乳球菌FML02-8合成胞外多糖的条件优化

用SAS8.0的四因素二水平析因设计筛选了影响EPS合成的显著因素为温度、初始pH和时间,用中心组合设计得出了优化的EPS产量模型并进行了验证。在优化条件下,EPS产量达400mg/L。3L发酵罐的pH控制(流加碱)发酵表明:发酵过程的pH控制5.5时EPS的合成量最高,达503.3mg/L,较未控制时的产量提高了约30%。

普及信息技术基础教育之三:SL-DIY02-3是单片机创新开发与机器人制作的核心控制板

单片机创新开发与机器人制作的控制核心板，由AVR单片机开发下载实验主机板SL—DIY02—3，配置SL—AVRISP高速并口下载电缆和软件组成。该板的单片机芯片型号为AVR的ATmega 16，并配有多媒体教学培训光盘。SL—DIY02—3单片机开发实验板组成了一个独立工作的单片机创新开发学习、机器人制作的工作系统。

稀土Sm促进的S_2O_8^(2-)/SnO_2-Fe_2O_3固体酸的制备及表征

以(NH4)2S2O8溶液为浸渍溶液,采用溶胶-凝胶法制备了添加稀土Sm元素的固体酸催化剂S_2O_2-8/SnO_2-Fe_2O_3-Sm_2O_3,采用FT-IR、XRD、TG-DTA等分析方法对催化剂进行表征。将催化剂应用于乙酸正丁酯的合成反应,考察了铁锡元素摩尔比、浸渍液浓度、焙烧温度、焙烧时间和稀土含量等条件对固体酸催化性能的影响,得到催化剂的最佳制备条件为:铁锡元素摩尔比为1∶4,(NH4)2S2O8浸渍液浓度为2.0 mol/L,焙烧温度为500℃,焙烧时间为2.5 h,添加稀土氧化钐含量为3%,乙酸正丁酯的酯化率最高达98%以上。添加稀土Sm元素的催化剂稳定性能良好,再生实验表明催化剂结焦及S_2O_2-8基团的流失是催化剂失活的主要原因。

NOD8对H2O2诱导的人肝细胞凋亡的影响

目的：探讨NOD8对H2O2诱导的人肝细胞L02凋亡的影响。方法：p EGFP-C2及p EGFP-NOD8重组质粒经Jet PRIME介导转染L02细胞;用H2O2诱导细胞凋亡。实验分为p EGFP-C2组、p EGFP-C2＋H2O2组和p EGFP-NOD8＋H2O2组。采用MTT法检测细胞活性,Western blotting检测细胞NOD8的蛋白表达,Hoechst 33342染色检测细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法检测细胞caspase-3活性。结果：通过MTT检测不同浓度（0.2-2 mmol/L）H2O2刺激6 h后的细胞活性,确定1 mmol/L H2O2为诱导细胞凋亡的剂量。Western blotting检测结果显示,转染p EGFP-NOD8质粒的细胞NOD8蛋白表达明显增加。Hoechst 33342染色法观察发现,p EGFPC2＋H2O2组有较多细胞出现强蓝色荧光细胞核,细胞凋亡较多,而p EGFP-NOD8＋H2O2组细胞凋亡明显减少。流式细胞术分析显示,p EGFP-C2＋H2O2组的细胞凋亡率明显升高,p EGFP-NOD8＋H2O2组的细胞凋亡率则显著下降。p EGFP-C2＋H2O2组细胞的caspase-3活性明显升高,而p EGFP-NOD8＋H2O2组细胞的caspase-3活性显著下降。结论：NOD8可抑制H2O2诱导的L02细胞凋亡,其作用机制可能与NOD8抑制细胞的caspase-3活性有关。

嗜热链球菌grx02对酒精性肝损伤大鼠保护作用的分子机制

研究了嗜热链球菌grx02对急性酒精性肝损伤大鼠模型的保护作用机制。建立了急性酒精性肝损伤大鼠模型,观察嗜热链球菌grx02对急性酒精性肝损伤大鼠血清转氨酶以及炎症细胞因子的改善作用。结果表明,酒精可诱导大鼠血清谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙二醛(MDA)水平显著升高,;血清、肝匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-8(IL-8)细胞因子水平显著升高;乙醇脱氢酶(ADH)、还原性谷胱甘肽(GSH)、增加谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性显著下降,与对照组比较均有显著性差异。结论:grx02可能通过抑制炎性因子,增强抗氧化酶系活性、抑制氧化应激引发的肝损伤,对大鼠急性酒精性肝损伤发挥保护作用。

五味子乙素对H_2O_2损伤人肝细胞Fas通路的影响

目的建立H2O2诱导氧化的L02人肝细胞模型,从细胞凋亡调控因子FAS、具有死亡功能区的Fas相关蛋白（fas associateddeath domain protein,FADD）和Caspase-8的表达变化来研究五味子乙素（Sch B）对L02细胞的可能作用机制。方法用实时荧光定量PCR法检测FAS、FADD和Caspase-8 mRNA的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,ELISA法检测FAS蛋白含量,Westernblotting检测FADD蛋白变化和分光光度法检测Caspase-8活性。结果在5~15μmol/L剂量范围内,Sch B可剂量依赖性抑制H2O2引起的FAS、FADD的表达和Caspase-8的活化。结论 Sch B可部分抑制H2O2诱导的L02细胞凋亡,其作用机制可能是通过影响了FAS-FADD-Caspase-8通路。

核因子-κB信号通路在自来水有机提取物致L02细胞炎性损伤中的作用

[目的]观察自来水有机提取物致正常人肝细胞株(L02细胞)炎性损伤中核因子-κB(NF-κB)信号通路的激活情况及其调控作用。[方法]采用固相萃取法提取自来水中的有机污染物。将L02细胞分别暴露于培养液(空白对照)、0.1%二甲基亚砜(溶剂对照)和0.312 5、0.625 0、1.250 0、2.500 0、5.000 0 L/m L自来水有机提取物中24、48、72 h。采用免疫印迹方法观察NF-κB信号通路的激活情况;并使用ELISA法测定细胞培养液上清中白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。[结果](1)L02细胞染毒24、48、72 h,细胞活力在各剂量组均明显降低(P<0.05)。(2)L02细胞染毒24、48、72 h,NF-κB抑制蛋白的表达水平在0.625 0 L/m L以上剂量组均明显降低(P<0.05);p65蛋白表达水平在染毒24、48 h时点,仅在1.250 0 L/m L以上剂量组明显升高(P<0.05),而在72 h时点,0.625 0 L/m L以上剂量组即明显升高(P<0.05)。(3)L02细胞染毒24、48 h后,0.625 0 L/m L以上处理组的IL-8水平均明显升高(P<0.05);而染毒72 h,低剂量组(0.312 5 L/m L)的IL-8水平即可升高明显(P<0.05);染毒24 h,1.250 0 L/m L以上处理组的TNF-α水平明显升高(P<0.05);而染毒48、72 h,TNF-α水平在0.625 0 L/m L以上处理组即升高明显(P<0.05)。与24 h染毒组比较,48、72 h各染毒组的IL-8与TNF-α水平均明显升高(P<0.05)。(4)IL-8、TNF-α水平与NF-κB抑制蛋白表达水平均呈负相关关系(r=-0.851 0、-0.818 0,P<0.05),与p65蛋白表达水平呈正相关关系(r=0.816 0、0.865 0,P<0.05)。[结论]自来水有机提取物可剂量-依赖性及时间-依赖性地激活NF-κB信号通路,诱导IL-8及TNF-α的分泌,此可能为其诱发L02细胞炎性损伤的重要原因之一。

PC-B2对AFB_1致肝细胞DNA损伤及修复影响

目的探讨原花青素B2(PC-B2)对黄曲霉毒素B1(AFB1)所致人胚胎肝细胞(L-02)DNA损伤及修复基因表达影响。方法取对数期生长良好的L-02细胞随机分为空白对照组、溶剂对照组、PC-B2处理组(3、10、30μg/m L)、AFB1染毒组(10、20、30、40μg/m L)和PC-B2干预组(3、10、30μg/m L PC-B2+30μg/m L AFB1),利用噻唑蓝法、酶联免疫吸附法和荧光定量PCR技术分别测定细胞增殖活力、细胞上清液8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)含量及细胞h OGG1基因表达水平。结果 AFB1可明显抑制L-02细胞增殖活力(P<0.05),呈剂量-效应关系;与溶剂对照组比较,30μg/m L AFB1组细胞活力[(69.9±2.46)%]明显降低(P<0.05),细胞上清中8-OHd G含量[(2.779±0.089)ng/m L]明显升高(P<0.05);与30μg/m L AFB1组比较,3、10、30μg/m L PC-B2干预组细胞活力[分别为(70.6±2.67)%、(69.7±1.94)%、(82.4±1.58)%]明显升高(P<0.05),细胞上清中8-OHd G含量[分别为(2.550±0.078)、(2.376±0.109)、(1.873±0.065)ng/m L]明显降低(P<0.05);与溶剂对照组比较,30μg/m L AFB1组L-02细胞h OGG1基因表达减少(P<0.05);与30μg/m L AFB1组比较,PC-B2干预组L-02细胞h OGG1表达明显升高。结论 PC-B2可提高肝细胞增殖活力,抑制AFB1所致肝细胞DNA损伤,其机制可能与调控修复基因h OGG1表达有关。

何首乌中1个新的木脂素酰胺类化合物

目的对何首乌Polygonum multiflorum 70%乙醇提取物进行化学成分研究,并考察部分化合物对正常人L02肝细胞生长的影响。方法采用大孔吸附树脂(DM-8型)、ODS反相硅胶、MCI和制备液相等多种色谱技术进行分离纯化,运用质谱和现代波谱学技术对化合物进行结构鉴定;采用CCK-8法,以细胞抑制率为评价指标,考察部分化合物对L02肝细胞生长的影响。结果从何首乌70%乙醇提取物中分离得到8个化合物,分别鉴定为(E)-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-[N-2-(4-hydroxyphenyl)ethyl]carbamoyl-5-[N-2-(4-hydroxyphenyl)ethyl]carbamoylethenyl-7-methoxybenzofuran(1)、cannabisin D(2)、grossamide(3)、eleutherinol(4)、isolariciresinol(5)、N,N-二甲基-色氨酸甲酯(6)、N-反式-阿魏酰酪胺(7)和N-反式阿魏酰-3-甲氧基酪胺(8)。化合物1、7和8对L02肝细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为3.02、190.35、300.61μmol/L。结论化合物1为新的木脂素酰胺类化合物,命名为何首乌庚素。化合物2~6均为首次从该植物中分离得到,并通过二维核磁谱补充了化合物4和6的核磁数据。化合物1对正常人L02肝细胞具有较强的抑制作用。

不同辅料对何首乌炮制减毒效果对比研究

目的根据历代本草记载的辅料种类,对比不同辅料炮制何首乌的减毒效果差异,为优选何首乌炮制减毒的辅料提供参考。方法采用UPLC-Q/TOF-MS表征不同辅料炮制何首乌样品的化学信息,以培养的正常人肝L02细胞为对象评价肝细胞毒性,综合比较不同辅料炮制何首乌的减毒效果差异及成分变化规律。结果不同辅料对何首乌炮制后的化学指纹图谱、指标性成分及肝细胞毒性有不同程度的影响,在相同蒸制压力和时间条件下,黑豆、米泔水或大枣蒸制对何首乌的主要成分包括没食子酸、儿茶素、顺式二苯乙烯苷、反式二苯乙烯苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚和大黄素及肝细胞毒性的影响相对较大,减毒效果最好的3种辅料分别为米泔水>大枣>黑豆。通过简单相关和多元相关综合分析,提示顺式二苯乙烯苷可能是何首乌肝细胞毒性相关的主要化学成分,大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷可能是何首乌潜在的毒性相关成分。结论传统记载的不同辅料用于何首乌炮制均可减毒,目前除了常用的黑豆有较好的减毒效果外,米泔水或大枣也可作为何首乌炮制减毒的候选辅料。