5-Aza-CdR上调裸鼠胶质瘤SLC22A18基因的表达及其对胶质瘤的抑制作用

目的探讨去甲基化药物5-杂氮-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对胶质瘤U251细胞SLC22A18表达及对肿瘤生长的影响。方法皮下接种法建立胶质瘤U251细胞裸鼠种植瘤模型,随机分为实验组(12只)和对照组(12只)。实验组裸鼠皮下注射5-Aza-CdR,对照组裸鼠皮下注射等量PBS。4周后处死裸鼠,观察胶质瘤的生长情况,用逆转录PCR技术及免疫组织化学技术检测SLC22A18mRNA及蛋白的表达。结果用药4周后,对照组SLC22A18mRNA表达极低(0.132±0.056),而实验组表达明显增强(0.552±0.124),两者相差显著(P<0.01);对照组几乎检测不到SLC22A18蛋白表达,而实验组可检测到SLC22A18蛋白明显表达;用药4周后实验组肿瘤的体积为(982.52±415.45)mm3,对照组为(1468.56±642.34)mm3,两者相差显著(P<0.05)。结论 5-Aza-CdR能上调裸鼠皮下种植胶质瘤U251细胞的SLC22A18表达,抑制胶质瘤的生长,其机制可能为5-Aza-CdR使甲基化的SLC22A18启动子去甲基化表达,恢复SLC22A18的表达,从而抑制胶质瘤生长。

SLC22A18基因转染人胶质瘤U251细胞对放疗敏感性的影响

目的:探讨SLC22A18基因转染人胶质瘤U251细胞对放疗敏感性的影响。方法:用脂质体介导的转染技术将pIRES2-EGFP-SLC22A18表达重组质粒导入U251细胞,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blot)检测SLC22A18基因和蛋白的表达。U251细胞分为4组:对照组、转染组、放疗组和转染联合放疗组。集落形成实验检测各组U251细胞集落形成数,用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)和流式细胞仪检测各组U251细胞生长抑制率和凋亡率,进一步应用裸鼠皮下荷瘤模型观察脂质体介导的pIRES2-SLC22A18表达重组质粒转染U251细胞对放疗敏感性的影响。结果:重组质粒转染组通过RT-PCR和Western blot证实了SLC22A18基因和蛋白在U251细胞中表达。集落形成实验检测发现SLC22A18基因对U251细胞的集落形成数为(60.6±5.2)个,当放射剂量为3、6和9 Gy时,U251细胞的集落形成数分别为(30.0±3.6)、(13.0±3.0)和(4.0±1.0)个。MTT检测发现SLC22A18基因对U251细胞的生长抑制率为(80.12±5.75)%。当放射剂量为3、6和9 Gy时,U251细胞的生长抑制率分别为(17.05±4.24)%、(17.34±1.62)%和(18.71±4.59)%。当SLC22A18基因与放疗(3、6和9 Gy)联合作用时,抑制率分别为(81.45±5.32)%、(90.45±1.65)%和(92.62±2.12)%。SLC22A18基因转染所产生的U251细胞凋亡率为17.68%。放疗(3、6和9 Gy)引起的细胞凋亡率分别为4.64%、4.87%和5.42%。当SLC22A18基因与放疗(3、6和9 Gy)联合作用时,凋亡率分别为18.42%、21.48%和23.92%。体内实验结果显示,SLC22A18基因对U251细胞6 Gy照射的抑瘤率比较为1.81。结论:SLC22A18基因转染增加了人胶质瘤U251细胞对放疗的敏感性。

应用染色质免疫沉淀技术分析DNMT3b和HDAC1蛋白与SLC22A18基因启动子的结合

目的建立优化的染色质免疫沉淀技术(ChIP),分析乳腺癌细胞MDA-MB-231中DNA甲基转移酶3b(Dnmt3b)和组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)与SLC22A18基因启动子区的结合情况。方法建立并优化ChIP实验技术,运用ChIP技术检测DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-dc)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(TSA)分别单独和联合作用于人乳腺癌细胞MDA-MB-231后,用Dnmt3b和HDAC1特异性抗体沉淀DNA,聚合酶链式反应(PCR)检测SLC22A18基因5'端特异性序列,免疫印迹法(Westernblotting)检测Dnmt3b和HDAC1蛋白的表达情况。结果获得了优化的ChIP实验条件,Dnmt3b和HDAC1抗体沉淀的染色质片段中扩增出SLC22A18基因5'端特异性序列。5-aza-dc、TSA单独用药可抑制DNMT3b、HDAC1与SLC22A18启动子区特异序列的结合,5-aza-dc和TSA联合作用可以明显抑制DNMT3b、HDAC1与SLC22A18启动子的结合;Western blotting结果表明,5-aza-dc、TSA单独及联合用药不影响DNMT3b和HDAC1蛋白的表达。结论 DNMT3b和HDAC1在MDA-MB-231细胞内结合于SLC22A18基因启动子的特异区域,参与该基因的表达调控。

不同化疗药物对胶质瘤获得性SLC22A18基因耐药的逆转作用

目的:探讨临床上治疗胶质瘤的不同化疗药物对胶质瘤U251细胞获得性SLC22A18耐药的逆转作用及可能的分子机制。方法:将重组腺病毒载体(Ad)介导的SLC22A18基因联合替莫唑胺(TMZ)、卡氮芥(BCNU)以及顺铂(DDP)3种常见化疗药物处理对Ad/SLC22A18产生耐药的U251-SLC22A18/R胶质瘤细胞,通过MTT比色法检测处理后胶质瘤细胞的存活率,以评估体外不同化疗药物对SLC22A18耐药的逆转作用;在体内进一步评估该逆转策略的有效性;并且通过免疫印迹等方法探讨逆转耐药的可能的分子机制。结果:在体外只有TMZ和BCNU能够使U251-SLC22A18/R细胞对Ad/SLC22A18重新敏感。进一步的研究结果表明联合TMZ和Ad/SLC22A18能在体内有效地抑制U251-SLC22A18/R细胞来源的胶质瘤生长,且联合TMZ和Ad/SLC22A18抑制作用明显比其它对照组强。Ad/SLC22A18和TMZ的联合治疗可以下调MGMT蛋白的表达,并且Ad/SLC22A18和BCNU的联合治疗可以上调Bax蛋白的表达。结论:联合应用Ad/SLC22A18和TMZ或BCNU能在体内外有效地逆转U251-SLC22A18/R细胞对SLC22A18的获得性耐药,TMZ的逆转作用可能与其诱导的MGMT蛋白低表达有关,BCNU的逆转作用可能与其诱导的Bax蛋白过度表达有关。

SLC22A18基因启动子甲基化与胶质瘤SLC22A18表达的关系

目的探讨胶质瘤中SLC22A18基因启动子甲基化与其表达的关系。方法选取上海交通大学医学院附属第三人民医院神经外科自2006年9月至2009年6月、武汉大学中南医院神经外科自2002年9月至2005年6月间手术切除的胶质瘤标本30例，另选10例行内减压术颅脑损伤患者的正常脑组织作为对照。采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测标本中SLC22A18基因启动子甲基化的状态．RT—PCR和Western blotting分别检测SLC22A18 mRNA和蛋白的表达。体外培养胶质瘤U251细胞于含2μmol／L去甲基化药物5-aza-2-deoxycytidine的培养液（实验组）中，同时设普通培养液作对照，培养3、5、7d后进行细胞计数并应用Western blotting检测SLC22A18蛋白的表达。结果MSP检测结果显示15例胶质瘤组织出现甲基化．对照脑组织均表现出非甲基化；15例甲基化胶质瘤组织中SLC22A18mRNA、蛋白的表达明显低于对照脑组织。培养5、7d实验组U251细胞计数少于对照组，差异有统计学意义f氏0．05）。培养7dWestern blotting检测结果发现实验组细胞SLC22A18蛋白的表达明显高于对照组。结论观c22AJ8基因启动子甲基化导致其表达下调；去甲基化药物能恢复U251细胞SLC22A18的表达，并抑制U251细胞增殖。

乳腺癌中印记基因SLC22A18／TSSC5／BWR1A启动子区甲基化及mRNA表达的研究

目的:研究印记基因SLC22A18启动子区甲基化对乳腺侵润性导管癌组织中的SLC22A18mRNA表达的影响,探讨其与临床病理特征之间的关系。方法:实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time quantitativeRT-PCR)方法检测40例乳腺侵润性导管癌及其癌旁组织中SLC22A18mRNA的表达,甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测SLC22A18基因启动子区的甲基化状态。检测DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-aza-dc)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(TSA)作用于乳腺癌细胞株MDA-MB-231后,对SLC22A18基因启动子区DNA甲基化和mRNA表达的影响。结果:SLC22A18在40例乳腺侵润性导管癌中mRNA表达量低于癌旁组织(0.12±0.10vs0.69±1.05,P<0.01);40例乳腺侵润性导管癌及对应癌旁组织中,SLC22A18启动子区的甲基化发生率分别为75%和37.5%,差异有统计学意义(P<0.01);在40例乳腺侵润性导管癌组织中,甲基化组SLC22A18mRNA表达量低于非甲基化组(0.11±0.08vs0.24±0.18,P<0.01)。5-aza-dc和5-aza-dc/TSA能不同程度逆转乳腺癌细胞株MDA-MB-231中SLC22A18基因的甲基化状态,并上调SLC22A18基因表达。结论:SLC22A18基因甲基化与乳腺癌发生有一定的关联,SLC22A18基因表达下调与其启动子区CpG岛异常甲基化相关。

SLC22A18基因对人胶质瘤U251细胞化疗药物敏感性的影响

目的:探讨印记基因SLC22A18(solute carrier family 22,member 18)对人胶质瘤U251细胞化疗药物敏感性的影响及耐药机制的研究。方法:采用脂质体转染法将携带有SLC22A18基因的重组质粒pIRES2-EGFP-SLC22A18转入U251细胞;分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测SLC22A18 mRNA及蛋白在转染后U251细胞中的表达情况;CCK-8法检测细胞对化疗药物敏感性的变化;FCM法检测SLC22A18表达对细胞凋亡以及对多柔比星在细胞内蓄积浓度的影响。结果:转染SLC22A18基因的U251细胞中有SLC22A18 mRNA及其蛋白的表达;SLC22A18基因转染组U251细胞与对照组细胞比较,U251细胞对紫杉醇的敏感性下降,半数抑制浓度(halfinhibitory concentration,IC50)值上升(t=3.23,P<0.05),对替莫唑胺的敏感性上升,IC50值下降(t=4.28,P<0.05)。SLC22A18基因转染组和空质粒转染组细胞凋亡率分别为(41.35±4.98)%和(6.25±0.82)%,差异有统计学意义(t=12.05,P<0.01)。SLC22A18表达使细胞内多柔比星蓄积浓度明显下降(t=4.25,P<0.05)。结论:SLC22A18表达使人胶质瘤U251细胞对紫杉醇的敏感性下降,对替莫唑胺的敏感性提高,并可能通过降低细胞内化疗药物蓄积产生耐药性。

印记基因SLC22A18的表达与乳腺癌侵袭能力的关系

目的:研究印记基因SLC22A18(solute carrier family 22,member 18)在乳腺癌中的表达情况及其与乳腺癌侵袭能力的关系。方法:采用Transwell方法评估2种不同恶性程度的乳腺癌细胞株MDA-MB-231(恶性程度高)和MCF-7(恶性程度低)的侵袭转移能力。分别采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法检测SLC22A18的mRNA和蛋白在这2种乳腺癌细胞株中的表达情况。结果:MDA-MB-231细胞株恶性程度高,穿过膜的细胞多,侵袭能力强;MCF-7细胞株恶性程度低,穿过膜的细胞少,侵袭能力弱;SLC22A18在MCF-7中的mRNA和蛋白表达水平高于MDA-MB-231;差异有统计学意义(P<0.01)。结论:印记基因SLC22A18的表达与乳腺癌细胞的侵袭能力相关,该基因有望作为一个抑癌基因抑制乳腺癌的转移。

ZBTB18基因突变致常染色体显性遗传智力低下22型1例并文献复习

报道1例常染色体显性遗传智力低下22型患者的临床资料,并进行文献复习。

SLC22A1、SLC22A4基因多态性与2型糖尿病患者二甲双胍疗效的相关性

目的探讨甘肃地区2型糖尿病(T2DM)患者SLC22A1 rs628031与SLC22A4 rs272893位点基因多态性与二甲双胍疗效的相关性。方法以300例T2DM患者与300例健康对照者为研究对象,用PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法检测2个基因多态性位点突变在甘肃汉族人群中的分布频率。选取其中新诊断的T2DM患者105例,接受每日口服500 mg二甲双胍的治疗,随访90 d;根据基因型分组,分析空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2h PPG)及糖化血红蛋白(Hb A1c)变化情况与各基因型的关系。结果 SLC22A1 rs628031与SLC22A4 rs272893在T2DM患者和健康对照者之间的分布频率差异均无统计学意义(P均>0.05)。SLC22A1 rs628031 AG型与AA型、GG型与AA型FPG、Hb A1c治疗前后变化幅度差异均有统计学意义(P均<0.05)。SLC22A4 rs272893基因多态性中GG型与AA型FPG治疗前后变化幅度差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SLC22A1rs628031和SLC22A4 rs272893基因多态性位点突变与2型糖尿病患者二甲双胍的疗效存在一定的关联。

非小细胞肺癌中SLC22A18的表达及其临床意义

背景与目的已有的研究证明:多药耐药(multidrug resistance,MDR)是肺癌化疗失败的主要原因,研究MDR的产生机制对于提高肺癌的化疗疗效有着重要的临床意义。SLC22A18基因编码蛋白与跨膜转运体相似,影响药物敏感性、细胞代谢和生长,可能在肺癌MDR的产生中发挥一定作用。本研究旨在检测SLC22A18在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)及相应正常组织中的表达,并分析其与组织学类型、分级和TNM分期的关系。方法应用免疫组化EnVinsion法检测SLC22A18在96例NSCLC及正常组织中的表达,结果用统计学软件SPSS17.0进行分析。结果 SLC22A18主要定位于胞膜和胞质中。SLC22A18在NSCLC中的表达高于正常组织,差异明显(P<0.01),鳞癌、腺癌阳性率分别为68.0%和78.2%,差异性有统计学意义(P<0.05)。鳞癌、腺癌不同病理分级、TNM分期间SLC22A18表达差异性均有统计学意义,癌组织分化越差、分期越晚,SLC22A18表达越高(P<0.05)。结论 SLC22A18在NSCLC组织中高表达,表达的高低与组织学类型、分级、TNM分期有关,本研究为进一步探讨SLC22A18在肿瘤中的表达及可能的耐药作用提供了实验依据。

2型糖尿病患者SLC22A1,SLC22A2基因多态性与二甲双胍胃肠道不良反应的关系

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者SLC22A1 1222A>G位点及SLC22A2 808G>T位点基因多态性与二甲双胍胃肠道不良反应之间的关系。方法随机选取130例就诊于我院内分泌科初次接受二甲双胍治疗的T2DM患者,从患者外周血白细胞中提取DNA,应用等位基因特异引物PCR反应(Allele-specific PCR,AS-PCR)及凝胶成像技术进行基因分型,分析1222A>G及808G>T位点多态性与二甲双胍胃肠道不良反应的关系。结果 SLC22A1 1222A>G位点存在AA、AG、GG三种基因型,突变频率为64.62%,A等位基因与二甲双胍胃肠道不良反应的发生相关(P<0.05);SLC22A2 808G>T位点存在GG、GT、TT三种基因型,突变频率为11.15%,该位点不同基因型患者发生二甲双胍胃肠道不良反应的概率不存在统计学差异(P=0.559);二甲双胍胃肠道反应阳性组患者年龄大于胃肠道反应阴性患者(P=0.037);二甲双胍胃肠道反应阳性组患者收缩压高于胃肠道反应阴性患者(P=0.017)。结论 T2DM患者SLC22A1 1222A>G基因多态性与二甲双胍胃肠道不良反应的发生相关,SLC22A2808G>T基因多态性与二甲双胍胃肠道不良反应的发生无关;老龄及高收缩压可能是造成二甲双胍胃肠道不良反应的危险因素。

新疆维吾尔族人群SLC22A1基因多态性频率分布及糖尿病家族史对其突变的影响研究

背景转运蛋白(OCT)是近年来备受关注的药物转运体,由SLC22A1基因编码。SLC22A1基因具有显著的遗传多态性,已在多个种族中发现了多个基因突变,是引起2型糖尿病(T2DM)患者二甲双胍生物利用度差异的重要原因。目的研究新疆维吾尔族青年男性SLC22A1基因rs34059508、rs4646277位点等位基因和基因型的频率分布,以及T2DM家族史对SLC22A1基因突变的影响,为T2DM患者基因导向性二甲双胍个体化治疗提供理论依据。方法2014年9月—2015年9月,招募新疆维吾尔族男性健康志愿者276例为研究对象。采集受试者外周血5 ml,提取DNA,采用Snapshot技术平台分析受试者SLC22A1基因rs34059508、rs4646277位点等位基因、基因型频率和基因突变情况。结果 SLC22A1基因rs34059508、rs4646277位点基因频率分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡,具有群体代表性(χ~2=0.009,P=0.976;χ~2=0.246,P=0.620)。亚洲人群、高加索人群、非裔美国人群、新疆维吾尔族人群SLC22A1基因rs34059508位点等位基因及基因型频率比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中,新疆维吾尔族人群SLC22A1基因rs34059508位点等位基因A频率低于高加索人群(P<0.001)。亚洲人群、汉族人群、新疆维吾尔族人群SLC22A1基因rs4646277位点等位基因及基因型频率比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中,新疆维吾尔族人群SLC22A1基因rs4646277位点等位基因T频率高于汉族人群(P<0.017)。19例有T2DM家族史者中12例(63.2%)发生SLC22A1基因突变,208例无T2DM家族史者SLC22A1基因突变率为77.9%(162/208),差异无统计学意义(χ~2=1.367,P=0.242)。结论新疆维吾尔族男性SLC22A1基因rs34059508、rs4646277位点突变率分别为0.4%、5.8%;未发现T2DM家族史对SLC22A1基因突变产生影响。

SLC22A1和CYP3A5基因多态性与伊马替尼治疗慢性髓性白血病疗效的相关性研究

目的:评价SLC22A1(rs628031、rs683369)和细胞色素P450(CYP)3A5(rs776746)基因多态性与伊马替尼治疗慢性髓性白血病的相关性。方法:以"有机阴离子转运体""细胞色素""基因多态性""伊马替尼""慢性粒细胞白血病"及"SLC22A1""CYP3A5"为中文检索词,以"SLC22A1""CYP3A5""Cytochrome""Polymorphism""Imatinib""Chronic myeloid leukemia"为英文检索词,计算机检索Pub Med、Embase、The Cochrane Library、中国生物医学文献数据库、中国知网学术总库、万方数据库、中文科技期刊数据库,收集符合纳入标准的SLC22A1(rs628031、rs683369)和CYP3A5(rs776746)基因多态性与伊马替尼治疗慢性髓性白血病疗效的病例对照研究,检索时限均为从建库起至2018年1月,由两位研究者按照纳入与排除标准独立筛选文献、提取资料和评价质量后,采用Rev Man 5.3软件对SLC22A1(rs628031、rs683369)和CYP3A5(rs776746)基因多态性与主要分子学反应率(MMR)、完全细胞遗传学反应率(CCy R)的关系进行Meta分析。结果:共纳入13项病例对照研究,合计1 707例患者。Meta分析结果显示,SLC22A1(rs628031)GA+AA基因型患者MMR显著低于GG基因型[OR=0.58,95%CI(0.41,0.83),P<0.01];SLC22A1(rs683369)CG+GG基因型患者MMR显著低于CC基因型[OR=0.64,95%CI(0.42,0.96),P=0.03];CYP3A5(rs776746)AG+GG基因型患者CCy R显著高于AA基因型[OR=2.43,95%CI(1.12,5.27),P=0.02]。结论:SLC22A1和CYP3A5基因多态性可影响伊马替尼对慢性髓性白血病的治疗结局,二者可作为伊马替尼的潜在疗效预测指标。

PDLIM5、SLC22A3和NKX3-1基因与前列腺癌患病风险的关联性研究

目的:探索PDLIM5基因(rs17021918,T)、SLC22A3基因(rs9364554,C)和NKX3-1基因(rs1512268,A)与中国人群前列腺癌(PCa)患病风险的关联。方法:采用病例-对照研究,包括124例PCa患者和138例正常对照者,对PDLIM5基因(rs17021918,T)﹑SLC22A3基因(rs9364554,C)和NKX3-1基因(rs1512268,A)进行两组间的等位基因及基因型差异分析,探讨各基因与患者的BMI、Gleason评分、PSA浓度、肿瘤分期、年龄等临床表型之间的关联。采用MDR方法进行基因-基因交互作用分析。结果:①PDLIM5﹑SLC22A3和NKX3-1基因的风险等位基因和基因型的频率在病例组和对照间组间的分布无显著性差异(P>0.05)。②3个位点与PCa的发病年龄、Gleason评分、PSA浓度以及病理分期等指标均无显著相关性(P>0.05)。③采用MDR方法分析PDLIM5基因、SLC22A3基因和NKX3-1基因的3个多态性位点的交互作用发现PDLIM5基因和NKX3-1基因之间,可能不存在有基因-基因交互作用,树状图分析说明PDLIM5基因与NKX3-1基因可能有协同作用。结论:PDLIM5、SLC22A3和NKX3-1基因可能与中国人群PCa患病风险无关联。而PDLIM5基因和NKX3-1基因之间对PCa患病风险的影响可能有协同作用。

SLC22A3基因intron7对基因转录的负性调控作用研究

目的:探讨人SLC22A3基因intron7序列及其SNPrs2048327(A/G)位点对基因转录的调控作用。方法:以包含人SLC22A3基因全长序列的细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)为模板,PCR扩增hSLC22A3 intron7,克隆入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic和pGL3-Promoter,得到重组质粒pGL3-Basic-SLCi7wt、pGL3-Promoter-SLCi7wt和pGL3-Promoter-SLCi7mut;重组质粒与内参质粒pRL-SV40共转染入人胚肾细胞HEK293T,24 h后检测荧光素酶活性。结果:野生型重组质粒pGL3-Basic-SLCi7wt荧光素酶活性与pGL3-Basic无统计学差异(P=0.986);野生型重组质粒pGL3-Promoter-SLCi7wt荧光素酶活性(3.514±0.096)相较于pGL3-Promoter(6.286±0.370)降低(P=0.000);突变型重组质粒pGL3-Promoter-SLCi7mut荧光素酶活性(2.089±0.332)相对于pGL3-Promoter亦有所下降(P=0.000),且较野生型重组质粒pGL3-Promoter-SLCi7wt下调(P=0.000)。结论:人SLC22A3基因intron7序列具有负性调节活性,能下调荧光素酶报告基因的表达水平;定位于该序列上的SNP rs2048327(A/G)位点A→G的改变,可能增强该内含子所具有的负性调节作用。

新疆维吾尔族人群SLC22A2中rs316019位点基因多态性分布研究

目的:研究新疆维吾尔族人群SLC22A2中rs316019位点(G808T,A270S)基因多态性分布,并比较其与不同种族间的分布差异。方法:用SNa Pshot SNP分型技术对276名健康维吾尔族男性志愿者进行SLC22A2的rs316019位点基因分型测定,并与NCBI基因库中以及相关文献报道的不同种族关于该位点的分型数据进行比较,分析其分布的种族差异性。结果:rs316019位点基因多态性符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),其CC、CA、AA基因型频率分别为79.7%、18.1%、2.2%,最小等位基因A的频率为11.2%,未见等位基因G、T的分布。其基因多态性频率分布与汉族、非洲、欧美等人群均存在明显差异(P<0.05)。结论:新疆维吾尔族人群SLC22A2中rs316019位点基因多态性分布在不同人群中存在差异,这将对应药物遗传药理学与相关疾病的发生发展等的相应差异。

SLC22A3基因负性调控元件的定位

目的:拟寻找和确定人第6号染色体q26-q27区域的SLC22A3基因intron7序列中具有重要负性调控功能的核心调控元件的具体序列位置。方法:用基因重组的方法,分别构建intron7截短型野生重组质粒,分段查找该负性调控元件的具体序列位置。以包含人SLC22A3基因全长序列的细菌人工染色体为模板,PCR扩增所需截短型片段,分别插入荧光素酶报告基因载体pGL3-Promoter,将重组质粒与内参质粒p RL-SV40以50∶1的比例共转染HEK293T细胞,24 h后检测荧光素酶活性(luciferase activity),通过对比重组质粒和pGL3-Promoter荧光素酶活性,判断插入片段是否具有调控作用,并对发现的元件进行转录因子结合位点预测。结果:截短型野生重组质粒pGL3-pro-SLCi7-NO6,pGL3-pro-SLCi7-NO10,pGL3-pro-SLCi7-NO6.2,pGL3-pro-SLCi7-NO6.3,p-GL3-pro-SLCi7-NO10.2,pGL3-pro-SLCi7-NO6.21,pGL3-pro-SLCi7-NO10.22各组荧光素酶活性较pGL3-Promoter组降低(P<0.05);而截短型野生重组质粒pGL3-pro-SLCi7-NO6.21-300 bp(P>0.05)和pGL3-pro-SLCi7-NO10.22-300 bp(P>0.05)组荧光素酶活性较pGL3-Promoter组无统计学差异。结论:人类第6号染色体q26-q27区域的SLC22A3基因intron7序列中存在2个负性调控元件,为今后进一步对SLC22A3基因蛋表达调控方面的研究提供了理论依据。

沉默Bcl-XL逆转人胶质瘤获得性SLC22A18的耐药

目的:探讨RNA干扰Bcl-XL(siRNA)在人胶质瘤获得性SLC22A18的耐药中的作用。方法:以Bcl-XL siRNA转染获得性SLC22A18耐药的人胶质瘤U251-SLC22A18/R细胞,用重组人SLC22A18蛋白处理,MTT法和流式细胞仪检测肿瘤细胞的存活率,免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-8的表达情况。结果:Bcl-XL siRNA能够降低U251-SLC22A18/R细胞中Bcl-XL的表达,也能逆转其对SLC22A18的耐药。U251-SLC22A18/R细胞经过Bcl-XL siRNA和重组人SLC22A18蛋白共同处理4 h后细胞凋亡率>50%,细胞存活率<30%;而对照组和重组人SLC22A18蛋白处理组的细胞凋亡率和存活率无明显变化。经Bcl-XL siRNA与重组人SLC22A18蛋白联合处理后,U251-SLC22A18/R细胞中Caspase-3和Caspase-8均明显活化。结论:Bcl-XL siRNA能有效逆转人胶质瘤获得性SLC22A18的耐药,为治疗胶质瘤耐药提供一种新的思路。

胶质瘤SLC22A18耐药细胞株的建立及其耐药机制的研究

目的:以人胶质瘤U251细胞株为载体,探讨胶质瘤获得性SLC22A18基因耐药的可能机制。方法:用重组腺病毒介导的SLC22A18基因(Ad/SLC22A18)反复处理人胶质瘤U251细胞,得到人胶质瘤耐药细胞株U251-SLC22A18/R。通过MTT和Western blot法检测耐药细胞U251-SLC22A18/R对Ad/SLC22A18杀伤作用的敏感性及凋亡相关的信号分子DR4、DR5、Bax、Bcl-XL和caspase-8的表达情况,分析其获得性耐药的可能机制。结果:耐药细胞U251-SLC22A18/R对Ad/SLC22A18和SLC22A18蛋白处理耐药,但对Bax基因处理仍然敏感。U251-SLC22A18/R细胞内Bcl-XL的表达显著升高,caspase-8的表达明显下降,caspase-8活性未见明显的裂解。结论:人胶质瘤U251细胞株经Ad/SLC22A18反复处理后产生针对SLC22A18基因的耐药,其机制可能与Bcl-XL表达升高和caspase-8表达下降有关。