牦牛SLC25A6基因的CDS序列及其表达蛋白生物信息学分析

通过RT-PCR技术克隆牦牛SLC25A6基因的cDNA序列,并利用DNAMAN、MAGA 6、SWISS-MODEL、ExPASy等生物信息学软件系统对其进行分析。结果表明,扩增出的牦牛SLC25A6基因的编码区长897 bp,编码298个氨基酸;与普通牛、绵羊和人的相应基因核苷酸序列进行比对,序列一致性分别为99.33%、98.22%、91.86%;其编码蛋白分子量为32.821 ku,含多个修饰位点。

高原习服黄牛脑组织不同部位SLC25A6 mRNA绝对定量分析

为研究SLC25A6 mRNA在高原习服黄牛脑组织中的表达量对能量利用的影响,建立用于SLC25A6基因绝对定量的标准曲线;标准曲线扩增效率为E=104.9%,回归系数r值为-0.996,斜率为-3.210,溶解曲线峰值单一;绝对定量检测值表明,高原习服黄牛脑组织各部位SLC25A6 mRNA表达量总体差异有统计学意义,SLC25A6 mRNA检测值从高至低依次为小脑、海马、枕叶、额叶、颞叶、顶叶,小脑SLC25A6基因表达量显著高于其他各组织;顶叶表达量最低,小脑表达量为顶叶表达量的2.79倍;额叶、颞叶、顶叶之间差异,枕叶、海马之间差异均无统计学意义。结果表明,高原习服黄牛脑组织中小脑耗能强度可能最大,细胞活动旺盛;相反顶叶耗能强度最低。

牦牛脑组织不同部位SLC25A6 mRNA绝对定量比较研究

为了研究SLC25A6 mRNA在牦牛脑组织中的表达量对于能量利用的影响,试验采用绝对定量方法,建立用于SLC25A6基因绝对定量的标准曲线。结果表明:标准曲线扩增效率(E)为104.0%,回归系数(R2)为0.998,斜率为-3.230,溶解曲线峰值单一。牦牛脑组织各部位SLC25A6mRNA表达量总体差异有统计学意义(P<0.05),SLC25A6 mRNA检测值从高至低依次为小脑、海马、枕叶、顶叶、颞叶、额叶,小脑SLC25A6 mRNA表达量显著高于其他各组织(P<0.05);额叶表达量最低(P<0.05),小脑表达量为额叶表达量的3.7倍;顶叶、枕叶、海马之间差异无统计学意义(P>0.05),额叶与颞叶之间差异无统计学意义(P>0.05)。说明牦牛脑组织中小脑耗能强度可能最大,细胞活动旺盛;相反额叶耗能强度最低。

鹅SLCLC25A6基因的克隆以及填饲后表达特征分析

SLC25A6(溶质载体家族25成员6),也称为ANT3,是交换ATP和ADP通过线粒体膜的载体。本研究以鹅总RNA为模板,通过3′-RACE和5′-RACE的方法,测序拼接得到1 485 bp的c DNA序列,含有897 bp完整的开放阅读框,共编码翻译298个氨基酸。经预测SLC25A6编码蛋白的分子量为32 792.1,等电点为9.73,为稳定亲水蛋白,且SLC25A6蛋白螺旋结构和折叠片聚集成球状。序列分析表明,鹅与红原鸡的核苷酸与氨基酸同源性比较高,系统进化表明其亲缘性较高。通过荧光定量PCR发现SLC25A6基因在多种组织中表达,且在肝脏和脂肪中的表达量显著高于肌肉组织;填饲处理后,胸肌中SLC25A6基因的表达量呈显著性下降,暗示SLC25A6基因主要在肝脏脂肪能量代谢过程中起重要作用,同时可能在肌肉的生长发育过程中起调控作用。本试验获得SLC25A6基因的完整序列并研究其表达规律,为进一步研究该基因的功能奠定基础。

线粒体蛋白运输能力测定工具建立

目的:克隆SLC25A6基因入pcDNA3.0表达载体中,同时给基因两端加入HA和Myc标签,为探索SLC25A6基因作为工具研究线粒体生物合成作用在急性肾损伤产生机制提供基础。方法:根据NCBI人SLC25A6 mRNA序列设计引物,通过酶切连接反应将SLC25A6插入到pcDNA3.0中,成功构建pcDNA3.0-1xHA-SLC25A6-1xMy后,经酶切和测序验证正确后,将重组表达质粒转染入人Hela细胞,通过Western-Blot验证重组质粒的表达情况。结果:pcDNA3.0-1xHA-SLC25A6-1xMyc表达质粒测序比对完全正确,转染Hela细胞后可见明显的表达条带。结论:成功构建了N端带有HA tag,C端带有Myc tag的SLC25A6基因表达载体pcDNA3.0-1xHA-SLC25A6-1xMyc,通过转染Hela细胞证明其能正确表达,为研究SLC25A6作为线粒体生物合成能力的监测工具探索线粒体在急性肾损伤中的机制奠定了基础。