SLC35E基因家族在麻风皮损中的表达

目的:明确溶质转运体家族蛋白SLC35E在多菌型(MB)与少菌型(PB)麻风皮损中的差异。方法:首先收集25例确诊为麻风感染患者的石蜡包埋皮损组织,其中多菌型麻风患者12例,少菌型13例,分析SLC35E1和SLC35E2B不同SNP位点的突变情况;同时收集12名健康对照者皮肤组织作为正常对照组,采用免疫组化染色法检测SLC35E1、SLC35E2B、CD68、S100在上述皮损及正常对照组中的表达差异,免疫荧光染色法检测CD68、S100与SLC35E1、SLC35E2B蛋白在皮损组织中的共表达情况。结果:对25例麻风组织样本进行生物信息学分析,SLC35E1的SNP位点rs202071873在麻风患者中的突变率为0%,SLC35E2B的3个SNP位点rs12729295、rs117820608、rs2072923在麻风患者中的突变率分别为100%、40%,100%。免疫组化染色显示SLC35E1、SLC35E2B、CD68、S100在麻风组织的真皮及表皮均有表达,其中CD68主要表达于麻风组织真皮,SLC35E1在真皮层的表达量与CD68基本一致,两者表达量基本呈正相关;S100在麻风患者表皮和真皮中的表达无显著差异,与SLC35E1、SLC35E2B表达量无明显相关性;与少菌型麻风相比,多菌型麻风患者SLC35E1在真皮层呈低表达(P=0.046);与健康对照组相比,多菌型麻风患者SLC35E2B在表皮层呈低表达(p=0.004);免疫荧光共染显示麻风组织皮损中CD68与SLC35E1、SLC35E2B蛋白共染均出现重叠结果,且与SLC35E1重叠荧光强度高于SLC35E2B;S100与SLC35E1、SLC35E2B蛋白共染未见重叠结果。结论:麻风患者皮损中可能存在SLC35E2B位点突变,SLC35E1的表达可预测多菌型(MB)与少菌型(PB)麻风在真皮层感染差异,SLC35E1、SLC35E2B可能通过影响巨噬细胞功能干扰机体对麻风分枝杆菌的清除,进而影响麻风的发病。

斑块型银屑病患者外周血SLC35E2B基因的表达及其变异研究

目的通过检测斑块型银屑病患者外周血中SLC35E2B的表达情况,并利用数据库分析基因富集的功能和参与的通路,探讨SLC35E2B在银屑病发病机制中的作用。方法收集斑块型银屑病47例、正常对照14例的外周静脉血,提取样本基因组DNA,用外显子捕获-高通量测序(exon-capture high-throughput sequencing,EC-HTS)技术进行检测,数据经过Calling、数据库比对、软件分析得到最终SLC35E2B基因病理性突变位点,利用GO和KEGG pathway数据库分析基因富集的功能和参与的通路。结果对61例样本所得数据进行生物信息学分析得到致病性突变位点1个:SLC35E2Bc.833C>T(p.T278M),仅见于斑块型银屑病组,正常组未见;GO富集提示SLC35E2B生物学过程主要涉及调节IL-12家族细胞因子、IL-17家族细胞因子、调节对生物刺激的细胞应答、TNF的合成、调节Th1细胞相关的免疫应答以及抵抗病原微生物等多细胞生物过程;KEGG通路分析提示SLC35E2B基因主要与结核病、1型糖尿病、弓形虫病、哮喘、类风湿性关节炎等疾病相关。结论SLC35E2B可能参与银屑病发病的病理过程。

SLC35A2基因突变致马凡综合征家系中West综合征患儿1例报告并文献复习

目的鉴定马凡综合征家系中1例West综合征患儿基因致病性突变,为家系遗传咨询提供依据。方法收集患儿及其家系成员的临床资料进行分析。提取患儿及其父母、外祖母、舅舅的外周血DNA,采用医学外显子二代测序加拷贝数变异检测,再进行Sanger测序验证。并复习相关文献。结果女性患儿,10月龄,反复抽搐发作7个月,表现为婴儿痉挛。患儿及其母亲、外祖母存在马凡综合征体征。患儿及其母亲、外祖母存在FBN1基因c.7240C>T(p.R2414*)无义突变;患儿还存在SLC35A2基因c.601delG(p.A201Qfs*148)移码突变,其父母SLC35A2基因未见该变异,该基因变异既往未见报道。患儿行室间隔修补术,并予托吡酯、半乳糖治疗后癫痫及发育情况好转。检索到临床资料齐全的相关SLC35A2基因突变报道16篇共74例患者,涉及58个位点,其中错义突变最常见,患者可有不同的临床表型,以早期婴儿癫痫性脑病最常见。结论SLC35A2基因c.601delG(p.A201Qfs*148)是马凡综合征家系中该患儿罹患West综合征的致病性变异。该研究扩大了基因突变谱,为该家系的遗传咨询提供了基础;半乳糖联合托吡酯治疗有助于控制癫痫发作和改善发育情况。

猪瘟病毒E2基因抗原结构域A、B、C、D区在大肠杆菌中的表达

采用PCR技术扩增出猪瘟病毒E2基因抗原结构域A、B、C、D区并克隆于PGEM Teasy载体上,测序结果表明插入的为猪瘟病毒E2基因抗原结构域,切出目的基因,将目的基因克隆到表达质粒pProEX HTb中,获得重组质粒经PCR、酶切和序列分析鉴定E2基因抗原结构域插入的位置、大小和读码框均正确,SDS PAGE检测表明受体菌经IPTG诱导后能表达E2基因抗原结构域蛋白,Westernblot检测表明受体菌诱导表达E2基因抗原结构域蛋白可与猪瘟阳性血清发生特异性反应。

突变和修饰IFN-α2b基因的5’和3’端对其在E.coli表达的调控作用

目的对人 IFN- α2 b基因进行突变和修饰 ,从翻译水平上调控 IFN- α2 b基因在大肠杆菌中的表达。方法采用PCR技术 ,人工合成寡核苷酸引物 ,对人 IFN- α2 b基因进行了改造 :在不改变氨基酸的前提下 ,将 5’端编码区的四个 G、C位点突变为 A、T;去除 3’端非编码区。将突变和修饰后的基因片段分别克隆入原核表达载体 p BV32 1,在大肠杆菌中进行表达。对表达产物进行活性效价测定。结果 3’端删除非编码区 ,表达水平比删除前提高 4倍 ;5’端四个位点突变 ,表达水平比突变前降低 2倍。结论 IFN-α2 b基因的 3’端非编码区抑制其在原核系统的表达 。

人乳头瘤病毒E7与人干扰素α-2b融合基因在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

目的:构建人乳头瘤病毒(HPV)11-E7及人干扰素(IFN)α-2b的真核表达载体,并在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达。方法:同时用KpnⅠ、EcoRⅠ酶切pET-32a-IFNα-2b-linker-HPV11-E7及pcDNA3.1,将酶切产物纯化回收,两者的回收产物进行连接反应。连接产物转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,随机挑选阳性克隆并提取质粒酶切鉴定;用脂质体法转染CHO细胞,用免疫荧光法检测融合基因的表达。结果:DNA测序结果显示,成功地将IFN-α-2b-linker-HPV11-E7装入pcDNA3.1的KpnⅠ、EcoRⅠ酶切位点之间,且其序列与设计完全一致;激光扫描共聚焦显微镜观察可见目的蛋白的表达。结论:成功地构建了HPV11-E7及IFNα-2b的真核表达载体,并在CHO细胞中表达,为提高DNA疫苗免疫效果的研究奠定了基础。

弥漫大B细胞淋巴瘤中SENEX基因与Rb/E2F1通路的相关性及临床病理意义

目的探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中SENEX基因表达与Rb/E2F1通路的相关性及临床病理意义。方法选择2016年1月至2019年12月该院首次确诊的84例DLBCL患者作为DLBCL组,选择经病理诊断为淋巴结反应性增生的40例患者作为对照组,检测SENEX、pRb、E2F1的表达水平,分析SENEX、pRb、E2F1与DLBCL病理特征、预后的关系。结果DLBCL组患者肿瘤组织中SENEX、pRb、E2F1表达水平均高于对照组(P<0.05),且三者之间均呈正相关(P<0.05);肿瘤最大径≥5 cm、有B症状、国际预后指数(IPI)为3~5、Ann Arbor分级为Ⅲ~Ⅳ级的患者肿瘤组织中SENEX、pRb、E2F1表达水平均高于肿瘤最大径<5 cm、无B症状、IPI为0~2、Ann Arbor分级为Ⅰ~Ⅱ级的患者(P<0.05);DLBCL组中SENEX、pRb、E2F1表达水平≥中位数的患者累积生存率均低于SENEX、pRb、E2F1表达水平<中位数的患者(P<0.05)。结论DLBCL中SENEX表达水平增加与疾病进展及预后不良有关,激活下游Rb/E2F1通路是SENEX发挥作用的可能分子机制。

干扰素α-2b对宫颈癌细胞HPV16 E6E7基因抑制作用的研究

目的 研究干扰素α- 2b对宫颈癌SiHa细胞生长的调节作用,从细胞生物学及分子生物学水平探讨干扰素α- 2b对宫颈癌细胞SiHa的作用机制。应用RT -PCR半定量检测细胞内HPV16E6E7mRNA表达,观察干扰素α- 2b对宫颈癌SiHa细胞中HPV16E6E7mRNA表达的影响。方法 以不同浓度的人重组干扰素α- 2b含药培养液作用于感染HPV16的人宫颈癌细胞系—SiHa细胞,并设立无药对照,通过MTT及流式细胞分析技术检测该药对细胞生长及增殖的影响;进行细胞凋亡检测并用RT -PCR法半定量检测对HPV16E6E7基因表达的影响。结果 经含有干扰素α- 2b的培养液作用后,细胞数量减少,10 0 0IU/ml的干扰素α- 2b对细胞抑制作用最强;细胞周期各时相中,S期细胞所占比例明显减少;均可诱导细胞凋亡;均使细胞中HPV16E6E7mRNA表达明显减少。结论 干扰素α- 2b不仅可直接抑制宫颈癌细胞的生长,并可能通过抑制HPV16E6E7基因表达的分子机制,达到抑制肿瘤目的。

人乳头瘤病毒11型E6基因与人IFN-α2b融合基因原核表达质粒的构建与鉴定

目的构建HPV11E6与人IFNα2b融合基因表达载体,为进一步原核表达奠定基础。方法在IFNα2b的起始密码子之前加入ccatggct,同时以编码(GGSGS)3的45个碱基序列取代其终止密码子,将改造后的人IFNα2b基因人工合成,然后将其装入质粒pET32a的NcoⅠ和BamHⅠ酶切位点之间;PCR扩增HPV11E6基因片段。将含有IFNα2b基因片段的质粒pET32a和含有BamHⅠ,EcoRⅠ酶切位点的HPV11E6同时用BamHⅠ,EcoRⅠ酶切,将酶切产物纯化回收后做连接反应,连接产物常规转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,随机挑选阳性克隆并提取质粒酶切鉴定,同时将挑选的阳性克隆菌液送公司测序。结果测序结果表明成功的将HPV11E6和人IFNα2b通过连接肽(GGSGS)3连接并装入pET32a的NcoⅠ和EcoRⅠ酶切位点之间,且基因序列与设计完全一致。结论HPV11E6与人IFNα2b融合基因表达载体的成功构建,为进一步原核表达奠定了基础。

猪瘟病毒E2蛋白B/C抗原区基因在毕赤酵母中的表达与鉴定

基于猪瘟病毒主要保护性抗原———E2囊膜糖蛋白有两个相对独立的抗原结构单位———B C抗原区和A D抗原区 ,设计引物扩增编码猪瘟病毒E2蛋白B C抗原区的基因 ,将大小为2 61bp的PCR产物插入含有强启动子PAOX1和α MF信号肽序列的巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达载体pPICZαC中 ,构建成重组质粒pPICZα BC ,酶切线性化后电穿孔导入巴斯德毕赤酵母菌X3 3 中 ,经ZeocinTM 筛选得到 3株高拷贝转化子 ,甲醇诱导表达 ,SDS PAGE和Westernblot及ELISA试验表明 ,酵母培养上清液中含有具有良好反应原性的E2蛋白。

原花青素对Aβ25-35诱导去血清培养PC12细胞CyclinD1、CDK4、E2F1基因表达的影响

目的：探讨原花青素（Proanthocyanidins，PAC）对β-淀粉样肽（25—35）[βamyloidpeptide-（25．35），Aβ25-35]诱导体外去血清培养PC12细胞CyclinD1、CDK4和E2F1基因表达的影响。方法：种入培养瓶的PC12细胞贴壁后用常用的去血清培养法使细胞同步于G0期，分为0对照组、Aβ25-35诱导组、PAC保护组，按实验需要分别在不同时间加入药物并收集细胞，通过RT-PCR和Westernblot从mRNA及蛋白水平检测CyclinD1、CDK4和E2F1基因表达水平的变化。结果：本课题组在前面的研究中发现PAC对Aβ25-35诱导体外去血清培养PCl2细胞周期变化有逆转作用，但具体机制尚未清。

TNFα诱导NF-κB转录调控SLC2A3基因

葡萄糖转运蛋白3编码基因SLC2A3在多种癌症中高表达,促进癌症进展,被认为是癌基因.但是SLC2A3基因高表达的机制一直不清楚.该研究首先在TNFα诱导的HeLa细胞内发现许多NF-κB结合峰分布于SLC2A3基因区,其中富集倍数大于10的结合峰57个,大于20的结合峰5个.并且NF-κB结合峰与染色质上DNase I超敏感位点和H_3K_(27)A_c富集区重合或相邻.而且TRANSFAC软件分析发现,这些结合峰内包含大量经典的κB位点.以上结果提示TNFα可能诱导NF-κB转录调控SLC2A3基因.因此,该研究随后用NF-κB诱导剂(TNFα)和抑制剂(NF-κB p65 si RNA)构建NF-κB转录活性差异的HeLa细胞模型.再通过检测NF-κB及其三个已知靶基因(IL6,IL7R和IL8)的转录水平评价构建的HeLa细胞模型.利用此细胞模型,发现TNFα诱导NF-κB转录上调SLC2A3基因.同时在Hep G2细胞进行类似的研究并得到一致的结果.该研究证明SLC2A3基因为NF-κB的靶基因,初步揭示了癌细胞中SLC2A3高表达的分子机制,为癌症中NF-κB的分子功能研究提供了新视角.

E1B缺陷腺病毒对鼻咽癌CNE-2细胞杀伤作用及其机理研究

目的 :研究E1B缺陷腺病毒dl15 2 0对鼻咽癌CNE 2细胞的杀伤作用及其作用机理。方法 :用MTT法和细胞病变试验 (CPE)测量dl15 2 0在体外对CNE 2细胞的抑制和杀伤作用 ,并通过测定病毒在CNE 2细胞中的复制产量和DAPI染色试验探讨其杀伤机理 ;瘤内注射dl15 2 0 ,观察其对CNE 2裸鼠移植瘤的治疗效果 ,用免疫织化方法检测肿瘤组织中病毒的复制。结果 :体外实验结果显示 :dl15 2 0能在CNE 2细胞中复制 ,导致明显的细胞病变 ,显著抑制CNE 2细胞的生长 ,在病变细胞中可见明显的核膨胀 ;瘤内注射dl15 2 0能明显抑制裸鼠移植瘤的生长 ,在肿瘤组织中可检测到病毒复制。结论 :dl15 2 0能在CNE 2细胞中复制并使之裂解 ,从而在体内外有效地抑制和杀伤CNE 2细胞。

乙型肝炎病毒基因型对干扰素α2b应答的影响

在HBV基因型特异引物下聚合酶链反应(PCR)扩增并检测1020例慢性乙型肝炎患者血清HBVDNA。其中136例接受干扰素α2b治疗,疗程6个月;观察患者乙型肝炎病毒血清标志物、HBVDNA、丙氨酸转氨酶(ALT)。1020例乙型肝炎患者中966例有基因分型结果;136例接受干扰素α2b治疗综合疗效(HBeAg阴转、HB-VDNA阴转、ALT复常)B型患者为40.9%(18/44),优于C型25.8%(16/62)及B/C混合型16.7%(5/30)(P>0.05)。乙型肝炎病毒不同基因型可以对干扰素α2b应答产生影响。

合并炎症性肠病的糖原累积病-Ⅰb型5例患儿SGLT2抑制剂治疗效果分析

目的分析5例合并炎症性肠病(IBD)的糖原累积病-Ⅰb型(GSD-Ⅰb)患儿接受钠-葡萄糖共转运体2(SGLT2)抑制剂的治疗效果。方法回顾性分析2021—2022年接受治疗并随访的5例合并IBD的GSD-Ⅰb型患儿,SGLT2抑制剂治疗前后的临床表现、实验室及辅助检查。结果5例患儿IBD发作中位年龄为5.0岁。5例均有口腔溃疡、腹痛、腹泻及肛周脓肿。SGLT2抑制剂治疗前,5例的中位儿童克罗恩病活动指数(PCDAI)为55.0。SGLT2抑制剂中位治疗12.0月后[末次随访中位剂量0.31 mg/(kg·d)],中位PCDAI(10.0)显著降低(P=0.043),5例均获得临床应答。治疗中,2例出现低血糖,4例出现会阴部或尿道口瘙痒。发现2种新SLC 37A4变异(c.2delT,c.1065delG)。c.446G>A(p.G 149E)为热点变异(70%)。结论SGLT2抑制剂可明显改善GSD-Ⅰb型患儿的IBD活动度,且安全性良好。

乳腺癌中BCL-6、ZEB2、PTEN与VEGF-D的表达及其意义

目的探讨B细胞淋巴瘤蛋白-6(BCL-6)、E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)、蛋白酪氨酸磷酸酶基因(PTEN)以及血管内皮生长因子-D(VEGF-D)在乳腺癌组织中的表达情况及其临床意义。方法 95例术前未做化疗的乳腺癌患者(Ⅰ期18例,Ⅱ期34例,Ⅲ期29例,Ⅳ期14例)作为乳腺癌组,60例乳腺良性增生病变患者作为良性病变组。比较两组患者免疫组化检测其BCL-6、ZEB2、PTEN与VEGF-D表达情况。结果乳腺癌组患者BCL-6、ZEB2与VEGF-D表达阳性率分别为56.84%、50.53%、62.11%,高于良性病变组的18.33%、21.67%、15.00%;PTEN表达阳性率为12.63%,低于良性病变组的76.67%,差异均具有统计学意义(P<0.05)。BCL-6、ZEB2与VEGF-D表达阳性率与乳腺癌组病理分期呈正相关(r=0.572、0.431、0.794,P<0.05),PTEN表达阳性率与乳腺癌组病理分期呈负相关(r=-0.353,P<0.05)。结论乳腺癌患者BCL-6、ZEB2与VEGF-D表达升高,PTEN表达降低,对其进行监测,能为其诊断及病情评估提供参考。

龙胆苦苷、木兰花碱对RA模型大鼠踝关节组织病理学及血清PGE2、Bcl-2水平的影响

通过观察对比秦艽主要成分龙胆苦苷、威灵仙主要成分木兰花碱及龙胆苦苷配伍木兰花碱对胶原诱导性关节炎(CIA)模型大鼠的足跖肿胀情况、组织病理学及血清中PGE2、Bcl-2水平的影响,探究龙胆苦苷、木兰花碱的抗炎活性对类风湿关节炎(RA)的治疗作用。48只SD大鼠适应性饲养3 d,按照随机数字表法分为空白组、模型组、阳性药物(甲氨蝶呤)组、龙胆苦苷组、木兰花碱组、龙胆苦苷配伍木兰花碱组(简称龙木配伍组)。除空白组外,其余各组大鼠均建立RA模型。造模结束后,空白组和模型组给予相应体积生理盐水进行灌胃,各给药组大鼠灌胃相应药液,每天1次,连续给药15 d。试验过程中,分别对各组大鼠、体质量、足跖肿胀度、AI评分进行观察并记录;对各组大鼠踝关节进行组织病理学观察;采用ELISA方法检测各组大鼠血清中前列腺素E2(PGE2)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)表达水平。给药治疗后,与模型组大鼠比较,各给药组大鼠精神状态、足跖肿胀情况、组织病理状态均有不同程度好转,各给药组大鼠血清中PGE2、Bcl-2水平与模型组比较均显著降低(P<0.05或P<0.01),但各给药组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。龙胆苦苷、木兰花碱及龙胆苦苷配伍木兰花碱能够有效改善RA模型大鼠的足跖肿胀与组织病理状态,明显降低血清中PGE2、Bcl-2表达水平,其作用机制可能是通过龙胆苦苷、木兰花碱抑制血清中PGE2、Bcl-2的过度表达,抑制炎症反应,从而对RA起到一定的治疗作用。

姜黄素影响Aβ_(25-35)诱导PC12细胞周期变化与细胞凋亡的可能机制

目的探讨姜黄素(curcum in,Cur)对β-淀粉样肽(25-35)[β-amyloidpeptide-(25-35),Aβ25-35]诱导体外血清饥饿培养的PC12细胞周期异常与凋亡保护作用的可能机制。方法5μmol.L-1Cur预处理同步于G0期的PC12细胞,加入终浓度为25μmol.L-1Aβ25-35处理0～20h,用RT-PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测p21、CDK4、E2F1、bax的表达。结果与Aβ25-35诱导组比较,Cur保护组p21mRNA和p21蛋白的表达增加;CDK4、E2F1、baxmRNA和CDK4、Bax蛋白的表达降低。结论Cur可能通过上调p21的表达,下调CDK4、E2F1、bax的表达,对Aβ25-35诱导的PC12细胞周期异常与凋亡起保护作用。

2018年中国部分地区猪瘟病毒2.1d亚型新流行株的基因组特征分析

为了解中国猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的分子流行病学及遗传变异情况,本研究应用RT-PCR方法对2018年采集自河南、河北、山东、黑龙江和辽宁5个省份的350份疑似CSFV感染的病料进行E2和NS5B基因扩增,并对PCR产物进行测序和序列分析。结果显示,350份样品中21份为CSFV阳性,共获得14株CSFV的E2基因序列和7株CSFV的部分NS5B基因序列。E2全基因、NS5B部分基因序列分析表明,21份阳性样品均属于近年来在中国流行的CSFV 2.1d亚型,且新发现的2.1d亚型CSFV与中国较早2.1d亚型CSFV毒株间同源性差异不大,新发现的2.1d亚型CSFV分离株在E2基因的6个氨基酸(R^31、S^34、W^182、K^205、K^303、A^331)上具有相同的分子特征,E2蛋白中15个位点上的半胱氨酸均未发生变异。韩国2.1d亚型CSFV在E2蛋白上具有3个独特的氨基酸(N^97、K^159、R^205)特征,并且发现了韩国毒株YC11WB可能作为2.1b和2.1d亚型CSFV过渡毒株的证据,流行于中国和韩国的2.1d亚型CSFV可能分别来自于本国早期2.1b亚型CSFV的衍化。本研究证实,2018年中国及周边国家CSFV较为活跃,且流行毒株依然以2.1d亚型为主,为中国科学防控CSFV提供了依据。