氨基酸转运蛋白SLC38A2促进NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用

目的:探讨溶质载体家族38成员2(solute carrier family 38 member 2,SLC38A2)对自然杀伤(natural killer,NK)细胞肿瘤杀伤活性的影响。方法:采用实时荧光定量PCR法检测谷氨酰胺缺失NK细胞和节食小鼠脾脏中谷氨酰胺相关氨基酸转运蛋白(SLC38A2、SLC1A5、SLC7A5、SLC7A1和SLC1A4)mRNA的表达情况。通过慢病毒感染的方法将携带有SLC38A2基因重组慢病毒载体转入NK-92MI细胞使SLC38A2过表达。在SLC38A2过表达或谷氨酰胺浓度提高后,利用乳酸脱氢酶释放实验检测NK-92MI细胞对胰腺癌细胞PANC-1和肝癌细胞HUH-7的杀伤活性,并通过FCM法(FITC-Annexin V/7-AAD染色)检测NK-92MI细胞对PANC-1和HUH-7细胞凋亡的影响。最后,通过FCM法进一步检测NK-92MI细胞中杀伤效应分子干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达水平以及脱颗粒标志分子CD107a的表达水平。结果:在缺失谷氨酰胺的培养条件下以及节食小鼠模型中获得的NK细胞中氨基酸转运蛋白SLC38A2 mRNA的表达显著增高(P<0.001和P<0.01)。成功构建SLC38A2过表达的NK-92MI细胞;SLC38A2过表达或谷氨酰胺处理均可以明显提升NK-92MI细胞对胰腺癌PANC-1和肝癌HUH-7细胞的杀伤能力(P均<0.05),同时对肿瘤细胞的凋亡具有明显的促进作用(P均<0.01)。流式细胞分析结果显示,过表达SLC38A2的NK-92MI细胞在杀伤肿瘤细胞的过程中,细胞内IFN-γ和TNF-α的含量均显著增加(P均<0.001),细胞膜表面CD107a的表达水平显著提高(P<0.001)。结论:氨基酸转运蛋白SLC38A2能显著增强NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。

基于蛋白质组学的噪声性隐性听力损失机制研究

目的通过蛋白质组学对噪声性隐性听力损失机制进行初步探索。方法于2022年10月,按照单纯随机抽样的方法将64只SPF级雄性C57BL/6J小鼠分为对照组和噪声暴露组,每组32只。噪声暴露组在声压级100 dB、2000~16000 Hz宽频噪声下暴露2 h,构建小鼠隐性听力损失模型。采用听性脑干反应(ABR)测试小鼠噪声暴露后第7天的听力阈值变化情况,免疫荧光观察基底膜毛细胞损伤情况,4D-Label-free定量蛋白组学鉴定并分析各组小鼠内耳差异表达蛋白质,并用蛋白印迹(Western blotting)法进行验证,采用方差分析和t检验对结果进行统计分析。结果噪声暴露后第7天,短声(click)、8000 Hz声刺激时两组小鼠听力阈值差异均无统计学意义(P>0.05),16000 Hz声刺激时噪声暴露组小鼠听力阈值明显高于对照组(P<0.05);共聚焦免疫荧光显示噪声暴露组小鼠耳蜗组织基底膜毛细胞排列整齐,但中回和底回突触前膜C末端结合蛋白2抗体(CtBP2)相对表达均明显少于对照组(P<0.05)。GO富集分析显示,差异表达蛋白功能主要集中在膜电位调节、配体门控通道活性、配体门控离子通道活性等。KEGG通路富集分析发现,差异表达蛋白明显富集的通路包括磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路、NOD样受体信号通路、钙信号通路等。Western blotting结果显示,噪声暴露组小鼠肌醇1,4,5-三磷酸受体3型(Itpr3)表达量升高,溶脂载体家族38成员2(2Slc38a2)表达量降低(P<0.05)。结论在构建的小鼠噪声性隐性听力损失模型中,通过蛋白质组学分析、筛选并验证差异表达蛋白Itpr3和Slc38a2,初步证实以Itpr3和Slc38a2为代表的谷氨酸能突触相关通路可能参与了隐性听力损失的发生。