山西白猪SLA-DQB基因多态性与生产性状的关联分析

采用PCR-RFLP法对山西白猪SLA-DQB基因外显子2多态性和生产性状的关联分析进行了研究.结果表明,山西白猪SLA-DQB基因外显子2经HaeⅢ酶切后产生5种等位基因(A,B,C,D和E),6种基因型(AA,BB,CC,EE,AC和CD);最小二乘分析结果表明,EE基因型与其它2种基因型比较有较大的初生重,同AA和CC型比较差异显著(P<0.05),3种基因型在初生重的大小排列顺序为CC<AA<EE;28日龄体重、6月龄重和6月龄体尺等基因型间差异不显著(P>0.05).从生产性状看,本研究中EE基因型是优势基因型.因此,推测SLADQB基因对个体的初生重存在一定的影响.

SLA-DQB和DRB的生物信息学分析

对Genbank中猪的白细胞抗原(SLA)II类抗原基因DQB及DRB序列进行了SNP及氨基酸序列多态性分析,并对SLA-DQB及DRB分子进行了蛋白质序列模式分析(Prostie motif search)。结果表明:β1功能区存在较大的变异,特别是位于抗原肽结合槽的氨基酸位点中,其变异程度更大。SLA-DQB及DRB蛋白质序列中,主要存在8种类型的蛋白质序列模式位点,其中3种类型的磷酸化位点存在蛋白模序的改变,都位于β1功能区(前94个氨基酸),且多数位点突变频率较高。

小梅山、中梅山及大约克猪的SLA-DQB基因外显子2 PCR-RFLP多态性分析

采用限制性内切核酸酶RsaⅠ对中国地方猪种小梅山、中梅山及国外猪种大约克SLA DQB基因外显子 2的2 73bp扩增产物进行多态性分析。小梅山猪酶切后出现两种基因型 :2 4 6bp 2 7bp(AA)、132bp 84bp 30bp 2 7bp(BB) ;中梅山猪中出现 4种基因型 :2 4 6bp 2 7bp(AA)、132bp 84bp 30bp 2 7bp(BB)、132bp 114bp 2 7bp(CC)、2 4 6bp 132bp 84bp 30bp 2 7bp(AB) ;大约克猪中出现 5种基因型 :2 4 6bp 2 7bp(AA)、132bp 84bp 30bp 2 7bp(BB)、132bp 114bp 2 7bp(CC)、2 4 6bp 132bp 84bp 30bp 2 7bp(AB)、2 73bp 2 4 6bp 2 7bp(AD)。分析发现 ,SLA DQB基因外显子 2的 11、94和 12 4位碱基表现出多态性并在 3个猪种中检测到A、B、C和D 4个等位基因 ;χ2 适合性检验结果表明 ,小梅山、中梅山及大约克SLA DQB基因外显子 2在RsaⅠ酶切位点已经达到了Hardy

苏太猪SLA-DQB基因外显子2多态性及其与繁殖性能的关联分析

采用PCR-RFLP法对苏太猪SLA-DQB基因外显子2的PCR产物进行分析,结果显示,SLA-DQB基因外显子2经RsaⅠ酶切后,共分出4种基因型;经HaeⅢ酶切,共分出3种基因型。χ2适合性检验结果表明,苏太猪SLA-DQB基因外显子2在RsaⅠ和HaeⅢ酶切位点都已经达到了Hardy-Weinberg平衡状态。在RsaⅠ和HaeⅢ酶切后分出的4种组合带型中,组合带型为BBEE的种母猪第3胎总产仔数、产活仔数、初生窝重、断奶仔猪数和断奶窝重均显著高于组合带型为AADD的个体(P<0.05),也高于组合带型为ABDE和ACDE的个体,但是差异不显著(P>0.05)。

19个猪种SLA-DQB基因外显子2多态性分析

本研究旨在系统分析国内外猪种SLA-DQB基因的多态性,以期为进一步研究猪SLA-DQB与疾病抗性的相关性提供理论依据。采用PCR-RFLP方法,野猪、14个中国地方猪种和4个引进猪种SLA-DQB基因第2外显子经限制性内切酶HaeⅢ酶切后,共检测到5个等位基因,9种基因型。其中野猪中仅存在A、B 2种等位基因;家猪群体中出现了野猪群体中所没有的6种基因型和3种等位基因。中国地方猪种与引进猪种相比,RFLP带型较为丰富,五指山猪和淮猪中具有8种基因型,多态性最为丰富。除野猪群体中A等位基因为优势等位基因外,其它所有家猪群体中均以B和C基因为优势等位基因;临高猪中出现其它猪种所没有的D等位基因,表现出独特的特性。本研究结果提示,生态环境和遗传纯度均可能影响SLA-DQB等位基因的多样性,总体上,引进猪种、培育猪种和地方猪种SLA-DQB基因外显子2的基因型分布并不存在明显的差异,但PCR-RFLP带型在具体的品种之间的差别较大。

中国部分猪种SLA-DQB外显子2遗传多样性

运用 PCR SSCP 和克隆测序对中国部分猪种的 SLA DQB 基因外显子 2 的多态性分析表明:有功能的DQB 基因有68个新等位基因,假基因(SLA DXB )等位基因有5个。各等位基因的数量分布极其不平衡,而且许多品种都表现出共享等位基因。9个主要等位基因中, C08广泛分布在中国猪种的 6 大地方类型 11 个品种及云南和四川野猪中,它为中国猪种特有的共享等位基因,占总数的 55.10%。在单一的个体中拥有 5 条以上序列,说明SLA DQB 基因座在某些品种中拷贝数为3个。SLA DQB 外显子2的等位基因核苷酸和氨基酸多态变异位点分别高达81个和49个,等位基因多样度(H=0.889)以及核苷酸多样度(Pi=0.047)都很高,总体表现为β折叠区的Pi值均高于α螺旋区。综合分析表明华南型、西南型猪H 和Pi 均较高,高原型的藏猪最低。类群内遗传距离排序与Pi 值高低排序一样,可见各地方类型中核苷酸替换的差异正比于核苷酸多样度。类群间遗传距离比较,江海型与华北型间的距离最大,而华中型和高原型间的遗传距离最小。

广西巴马小型猪SLA-DQB基因外显子2的多态性研究

为探讨广西巴马小型猪SLA-DQB基因外显子2的多态性,以其耳组织为试验材料,经PCR扩增获得广西巴马小型猪SLA-DQB外显子2片段,片段大小为273 bp,含有1个RsaI酶切位点和5个HaeIII酶切位点,基因型分别为27bp/246 bp和84 bp/83 bp/7 bp/16 bp/29 bp/54 bp。采用PCR-RFLP对30头广西巴马小型猪SLA-DQB基因外显子2的PCR扩增产物进行多态性分析,发现广西巴马小型猪封闭群内S,LA-DQB基因外显子2无多态性位点;而克隆测序及同源性比较分析表明,广西巴马小型猪SLA-DQB基因外显子2序列与普通猪(Sus Scrofa)、人类(Homo sapiens)的同源性分别为94.1%、79.1%。

五指山、二花脸和皮特兰猪的SLA-DQB基因外显子2的PCR-RFLP多态性分析

采用PCR-RFLP法对五指山猪、二花脸猪及皮特兰猪的SLA-DQB基因外显子2的PCR产物进行了分析,结果显示,SLA-DQB基因外显子2经限制酶HaeⅢ和RsaⅠ酶切共分出9种RFLP组合带型,五指山猪、二花脸猪和皮特兰猪分别有3种、3种和5种组合带型。Hardy-Weinberg平衡分析表明,五指山猪和二花脸猪的SLA-DQB基因外显子2的两个酶切位点的PCR-RFLP带型达平衡状态,而皮特兰猪中只有RsaⅠ酶切位点达到平衡状态。

荣昌猪SLA-DQB基因β1结构域突变分析及蛋白质序列模式预测

为了深入了解荣昌猪SLA-DQB基因β1结构域的变异及蛋白质序列模式分布情况,对53头荣昌猪SLA-DQB基因的β1结构域进行了克隆测序和序列多重比对,并在线预测蛋白质序列模式。结果发现,222bp区域内存在9个单核苷酸的插入位点、16个单核苷酸的缺失位点和89个SNPs位点。74个氨基酸中仅由SNP位点导致的氨基酸变异位点共37个,其中有24个位点氨基酸的类型发生变化。对50条SLA-DQB基因β1结构域蛋白质序列分析发现7种类型共174个蛋白质序列模式位点。单条序列中蛋白质序列模式位点最多的12个,最少的2个。蛋白质序列模式突变位点主要发生在第9、26、45、53、61个氨基酸上,涉及到5种类型蛋白质序列模式位点的改变。结果提示,荣昌猪SLA-DQB基因β1结构域存在丰富的遗传变异和多样化的蛋白质序列模式。

合作猪SLA-DQB基因第3外显子多态性分析

以合作猪为试验材料,采用PCR-SSCP检测442只合作猪SLA-DQB基因第3外显子的多态性,克隆测序群体内变异产生的各等位基因序列,构建系统发育树以明确合作猪SLA-DQB基因等位基因之间的遗传关系.结果表明:合作猪SLA-DQB基因第3外显子中表现了7个基因型,其中有4个新等位基因,分别命名为B、C、D、E,序列分析中发现了11个核苷酸多态位点,这些多态位点主要由点突变形成,其中转换9个(占81.82%),颠换2个(占18.18%).表明合作猪SLA-DQB基因第3外显子具有丰富的遗传多态性,群体中可能蕴藏着更多的抗性遗传资源.

山西白猪SLA-DQB基因多态性研究

为评价和选育山西白猪提供分子基础数据,采用PCR(polymerase chain reaction)-RFLP(restriction fragment length polymorphism)法对202头山西白猪SLA(swine leukocyte antigen)-DQB基因外显子2的273 bp扩增产物多态性进行研究.山西白猪经HaeⅢ酶切后产生6种基因型:167 bp/23 bp/29 bp/54 bp(AA)、84 bp/83bp/23 bp/29 bp/54 bp(BB)、167 bp/4 bp/102 bp(CC)、167 bp/23 bp/83 bp(EE)、167 bp/23 bp/29 bp/54 bp/4 bp/102 bp(AC)和167 bp/106 bp/4 bp/102 bp(CD);5种等位基因(A、B、C、D和E),其中等位基因A和基因型AA有明显优势.山西白猪SLA-DQB基因外显子2 HaeⅢ-RFLP带型较多.

6个中国小型猪种SLA-DQB基因外显子2多态性分析

采用PCR-RFLP法对甘孜藏猪、合作猪、滇南小耳猪、荷包猪、五指山猪和巴马小型猪SLA-DQB基因外显子2多态性进行分析。结果表明:经RsaⅠ酶切检测到5种等位基因,14种RFLP带型,遗传杂合度(He)在0.538~0.729,多态信息含量(PIC)在0.488~0.728,该位点表现为高度多态;χ~2适合性检验显示,甘孜藏猪、巴马小型猪和五指山猪3个群体处于Hardy-Weinberg平衡状态。经HinfⅠ酶切检测到3种等位基因,6种RFLP带型,He在0.315~0.524,PIC在0.291~0.461,在该位点表现为中度多态。χ~2适合性检验显示,甘孜藏猪、滇南小耳猪、巴马小型猪、荷包猪4个群体处于Hardy-Weinberg平衡状态。因此,6个小型猪种的SLA-DQB基因外显子2多态性丰富且存在明显差异。

烟台黑猪SLA-DQB基因外显子2多态性及其与仔猪腹泻的关联分析

采用PCR-RFLP方法对烟台黑猪DQB基因外显子2的多态性进行研究,并对该位点与仔猪腹泻的关联进行了分析。结果表明,在烟台黑猪DQB基因外显子2上共检测出4种等位基因(A、B、C、D),7种RFLP带型(AA、BB、CC、AB、AC、BC、AD),该位点具有较丰富的多态性。卡方适合性检验显示,烟台黑猪的DQB基因外显子2没有达到Hardy-Weinberg平衡(P<0.05)。最小二乘法分析结果表明,烟台黑猪的性别和DQB外显子2的基因型均对仔猪腹泻无显著影响(P>0.05),而性别与基因型的互作效应对仔猪腹泻具有极显著的影响(P<0.01),在公猪群体中,AD基因型仔猪腹泻评分高于AA基因型个体(P<0.05),在母猪群体中BB、AC、BC、CC基因型仔猪腹泻评分高于其他基因型仔猪(P<0.05)。

广西巴马小型猪SLA-DQB基因的克隆及序列分析

利用RT-PCR的方法从广西巴马小型猪肝脏组织中扩增SLA-DQB基因的编码区序列,旨在为下一步构建SLA-DQB转基因广西巴马小型猪奠定基础。结果表明,克隆的广西巴马小型猪SLA-DQB基因编码区长687 bp,与GenBank参考序列(NM_001113694)相比,共有15个氨基酸发生突变(位点为10、14、19、27、29、38、39、48、58、61、68、72、76、78、183)。与普通猪、其他小型猪、奶牛、人类及小鼠的同源性分别为95.8%、95.8%、88.1%、86.2%和80.0%。

八眉猪DQB基因多态性及其与仔猪腹泻的相关性研究

为了探讨SLA-DQB基因作为猪抗病育种辅助选择标记的可能性,试验采用PCR-RFLP方法对八眉猪SLA-DQB基因外显子2的多态性及其与仔猪腹泻的相关性进行研究。结果表明:八眉猪SLA-DQB基因外显子2多态性并不丰富,仅检测出3个等位基因和5种基因型,其多态信息含量为0.23,遗传杂合度仅为0.24;八眉猪DQB基因外显子2变异程度比较低。该群体偏离了HardyWeinberg平衡(P<0.01)。仔猪腹泻与性别不相关(P>0.05),与DQB基因外显子2的基因型之间呈现极显著相关(P<0.01),AA和AB基因型腹泻评分均极显著高于AC、BB和CC基因型(P<0.01)。不同性别DQB外显子2的基因型对仔猪腹泻的影响不同。在公猪中,AB基因型个体的腹泻评分高于AA、AC、BB、CC个体(P<0.05);而在母猪中,AA和AB腹泻评分极显著高于AC、BB和CC(P<0.01),可见性别影响了DQB外显子2基因型与腹泻之间的关系。说明八眉猪DQB基因外显子2多态性较低,其基因型对仔猪腹泻有影响,可作为猪抗病育种的选择标记。

中国猪种DQB新等位基因的克隆和分析

克隆和序列分析中国猪种DQB基因cDNA ,为猪异种器官移植的免疫识别机制的研究提供基础。采用RT PCR方法扩增猪DQB基因cDNA ,克隆入测序载体 ,然后进行测序及其序列分析。结果获得具有阅读框架的三个结构和已有序列不同的DQB新等位基因 ,基因序列号分别为AY10 2 4 76、AY10 2 4 77和AY10 2 4 78,其长度为 786个核苷酸 ,除末端终止密码外 ,编码 2 6 1个氨基酸残基。发现了三个猪DQB新等位基因 。

4个猪种SLA-DQB基因外显子2多态性分析

目的:为研究SLA与抗病育种和经济性状的关系提供理论依据。方法:采用限制性内切酶HaeⅢ对大白猪、长白猪、杜洛克猪和马身猪SLA-DQB基因外显子2的273bp扩增产物多态性进行分析。结果:共检测到A,B,C和E等4个等位基因和AA、BB、AB、AC、AE等5种基因型。在大猪和马身猪中,A等位基因频率较高,分别为0.528和0.587;在长白猪中,检测到3个等位基因A、B和E,频率分别为0.611、0.278和0.111;而在杜洛克中,仅存在B等位基因。适合性检验表明,大白猪和杜洛克猪在该位点处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。结论:SLA-DQB基因外显子2多态性在4个猪种具有明显差别。