沉默lncRNA SLC16A1-AS1对脑胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨沉默长链非编码RNA(lncRNA)SLC16A1-AS1对脑胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响。方法PCR检测2021年5月至2023年1月手术切除的62例脑胶质瘤组织lncRNA SLC16A1-AS1、微小RNA(miR)-584-5p以细胞外蛋白调节激酶1(MAPK1)m RNA,免疫印迹法检测MAPK1蛋白表达;以瘤旁组织(距离肿瘤边缘>2 cm)作为正常脑组织。从胶质瘤组织中分离、培养胶质瘤细胞,进行CD133、Neatin免疫荧光染色鉴定;转染不同质粒沉默lncRNA SLC16A1-AS1、上调或下调miR-584-5p表达;应用CCK-8法、划痕实验、Transwell实验和流式细胞术检测细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡情况;免疫印迹法检测细胞MAPK1、细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、caspase-3蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA SLC16A1-AS1、miR-584-5p和MAPK1的靶向关系。结果胶质瘤组织lncRNA SLC16A1-AS1、MAPK1呈高表达(P<0.05),miR-584-5p呈低表达(P<0.05)。免疫荧光染色显示,分离培养的细胞CD133、Nestin均呈阳性表达。沉默lncRNA SLC16A1-AS1表达,明显抑制体外培养的胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05),明显下调细胞CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达(P<0.05),明显上调miR-584-5p、caspase-3表达。抑制miR-584-5p明显逆转沉默lncRNA SLC16A1-AS1对体外培养的价胶质瘤细胞的作用。双荧光素酶报告基因实验证实lncRNA SLC16A1-AS1与miR-584-5p/MAPK1存在靶向调节关系。结论胶质瘤组织lncRNA SLC16A1-AS1呈高表达,沉默lncRNA SLC16A1-AS1可以上调miR-584-5p表达,抑制MAPK1表达,进而抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡。

LncRNA SLC16A1-AS1靶向调控miR-182对乳腺癌BT549细胞增殖能力的影响

目的探讨LncRNA SLC16A1-AS1对miR-182的靶向调控作用及对乳腺癌BT549细胞增殖能力的影响。方法使用GEPIA2工具分析TCGA数据库中LncRNA SLC16A1-AS1在三阴型乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)中的差异性表达,应用Kaplan-MeieRPlotter数据库进行生存分析。利用RegRNA2和miRanda数据库预测LncRNA SLC16A1-AS1的潜在靶标miRNAs。用qRT-PCR检测LncRNA SLC16A1-AS1在TNBC组织及细胞系(BT549、BT20、MDA-MB-231及MDA-MB-468)中的表达。利用双荧光素酶活性测定及RNA免疫沉淀实验验证LncRNA SLC16A1-AS1与miR-182的结合力。用CCK-8及集落形成实验检测不同处理组BT549细胞增殖能力的变化。结果生物信息学分析结果显示,TNBC组织中LncRNA SLC16A1-AS1的表达水平显著低于正常组织(P<0.001),与预后良好相关(P<0.001),LncRNA SLC16A1-AS1与miR-182之间存在结合位点。LncRNA SLC16A1-AS1在63例TNBC组织中的表达水平显著低于瘤旁组织(7.94%vs 63.49%,P<0.001),在TNBC细胞系中的表达水平亦显著低于正常乳腺上皮细胞系(P<0.01)。在BT549细胞中过表达miR-182可显著降低LncRNA SLC16A1-AS1-WT载体的荧光酶素活性,RNA免疫沉淀实验显示,AGO2同时富集LncRNA SLC16A1-AS1及miR-182(P<0.01)。与对照组相比,过表达LncRNA SLC16A1-AS1显著降低BT549细胞的增殖活性并减少集落形成数量,共表达LncRNA SLC16A1-AS1与miR-182可恢复BT549细胞的增殖能力(P<0.01)。结论LncRNA SLC16A1-AS1在TNBC中低表达,且通过靶向调控miR-182在体外抑制TNBC细胞的增殖能力,LncRNA SLC16A1-AS1/miR-182轴有望成为TNBC治疗的潜在靶点。

LncRNA SLC16A1-AS1通过靶向miR-15a-5p负向调控子宫颈癌细胞的增殖和侵袭

目的探讨LncRNA SLC16A1-AS1通过靶向miR-15a-5p调控子宫颈癌细胞增殖和侵袭的作用机制。方法采用qRT-PCR法检测SLC16A1-AS1在子宫颈癌组织、癌旁组织、人正常子宫颈上皮细胞(H8)及子宫颈癌细胞株(HeLa、HCC94、SiHa、C33A)中的表达水平。选择SLC16A1-AS1表达最少的子宫颈癌细胞株,分别转染阴性质粒和SLC16A1-AS1过表达质粒,标记为NC组和SLC16A1-AS1组。应用MTT法和Transwell实验分别检测过表达SLC16A1-AS1对子宫颈癌细胞增殖和侵袭能力的影响。生物信息学网站预测及双荧光素酶报告基因实验,验证SLC16A1-AS1与靶基因的靶向关系。qRT-PCR和Western blot法检测靶基因及相关蛋白的表达。结果子宫颈癌组织中SLC16A1-AS1的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.01)。与H8细胞相比,HeLa、HCC94、SiHa、C33A细胞中SLC16A1-AS1的表达水平降低(P<0.05)。与NC组相比,过表达SLC16A1-AS1的C33A细胞增殖能力降低(P<0.05),过表达SLC16A1-AS1的C33A细胞侵袭数下降(P<0.01)。生物信息学网站预测显示,SLC16A1-AS1可与miR-15a-5p有特异性结合位点。双荧光素酶报告基因实验结果证实SLC16A1-AS1可与miR-15a-5p直接结合(P<0.01)。SLC16A1-AS1可负向调控miR-15a-5p的表达(P<0.01)。与NC组相比,SLC16A1-AS1组细胞增殖表型蛋白(如PCNA、Ki-67)和细胞侵袭表型蛋白(如N-cadherin、Slug)表达均降低。结论SLC16A1-AS1在子宫颈癌中低表达,SLC16A1-AS1通过靶向下调miR-15a-5p的表达,抑制子宫颈癌细胞C33A的增殖和侵袭。

SLC16A1-AS1负调控miR-450b-5p对结直肠癌细胞Caco-2细胞周期、迁移、侵袭和凋亡的影响

目的探讨SLC16A1-AS1对结直肠癌细胞Caco-2细胞周期、迁移、侵袭和凋亡的影响及可能机制。方法RT-qPCR检测33例结直肠癌患者的癌组织和癌旁组织中SLC16A1-AS1和miR-450b-5p的表达水平。体外培养Caco-2细胞,双荧光素酶报告基因实验验证SLC16A1-AS1和miR-450b-5p靶向关系。将Caco-2细胞分为pcDNA组、pcDNA-SLC16A1-AS1组、pcDNA-SLC16A1-AS1+miR-NC组、pcDNA-SLC16A1-AS1+miR-450b-5p mimics组,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白表达。结果与癌旁组织比较,结直肠癌组织中SLC16A1-AS1的表达降低(P<0.05),而miR-450b-5p的表达升高(P<0.05)。SLC16A1-AS1在Caco-2细胞中靶向负调控miR-450b-5p的表达。与pcDNA组比较,pcDNA-SLC16A1-AS1组Caco-2细胞的细胞周期G0-G1期延长(P<0.05),S期缩短(P<0.05),细胞迁移和侵袭数及Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率和Bax蛋白表达升高(P<0.05)。与pcDNA-SLC16A1-AS1+miR-NC组比较,pcDNA-SLC16A1-AS1+miR-450b-5p mimic组Caco-2细胞的细胞周期G0-G1期缩短(P<0.05),S期延长(P<0.05),细胞迁移和侵袭数及Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率和Bax蛋白表达降低(P<0.05)。结论SLC16A1-AS1在结直肠癌组织中表达呈低表达,过表达SLC16A1-AS1可靶向负调控miR-450b-5p抑制结直肠癌Caco-2细胞的细胞周期进程、迁移和侵袭,并促进Caco-2细胞凋亡。

SLC9A3-AS1调控miR-148a-3p/ROCK1信号轴影响肾癌细胞生物学功能

目的检测lncRNA SLC9A3-AS1在肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)组织与肾癌细胞中的表达水平,探讨其促进肾癌细胞恶性生物学行为的机制。方法应用GEPIA2在线软件(http://gepia2.cancer-pku.cn/)分析TCGA数据库中SLC9A3-AS1在ccRCC组织中的表达水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SLC9A3-AS1在不同肾癌细胞系、24例ccRCC组织与癌旁正常肾脏组织中的表达水平;应用细胞增殖/毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和Transwell小室迁移实验检测敲低SLC9A3-AS1表达对肾癌细胞增殖与迁移的影响;应用蛋白质免疫印迹法检测增殖与迁移相关信号通路蛋白的表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证SLC9A3-AS1与miR-148a-3p/ROCK1轴的靶向调控关系。结果GEPIA2软件分析结果显示,相较正常肾脏组织,SLC9A3-AS1在肾透明细胞癌组织中表达显著上调(P<0.01)。qRT-PCR结果显示,相较癌旁正常肾脏组织,SLC9A3-AS1在24例ccRCC组织中表达显著上调(P<0.01);相较永生化肾小管上皮细胞,SLC9A3-AS1在4种肾癌细胞系中表达均显著上调,以786-O细胞最为显著(P<0.01)。干扰SLC9A3-AS1表达,可显著抑制786-O细胞的增殖与迁移能力,上调E-cadherin的蛋白表达水平,而下调N-cadherin、MMP2的蛋白表达水平(均P<0.05);过表达miR-148a-3p可显著抑制786-O细胞的增殖与迁移能力(P<0.01)。双荧光素酶报告基因检测结果表明,SLC9A3-AS1可特异性结合miR-148a-3p,后者进一步靶向结合ROCK1 mRNA的3′UTR区域;过表达miR-148a-3p可明显下调ROCK1 mRNA的表达水平,敲低miR-148a-3p表达则产生相反的效应;敲低SLC9A3-AS1表达可显著下调786-O细胞中ROCK1 mRNA与蛋白的表达水平(P<0.01);下调miR-148a-3p表达可部分逆转SLC9A3-AS1沉默对786-O细胞增殖与迁移的抑制作用(P<0.05)。结论SLC9A3-AS1在ccRCC中通过调控miR-148a-3p/ROCK1轴发挥促癌作用,有望成为ccRCC的一个新的分子标志物。

NKX2-1-AS1介导miR-96-5p/PRDM16轴对未分化甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)NK2同源异形盒1-反义RNA 1(NKX2-1-AS1)介导微RNA(miR)-96-5p/含有PR结构域的蛋白16(PRDM16)轴对未分化甲状腺癌(ATC)细胞体外增殖、迁移和侵袭以及体内移植瘤生长的影响。方法基于生物信息学筛选ATC组织及细胞中差异表达的lncRNA NKX2-1-AS1,并进一步筛选其靶基因miR-96-5p和下游靶基因PRDM16。双荧光素酶报告基因实验验证NKX2-1-AS1与miR-96-5p以及miR-96-5p与PRDM16之间的关系。Western blotting检测过表达miR-96-5p对NKX2-1-AS1过表达的CAL-62细胞PRDM16表达的影响。平板克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验分别检测敲减PRDM16对过表达NKX2-1-AS1的CAL-62细胞增殖、迁移和侵袭的影响。裸鼠皮下注射CAL-62细胞,观察敲减PRDM16对NKX2-1-AS1过表达的CAL-62细胞移植瘤生长的影响。结果基于生物信息学筛选出参与调节ATC发展的NKX2-1-AS1/miR-96-5p/PRDM16轴。双荧光素酶报告基因实验验证结果显示NKX2-1-AS1与miR-96-5p、miR-96-5p与PRDM16结合。过表达NKX2-1-AS1上调CAL-62细胞中PRDM16蛋白表达;而过表达miR-96-5p可逆转此上调作用。过表达NKX2-1-AS1抑制CAL-62细胞体外增殖、迁移和侵袭以及体内移植瘤生长;而敲减PRDM16可逆转此抑制作用。结论NKX2-1-AS1可能作为竞争性内源性RNA与miR-96-5p竞争结合下游靶基因PRDM16,上调PRDM16表达,从而抑制ATC细胞体外增殖、迁移和侵袭以及体内移植瘤生长。

lncRNA SLC9A3-AS1在肝细胞癌中的临床意义及生物学功能分析

目的探讨lncRNA SLC9A3-AS1在肝细胞癌(HCC)中的表达意义和其参与HCC发生发展的潜在作用机制。方法收集37例HCC组织及其配对癌旁组织,以及HCC细胞RNA,利用qRT-PCR检测lncRNA SLC9A3-AS1在组织和细胞中的表达水平,并分析其与患者临床病理特征的关系。绘制lncRNA SLC9A3-AS1的受试者工作特征(ROC)曲线,分析其对HCC的诊断效能。通过生物信息学方法筛选与lncRNA SLC9A3-AS1结合的RNA结合蛋白,并绘制韦恩图,分析lncRNA SLC9A3-AS1与结合蛋白表达的相关性,以及蛋白表达与HCC病理分期和患者生存预后的关系。结果lncRNA SLC9A3-AS1在HCC组织和细胞中表达下调,其表达水平与患者血清甲胎蛋白(AFP)水平明显相关(P<0.05)。lncRNA SLC9A3-AS1的ROC曲线下面积(AUC)为0.849(95%CI:0.796~0.886)。韦恩图显示5个与lncRNA SLC9A3-AS1潜在结合的蛋白:hnRNPA1、YTHDC1、RBM4、NONO和RBMx,其表达与lncRNA SLC9A3-AS1表达呈明显正相关(P<0.05)。随着HCC分期的进展,不同分期的RNA结合蛋白表达量差异有统计学意义(P<0.05);RBM4、NONO和RBMx低表达患者总体生存期明显长于高表达患者(P<0.05)。结论lncRNA SLC9A3-AS1在HCC中下调,有望作为HCC诊断的生物标志物,并且可能通过与RNA结合蛋白互作调控HCC进展。

LncRNA SLC26A4-AS1在人垂体瘤组织中的表达及其意义

目的 探讨lncRNA SLC26A4-AS1在人垂体瘤中的表达情况,并分析其与垂体瘤侵袭性的关系。方法 收集经病理确诊的16例非侵袭性垂体瘤和25例侵袭性垂体瘤,利用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测SLC26A4-AS1在人垂体瘤中的表达,并进一步分析SLC26A4-AS1与垂体瘤临床参数的相关性。结果 与非侵袭性垂体瘤相比,SLC26A4-AS1在侵袭性垂体瘤中表达降低;与无功能瘤相比,SLC26A4-AS1在泌乳素瘤、生长激素瘤和促肾上腺皮质激素瘤中表达无明显差异。与SLC26A4-AS1高表达组相比,SLC26A4-AS1低表达组中肿瘤体积≥3 cm^(3)的比例明显增加、侵袭性垂体瘤的比例明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 SLC26A4-AS1在侵袭性垂体瘤中表达降低,SLC26A4-AS1的低表达与肿瘤体积和侵袭性相关。

长链非编码RNA SATB2-AS1抑制肺腺癌进展的机制研究

目的长链非编码RNA(lncRNA)SATB2的反义转录物(SATB2-AS1)对肺腺癌细胞生物学功能的影响和机制研究。方法收集25例肺腺癌患者的肿瘤组织和癌旁组织,检测SATB2-AS1表达水平。用lncRNA SATB2-AS1的过表达载体(pcDNA-SATB2-AS1)和shRNA或IGF2BP2的shRNA(sh-SATB2-AS1;sh-IGF2BP2)和/或SLC7A11的shRNA(sh-SLC7A11)转染肺腺癌细胞A549。RIP分析评估IGF2BP2蛋白分别与SATB2-AS1或SLC7A11 mRNA的结合;CCK-8和Transwell实验分别用于检测肺腺癌细胞的增殖和侵袭能力;RT-qPCR和Western blot分别检测基因和蛋白表达。结果与癌旁组织和人正常支气管上皮细胞系BEAS-2B相比,SATB2-AS1在肺腺癌患者的肿瘤组织和肺腺癌细胞系中的表达显著下调(P<0.01)。过表达SATB2-AS1抑制A549细胞增殖和侵袭,沉默SATB2-AS1促进细胞增殖和侵袭(P<0.05)。过表达SATB2-AS1后A549细胞中的Fe2+浓度、活性氧(ROS)水平以及丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.01),还原性谷胱甘肽(GSH)含量及铁死亡关键蛋白SLC7A11、GPX4的表达显著升高(P<0.01)。SATB2-AS1通过与IGF2BP2蛋白结合显著促进IGF2BP2蛋白与SLC7A11 mRNA结合,降低SLC7A11 mRNA的稳定性(P<0.01)。沉默SLC7A11显著逆转了SATB2-AS1沉默对A549细胞的影响。结论lncRNA SATB2-AS1通过招募IGF2BP2蛋白破坏SLC7A11mRNA稳定性,诱导肺腺癌细胞铁死亡,抑制细胞增殖和侵袭,从而抑制肺腺癌进展。

LncRNA ASB16-AS1调控前列腺癌细胞增殖转移的分子机制

目的探讨长链非编码RNA ASB16-AS1(LncRNA ASB16-AS1)对前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其分子机制。方法体外培养前列腺癌细胞株LNCaP,分别将si-NC、si-ASB16-AS1、miR-NC、miR-760 mimics、si-ASB16-AS1+anti-miR-NC、si-ASB16-AS1+anti-miR-760转染至LNCaP细胞。采用MTT检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力,双荧光素酶报告实验验证ASB16-AS1与miR-760的靶向关系,Western blotting法检测细胞周期蛋白1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、p21蛋白水平。结果与转染si-NC、miR-NC相比,转染si-ASB16-AS1、miR-760 mimics后细胞增殖活力降低(P均<0.05),迁移、侵袭细胞数减少(P均<0.05)。双荧光素酶报告实验证实ASB16-AS1能够靶向结合miR-760。与si-ASB16-AS1+anti-miR-NC组相比,si-ASB16-AS1+anti-miR-760组细胞增殖活力升高(P<0.05),迁移、侵袭细胞数增多(P均<0.05),CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平升高(P均<0.05),p21蛋白水平降低(P<0.05)。结论LncRNA ASB16-AS1通过靶向干扰miR-760表达从而促进前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭。

白蛋白结合型紫杉醇调控SLC25A25-AS1对肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨白蛋白结合型紫杉醇是否调控SLC25A25-AS1影响肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭.方法 将A549细胞分为对照组、低剂量药物组、中剂量药物组、高剂量药物组、高剂量药物+si-NC组、高剂量药物+si-SLC25A25-AS1组.细胞计数试剂盒(CCK-8)法、集落形成实验检测细胞增殖;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法分析上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)和神经钙黏素(N-cadherin)蛋白表达量.结果 与对照组比较,中、高剂量药物组A549细胞活力、克隆形成数、迁移和侵袭细胞数、划痕愈合率、N-cadherin蛋白表达量显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白和SLC25A25-AS1表达量显著升高(P<0.05).与高剂量药物+si-NC组比较,高剂量药物+si-SLC25A25-AS1组A549细胞活力、克隆形成数、迁移和侵袭细胞数、划痕愈合率、N-cadherin蛋白表达量显著升高(P<0.05),E-cad-herin蛋白表达量显著降低(P<0.05).结论 白蛋白结合型紫杉醇可抑制肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭,其机制可能与上调SLC25A25-AS1表达有关.

转录因子SREBP1通过促进SLC16A8表达调控肿瘤酸性微环境参与结直肠癌发生发展

目的:探讨转录因子SREBP1通过促进SLC16A8表达调控肿瘤酸性微环境参与结直肠癌(CRC)发生发展的机制。方法:通过生物信息学数据库分析SLC16A8在CRC中的表达情况及其与患者预后的关系。使用RT-qPCR法检测并比较各CRC细胞系中SLC16A8的表达水平;过表达SLC16A8后使用CCK-8法检测细胞增殖活性;使用Transwell法检测细胞侵袭能力;使用Metascape数据库对SLC16A8的功能富集进行分析;使用乳酸试剂盒检测细胞上清液中乳酸水平。通过生物信息学数据库分析SLC16A8的转录因子及潜在结合位点;通过双荧光素酶实验检测SREBP1蛋白与SLC16A8相关性;通过UALCAN portal分析SREBP1 mRNA表达水平;通过Kaplan-Meier Plotter分析CRC中SREBP1表达水平与预后的关系;通过GEPIA2分析SREBP1表达水平与SLC16A8的相关性;使用Western blot分析过表达SREBP1对SLC16A8蛋白表达的影响。通过拯救实验分析SREBP1是否通过正调控SLC16A8促进乳酸转运。结果:SLC16A8高表达的CRC患者提示预后较差(P<0.05),且SLC16A8在CRC组织及细胞系中均为高表达水平(P<0.05)。过表达SLC16A8可提高CRC细胞增殖及侵袭能力。功能富集分析数据表明SLC16A8的功能聚集在乳酸转运及血管生成,且SLC16A8可提高CRC细胞上清液中乳酸水平。双荧光素酶实验证实SREBP1可与SLC16A8直接结合。SREBP1在CRC组织中高表达并与患者预后较差具有相关性(P<0.05)。SREBP1可促进SLC16A8蛋白表达,且SREBP1可通过正调控SLC16A8促进乳酸转运。结论:SLC16A8可能通过调控肿瘤酸性微环境促进CRC细胞增殖和侵袭,转录因子SREBP1通过上调SLC16A8表达参与CRC发生发展。

SLC7A11-AS1调控miR-429对口腔鳞癌细胞CAL-27细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的探讨SLC7A11-AS1对口腔鳞癌细胞CAL-27细胞增殖、凋亡及迁移的影响及分子机制.方法收集29例口腔鳞癌患者癌组织及癌旁组织;CAL-27细胞分为si-NC组、si-SLC7A11-AS1组、水SLC7A11-AS1+anti-miR-NC组、si-SLC7A11-AS1+anti-miR429组。实时荧光定暈PCR(RT-qPCR)检测SLC7A11-AS1和miR-429表达水平;平板克隆实验检测克隆形成细胞数;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell检测细胞迁移数;蛋内质印迹(Western hlot)法检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证SLC7A11-AS1和miR-429的靶向关系.结果与癌旁组织相比,口腔鳞癌组织中SLC7A11-AS1表达水平升高,miR-429表达水平降低(P<0.05)。抑制SLC7A11-AS1表达后,CAL-27细胞克隆形成数减少,细胞凋亡率升高,迁移细胞数减少,Bax表达水平升高,Bcl-2表达水平降低(P<0.05)。同时抑制SLC7A11-AS1和miR-429表达后,CAL-27细胞克隆形成数增加,细胞凋亡率降低,迁移细胞数增加,Bax表达水平降低,Bcl-2表达水平升高(P<0.05).结论抑制SLC7A11-AS1表达可通过上调miR-429抑制口腔鳞癌细胞CAL-27增殖及迁移,且促进CAL-27细胞凋亡.

lncRNA ASB16-AS1在结直肠癌组织中的表达及对结直肠癌细胞增殖的影响

目的:探讨lncRNAASB16-AS1在结直肠癌(CRC)中的表达及其对CRC细胞增殖的影响。方法:采用逆转录定量PCR(qRT-PCR)检测26对CRC及其配对癌旁组织、4株CRC细胞(HT-29、SW-480、SW-620及LOVO)中lncRNAASB16-AS1的表达,选择2株lncRNAASB16-AS1表达最高的CRC转染ASB16-AS1干扰片段作为干扰组,实验设置对照组(不转染)及阴性对照组(转染阴性对照干扰片段),采用CCK-8法检测转染0、24、48、72及96h时细胞的增殖情况,qRT-PCR法检测转染48h时细胞miR-185-5p表达;将含有ASB16-AS1野生型序列或突变序列的质粒与miR-185-5pmimic或阴性对照mimic共转染至293T细胞,转染24h后采用双荧光素酶法检测各组细胞的荧光强度,观察lncRNAASB16-AS1对miR-185-5的调控作用。结果:qRT-PCR结果显示,lncRNAASB16-AS1在CRC组织中的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01),CRC细胞HT-29及LOVO中lncRNAASB16-AS1的表达水平显著高于SW-480及SW-620(P<0.01);与阴性对照组比较,转染ASB16-AS1干扰片段的HT-29和LOVO细胞中lncRNAASB16-AS1的表达水平显著降低(P<0.01);转染48h开始,干扰组HT-29和LOVO细胞的增殖水平显著低于阴性对照组(P<0.05);转染48h时,下调ASB16-AS1后细胞中miR-185-5p表达水平显著升高(P<0.05);双荧光素酶结果显示,野生型ASB16-AS1和miR-185-5pmimic共转染,显著降低293T细胞中双荧光素酶的活性(P<0.05)。结论:CRC的发生发展的机制与lncRNAASB16-AS1上调有关。

胎盘SLC16A1基因及单羧酸转运蛋白1表达量与妊娠期糖尿病的关系

目的探讨胎盘SLC16A1基因及单羧酸转运蛋白1(MCT1)表达量与妊娠期糖尿病(GDM)的关系。方法选取该院1361例妊娠女性为研究对象,其中GDM患者281例纳入GDM组,健康妊娠女性1080例纳入正常妊娠组。正常妊娠组及GDM组按1∶1匹配(n=105)后比较两组胎盘MCT1及SLC16A1基因表达量,并采用Logistic回归分析MCT1及SLC16A1基因表达量与GDM的关系。匹配参数为体质量指数、年龄、生产史、GDM病史(匹配容差分别为0.3、0、0、0)。结果GDM组、正常妊娠组SLC16A1基因表达量分别为0.390(0.006,2.980)、0.561(0.014,4.205),GDM组明显低于正常妊娠组,差异有统计学意义(P<0.05)。GDM组、正常妊娠组MCT1表达量分别为0.097±0.044、0.166±0.030,GDM组明显低于正常妊娠组,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示SLC16A1基因表达量增加是GDM的保护因素(OR=0.740,95%CI 0.561~0.974,P<0.05)。结论GDM患者胎盘SLC16A1基因及MCT1表达量均下降,SLC16A1基因表达量增加是GDM的保护因素。

SLC7A11-AS1调控miR-429对口腔鳞癌细胞CAL-27细胞的影响

分析口腔鳞癌患者通过 SLC7A11-AS1 对 miR-429 实施调控对 CAL-27 细胞迁移、凋亡、增殖的影响。 方法:分析对象为 2016.1~2019.12 期间在我院实施治疗的口腔鳞癌患者 29 例,对其癌旁组织和癌细胞进行收集,以 CAl-27 细胞为依据分成 4 组,si-SLC7A11-AS1 组、si-NC 组、anti-miR-429+si-SLC7A11-ASz1 组、anti-miR-NC+si-SLC7A11-AS1 组,了解 SLC7A11-AS1 对 miR-429 实施调控对 CAL-27 细胞迁移、凋亡、增殖的影响。 结果:对比癌旁组织,癌组织 miR-429 水平明显降低,SLC7A11 -AS1 水平明显较高,P<0.05;对 SLC7A11-AS1 进行抑制后,迁移细胞明显减少,细胞凋亡率明显提升,P<0.05;对 miR-429 和SLC7A11-AS1 进行抑制后,迁移细胞明显增加,细胞凋亡率明显降低,P<0.05。 结论:对于口腔鳞癌患者,对SLC7A11-AS1 进行抑制,通过 miR-429 的上调,可对 CAL-27 迁移、增殖进行抑制,同时对细胞凋亡可发挥促进作用。

长链非编码RNA ASB16-AS1调控miR-670-3p/ATXN7L3轴影响胃癌细胞增殖、迁移和侵袭

背景多种长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNAs)在胃癌(gastric cancer,GC)进展中被证实发挥抑癌或促癌作用.但lncRNAs数量众多,仍有多种lncRNAs在GC进展中的作用并不明确.因此,筛选具有影响GC细胞增殖、迁移和侵袭的lncRNAs对GC防治十分必要.目的探讨LncRNA ASB16-AS1调控miR-670-3p/ATXN7L3轴对GC细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RTqPCR)和western blot检测人胃黏膜细胞GES-1、GC细胞HGC-27、AGS、NUGC-4中ASB16-AS1、miR-670-3p和ATXN7L3的表达水平.将HGC-27细胞分为si-NC、si-ASB16-AS1、miR-NC、miR-670-3p、si-ATXN7L3、si-ASB16-AS1+anti-miR-NC、si-ASB16-AS1+anti-miR-670-3p、si-ASB16-AS1+pcDNA-NC、si-ASB16-AS1+pcDNA-ATXN7L3组.采用细胞计数试剂盒、transwell实验分别测定细胞活力、迁移侵袭能力;双荧光素酶报告实验、RT-qPCR、western blot确定ASB16-AS1与miR-670-3p、miR-670-3p与ATXN7L3之间的相互作用.结果GC细胞中ASB16-AS1、ATXN7L3呈高表达,miR-670-3p呈低表达(P<0.05).抑制ASB16-AS1表达,或过表达miR-670-3p,或抑制ATXN7L3表达后,HGC-27细胞增殖活力、迁移和侵袭能力均显著降低(P<0.05).ASB16-AS1靶向负调控miR-670-3p表达.miR-670-3p靶向负调控ATXN7L3表达.抑制miR-670-3p表达部分逆转抑制ASB16-AS1对HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05).过表达ATXN7L3部分逆转抑制ASB16-AS1对HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05).结论抑制ASB16-AS1通过调控miR-670-3p/ATXN7L3轴抑制GC细胞增殖、迁移和侵袭.

长链非编码RNA SLC25A25-AS1对喉癌细胞侵袭和迁移的影响及其机制

目的探讨长链非编码RNA SLC25A25的反义RNA1(SLC25A25-AS1)对喉癌细胞侵袭和迁移的影响及其机制。方法采用实时荧光定量PCR检测人鼻咽上皮细胞NP69和喉癌细胞(TU-212、TU-177和Hep-2)的SLC25A25-AS1水平,分别采用MTT法、划痕实验和Transwell实验检测细胞的增殖活性、迁移能力和侵袭能力。采用Western blotting检测信号转导及转录激活因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)和血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达水平。结果喉癌细胞的SLC25A25-AS1表达水平低于NP69细胞且差异有统计学意义(P<0.05)。过表达SLC25A25-AS1使Hep-2细胞增殖活性显著降低(P<0.05),并显著抑制Hep-2细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05)。过表达SLC25A25-AS1的Hep-2细胞中,p-STAT3和VEGF的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论SLC25A25-AS1过表达可抑制喉癌Hep-2细胞的增殖、迁移和侵袭,其抑癌机制可能与STAT3/VEGF通路有关。

lncRNA SLC8A1-AS1在脓毒症大鼠心肌组织中的表达及其对心肌细胞凋亡和炎症因子分泌的影响

目的研究lncRNA SLC8A1-AS1在脓毒症大鼠心肌组织中表达及其对心肌细胞凋亡和炎症因子分泌的影响。方法qRT-聚合酶链反应(PCR)检测脓毒症大鼠心肌组织中SLC8A1-AS1表达水平。心肌H9C2细胞分成Control组(正常培养)、脂多糖(LPS)组(LPS诱导处理)、Vector+LPS组(转染阴性对照载体,LPS诱导处理)、SLC8A1-AS1+LPS组(转染SLC8A1-AS1过表达载体,LPS诱导处理)、SLC8A1-AS1+LPS+佛波酯(PMA)组[转染SLC8A1-AS1过表达载体,核转录因子(NF)-κB信号激活剂和LPS诱导处理]。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖变化,流式细胞术检测细胞凋亡水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞分泌的白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,Western印迹检测酶切含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、p65蛋白表达水平变化。结果脓毒症大鼠心肌组织中SLC8A1-AS1表达水平显著降低(P<0.05)。与Control组比较,LPS组心肌细胞增殖活性显著降低,细胞凋亡率显著升高,细胞分泌的IL-1β、IL-6、TNF-α显著增多,酶切Caspase-3、p65蛋白表达显著增多(均P<0.05)。与Vector+LPS组比较,SLC8A1-AS1+LPS组心肌细胞增殖活性显著升高,细胞凋亡率显著降低,细胞分泌的IL-1β、IL-6、TNF-α显著减少,酶切Caspase-3、p65蛋白表达显著减少(均P<0.05)。与SLC8A1-AS1+LPS组比较,SLC8A1-AS1+LPS+PMA组心肌细胞增殖活性显著降低,细胞凋亡率显著升高,细胞分泌的IL-1β、IL-6、TNF-α显著增多,酶切Caspase-3、p65蛋白表达显著增多(均P<0.05)。结论SLC8A1-AS1在脓毒症大鼠心肌组织中表达下降,上调SLC8A1-AS1通过抑制NF-κB信号减少心肌细胞凋亡和分泌炎症因子。

长链非编码RNA SLC7A11-AS1在胃癌组织中表达及临床意义

目的探讨长链非编码RNA SLC7A11-AS1在人胃癌中的表达及临床意义。方法收集2016年1月~2018年6月手术治疗78例胃癌患者胃癌组织标本。采用实时荧光定量聚合酶链反应法(RT-qPCR)检测3株胃癌细胞系和1株正常胃粘膜细胞细胞系SLC7A11-AS1的表达水平。结果胃癌组织中SLC7A11-AS1的相对表达量低于癌旁组织;SLC7A11-AS1表达量与大体分型、TNM分期相关;多因素Logistic回归分析,胃癌侵袭与T分期、N分期、SLC7A11-AS1表达水平相关;低表达SLC7A11-AS1组患者OS为(21.78±3.16)个月低于高表达SLC7A11-AS1组患者平均OS为(34.23±3.48)个月;SLC7A11-AS1组织表达水平对胃癌诊断的特异性为82.10%,敏感性为53.80%(AUC=0.69,P=0.042)。结论SLC7A11-AS1可能作为抑癌基因参与胃癌的发生、发展,特别是参与胃癌的侵袭、迁移过程,低表达SLC7A11-AS1可作为不良预后指标,为胃癌诊断、预后判断提供重要参考依据。