胞百分率(61.22±8.99)%明显高于肿瘤中心区域(42.61±9.46)%(P<0.01)。结论Jab1、Skp2和p27蛋白表达可能参与结节性甲状腺肿和桥本甲状腺炎癌变为甲状腺乳头状癌的过程,甲状腺乳头状癌中Jab1、Skp2和p27蛋白表达之间可能存在相互调节的关系,Jab1蛋白表达可能与甲状腺乳头状癌细胞的迁移和侵袭有关。

F-box蛋白在植物生长发育中的功能研究进展

在真核生物中,由泛素介导的蛋白降解途径与植物生长发育密切相关。F-box蛋白家族是一类含有Fbox基序(motif),在泛素介导的蛋白质水解过程中具有底物识别特性的蛋白质家族。目前,从各种植物中已鉴定出大量的F-box蛋白质,这类蛋白质在植物激素的信号转导、光信号转导、自交不亲和以及花器官发育等许多生理过程中都具有重要功能。研究发现F-box蛋白在调控植物生长发育过程中所发挥的功能与其结构及泛素蛋白酶体途径密切相关。

SKP2在食管癌组织中的表达及其临床意义

目的研究细胞S期激酶相关蛋白SKP2(S-PHASE KINASE-ASSOCIATED PROTEIN2)在食管癌组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化S-P方法检测121例食管癌组织中SKP2蛋白与P27蛋白的表达水平和90例正常食管组织中的SKP2蛋白表达水平。结果SKP2蛋白表达率在食管癌中为64.4%(78/121),而正常食管组织中为13.3%(12/90),差异有显著性(P<0.05)。SKP2蛋白阳性表达率与患者年龄、性别、肿瘤大小、有无淋巴结转移及TNM分期无关(P>0.05),与肿瘤分化程度有关(P<0.05)。SKP2与P27表达呈显著负相关(P<0.05)。结论从蛋白水平证明SKP2异常表达可促进食管癌的发生发展,并将可能为食管癌的早期诊断和治疗提供新的手段。

胃癌中Cks1、p27^(Kip1)和Skp2蛋白的表达

目的探讨Cks1在胃癌发生及其在Skp2调节p27Kip1降解过程中的作用。方法应用流式细胞术测定正常胃粘膜和胃癌组织中Cks1、p27Kip1、Skp2蛋白表达。结果胃癌组织中Cks1、Skp2表达明显高于正常胃粘膜(χ2=22.69,P<0.05;χ2=13.42,P<0.05),而p27Kip1表达则低于正常胃粘膜(χ2=14.83,P<0.05)。胃癌中Cks1、Skp2表达与p27Kip1表达呈负相关(r=-0.649,P<0.05;r=-0.732,P<0.05);而Cks1蛋白表达与Skp2蛋白缺乏相关性(P>0.05)。胃癌中Cks1的表达与肿瘤分化程度相关(χ2=5.05,P<0.05),而与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及临床分期不相关(P>0.05)。结论Cks1可能参与了胃癌的发生;胃癌中Cks1可能参与了Skp2调节p27Kip1泛素化降解过程。

烟草SKP1基因cDNA的克隆分析及原核表达

应用DDRT-PCR法获得可被壳寡糖诱导的枯斑三生烟SKP1基因cDNA的3′端序列,通过5′RACE扩增该基因cDNA的5′端,进而扩增此基因cDNA的全长,通过同源性比较分析表明,与本塞姆氏烟草的SKP1基因同源性达81%,其cDNA全长653bp(GenBank登录号:AY702087),其中编码区位于73～540bp,编码一条155个氨基酸的多肽。经预测该多肽的分子量为17527.78Da,等电点为4.57,定位于细胞质,功能结构域分析结果显示在4～105位氨基酸有一明显的Skp1结构域,其E值为1.25e-52,因此推断该基因为枯斑三生烟的SKP1基因。将该基因编码区亚克隆到原核表达载体pET23b(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达出与预测分子量一致的蛋白。为进一步研究该基因的功能奠定了基础。

LY294002靶向抑制PI3K/Akt信号通路干预K562细胞增殖的研究

目的探讨PI3K/Akt抑制剂LY294002对慢性髓系白血病细胞株K562的增殖抑制作用及相关机制。方法 MTT法检测LY294002对K562细胞增殖的抑制作用;10、20μmol/L LY294002作用K562细胞36 h,流式细胞术观察细胞周期的变化,RT-PCR法测定LY294002对K562细胞Skp2基因表达的影响,Western blot法检测Skp2蛋白表达的变化。结果 LY294002能够抑制K562细胞的生长,该抑制作用具有浓度及时间依赖性(P<0.05)。LY294002作用K562细胞36 h,随着浓度的增加,G0/G1期阻滞增强,S期细胞减少(P<0.05),Skp2的mRNA表达量减少,Skp2蛋白的表达量显著降低。结论 LY294002能够抑制K562细胞的生长,诱导细胞发生G0/G1期阻滞,这可能是通过LY294002影响了Skp2表达而实现的。

壳寡糖诱导的烟草SKP1基因表达

壳寡糖是一种高效的植物抗性诱导剂,应用mRNA差异显示技术从经过壳寡糖诱导的枯斑三生烟草叶片中分离到了编号为5、31、37和46的4个基因片段。4个基因片段与本塞姆氏烟草(Nicotianabenthamiana)SKP1基因的mRNA同源性都达到82%,据此推断这4个片段是感病烟草品种枯斑三生烟草的SKP1基因。质粒双酶切及反向Northern分析结果表明,该基因表达在壳寡糖诱导下增强。由于SKP1基因与植物的抗病毒病相关,从而在mRNA水平上验证了壳寡糖的诱导抗性效应。

肝细胞癌患者肝癌组织S期激酶相关蛋白2、p27表达与临床病理特征的关系

目的探讨S期激酶相关蛋白(Skp)2、p27两种蛋白在肝细胞癌发生、发展及转移过程中的作用及相关性,为深入研究肝细胞癌发生发展机制及靶向治疗提供理论基础。方法应用EnVision法检测80例肝细胞癌Skp2、p27表达情况,并比较与不同临床病理特征间关系。结果肝细胞癌Skp2和p27阳性表达率明显高于正常对照组(P<0.05)。肝细胞癌Skp2和p27阳性表达与组织学分级、临床分期、肿瘤大小、肝内转移密切相关。肝细胞癌Skp2阳性表达与淋巴结转移和甲胎蛋白密切相关。肝细胞癌Skp2表达与p27表达呈明显负相关。结论 Skp2蛋白与肝细胞癌发生发展有关,并可能是反映肿瘤细胞增殖标志物和新的肿瘤基因治疗靶点。肝细胞癌中p27阳性表达与肿瘤发生、发展相关。

非小细胞肺癌中Skp2的表达及其与p27蛋白表达的关系

背景与目的S期激酶相关蛋白2(Skp2)是细胞周期正性调节因子之一,它能促进周期蛋白依赖性激酶抑制剂p27的泛素化蛋白水解,在肿瘤中过表达,本研究旨在探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer NSCLC)中Skp2表达的临床意义及其与p27蛋白表达的关系。方法应用组织芯片和免疫组织化学方法检测Skp2和p27在68例NSCLC组织和17例正常支气管上皮细胞中的表达。结果Skp2仅在肺癌组织中表达,且与患者的组织学类型(P=0.039),肿瘤细胞的分化程度(P=0.016),性别(P=0.012)和吸烟与否(P=0.026)显著相关,而与患者的年龄和TNM分期无关。p27在正常支气管上皮细胞中均有表达,在肺癌组织中表达降低;Skp2阳性表达的患者中p27表达明显降低,两者呈负相关(P=0.021)。结论在NSCLC中,Skp2蛋白表达的增高与p27泛素化依赖的蛋白降解有关,提示Skp2蛋白过表达在NSCLC的发生和发展中可能起重要作用。