基于斑马鱼SLC17A8基因的表达特征验证其对黑色素转运的影响

试验为了探究兰坪乌骨绵羊黑色素形成的营养代谢机理,基于课题组全基因组重测序筛选出的囊泡谷氨酸转运蛋白3(SLC17A8)基因作为候选基因,利用规律成簇间隔短回文重复序列及其相关蛋白9(CRISPR/Cas9)系统基因敲除技术对SLC17A8基因于斑马鱼上进行敲除。结果表明:与野生型斑马鱼相比,36 h和42 h的突变体斑马鱼卵黄发育异常,卵黄黑色素沉积量存在个体差异,并且36 h较42 h明显,但72 h敲除卵黄黑色素变化不明显。研究表明,SLC17A8基因在黑色素转运前期具有一定作用,但后期影响不大。

听神经病谱系障碍患者SLC17A8基因筛查研究

目的了解听神经病谱系障碍人群SLC17A8基因的突变携带情况,探讨SLC17A8基因与听神经病谱系障碍的相关性。方法选取我院2003—2012年确诊的听神经病谱系障碍患者100例(前期工作筛查OTOF基因、PJVK基因、GJB2全基因、SLC26A4基因7+8外显子IVS7+2位点、线粒体基因1494及1555位点均为阴性)及100例听力正常的健康志愿者。针对SLC17A8基因的12个外显子设计19对引物,采用聚合酶链式反应进行目的片段扩增,并对PCR产物进行SLC17A8基因突变筛查,应用DNAStar软件进行测序结果的序列比对。同时对患者进行病史采集、体格检查及听力学检测。结果 100例听神经病谱系障碍患者中发现了SLC17A8基因外显子区域的变异12处,包括国际上尚未被报道且导致编码氨基酸改变的新突变1处、已知单核苷酸多态3处,以及位于3’端或5’端外显子非编码区的变异8处(6处为本研究首次报道)。1例女性听神经病谱系障碍患者携带c.824C>A杂合突变,突变导致SLC17A8基因编码的囊泡谷氨酸转运体蛋白(VGLUT3)高度保守的囊泡内环状结构区的丙氨酸被天冬氨酸所替代(p.A275D),而在100例听力正常的健康志愿者中均未发现该突变。结论本研究在听神经病谱系障碍患者中发现SLC17A8基因的12处外显子区域变异及14处内含子区域变异,其中新发现的SLC17A8基因c.824C>A突变可能导致VGLUT3向囊泡内转运谷氨酸的功能障碍而与听神经病谱系障碍发病相关。

兰坪乌骨绵羊SLC17A8基因多态性与其乌质性状关联性研究

为进一步探究兰坪乌骨绵羊乌质性状形成机理,该试验选取兰坪乌骨绵羊和来自兰坪的普通绵羊各50只作为样本,基于前期全基因组测序筛选的SLC17A8基因(solute carrier family 17 member 8)在兰坪乌骨绵羊具有12个高度连锁、高等位基因频率的SNP,故选择该基因作为候选基因,设计11对特异性引物对2个绵羊类群SLC17A8基因12个外显子及其侧翼区进行PCR扩增;通过紫外可见光谱法测定血液黑色素指标(TYR活力、血浆比色、脱黑色素、碱溶性黑色素、真黑色素/总黑色素);分析SLC17A8基因多态性与兰坪乌骨绵羊乌质性状的关联性。结果显示:除脱黑色素外,兰坪乌骨绵羊与普通绵羊其他各项黑色素指标差异显著(P<0.05),兰坪乌骨绵羊TYR活力、血浆比色、真黑色素/总黑色素显著高于普通绵羊;关联分析表明,EX1-G139A位点上CC型绵羊、EX2-C87A位点上AA型绵羊、EX4-C149T位点和EX4-T158C位点上CT型绵羊及EX7-C181T位点和EX7-T195C位点上TT型绵羊TYR活力均显著高于其它基因型绵羊(P<0.05),综上所述,CC、AA、CT和TT型为兰坪乌骨绵羊的优势基因型。