肠病性肢端皮炎SLC39A4基因突变的研究

目的:研究肠病性肢端皮炎(acrodermatitis enteropathica,AE)患者SLC39A4基因突变情况,为完善该病的基因诊断与遗传咨询提供分子生物学依据。方法:提取AE家系成员(包括1例男性AE患者及其双亲)和100例正常对照外周血白细胞基因组DNA,PCR扩增SLC39A4基因的全部外显子并行DNA测序。结果:检测到患者SLC39A4基因中第5号外显子c.831G>A和第10号外显子c.1617delA,前者导致编码蛋白密码子277位ATG变为ATA,编码的蛋氨酸Methionine M变为异亮氨酸Isoleucine I,后者导致cDNA1617位A丢失,移码突变。患者的父亲和母亲分别携带c.831G>A和c.1617delA基因突变,与家系无血缘关系的100名正常对照均未发现此突变。结论:SLC39A4基因c.831G>A和c.1617delA突变是导致该例患者AE的特异突变。

敲除SLC39A5基因对4-NQO诱发C57BL/6小鼠食管癌模型建立的影响

目的探索敲除SLC39A5基因对4-NQO诱导的C57BL/6小鼠食管癌模型的影响。方法选取10只C57BL/6野生型小鼠作为阴性对照组,饮用浓度为100μg/ml的丙二醇空白溶液;选取140只野生型小鼠与80只SLC39A5基因敲除小鼠,采用饮水法摄入诱癌剂,即浓度为100μg/ml的4-NQO(4-nitroquinoline 1-oxide),实验时间为28周,实验结束后处死三组小鼠。结果阴性对照组小鼠、野生型小鼠和SLC39A5基因敲除小鼠在实验结束时其存活率分别为100%、92.96%、91.25%;三组小鼠食管癌诱癌成功率分别为0、61.36%、28.77%,两实验组小鼠诱癌成功率差异有统计学意义(χ2=19.98,P<0.001)。结论成功建立了C57BL/6小鼠及SLC39A5基因敲除小鼠的食管癌模型,同时验证了SLC39A5基因在食管癌发生发展中的促进作用。

宫颈癌中SLC39A6基因表达及其调节上皮间质转化的研究

目的研究SLC39A6在宫颈癌中表达的临床意义及其对宫颈癌细胞功能的影响。方法基于GEO数据库中已有数据对SLC39A6在正常组织及肿瘤组织中的表达进行meta分析,继而在组织芯片上进行验证。通过TCGA数据库中数据对SLC39A6表达与宫颈癌患者的生存期进行相关性分析。通过RNAi技术结合慢病毒技术,对人宫颈癌细胞(Hela)中SLC39A6进行稳定干扰,研究SLC39A6基因干扰对宫颈癌细胞上皮间质转化(EMT)及转移能力的影响。结果通过GEO数据集和TCGA数据库中分析表明,宫颈癌组织中SLC39A6表达明显高于正常组织,且SLC39A6基因表达与患者总生存期及无病生存期呈负相关。干扰SLC39A6可明显抑制宫颈癌细胞上皮间质转化及转移能力。结论 SLC39A6与宫颈癌发生发展密切相关,SLC39A6可调控宫颈癌细胞转移,进而影响宫颈癌患者预后,表明SLC39A6可作为潜在的宫颈癌诊断标志物及治疗靶点。

暂时性症状性锌缺乏18例临床分析及SLC39A4基因检测

暂时性症状性锌缺乏（transient symptomatic zinc deficiency，TSZD）发生于婴儿。临床表现为肢端及腔口周围皮炎、脱发及腹泻，常伴低锌血症，与肠病性肢端皮炎（acrodermatitis enteropathica，AE）非常相似，极易混淆。SLC39A4基因为AE的致病基因，我们收集了四川地区18例经SLC39A4基因检测证实为TSZD的患儿资料，将其临床特点总结如下。

动物锌转运蛋白SLC39A4的功能及调控研究

SLC39A是动物体内重要的锌转运蛋白家族之一,直接参与细胞内锌离子的稳态调控。SLC39A4(溶质运载蛋白39号家族4号成员)作为该家族的重要成员,在小肠锌吸收和锌稳态调控中发挥着重要作用,且SLC39A4基因和蛋白表达受锌水平的调控。

SLC24A5,SLC39A9基因在黑线仓鼠及其A：CHA品系表达水平的比较分析

目的 比较可溶性物质运输蛋白SLC24A5（solute carrier family 24,member5,SLC24A5）和SLC39A9（solute carrier family 39,member9,SLC39A9）在黑线仓鼠及其白化突变系（A：CHA）皮肤组织的基因表达差异,分析这两种基因对白化性状产生的影响.方法 提取黑线仓鼠和A：CHA的皮肤组织总RNA,利用普通PCR的方法筛选引物,利用实时荧光定量PCR技术,比较分析黑线仓鼠和A：CHA皮肤组织SLC24A5、SLC39A9表达量的异同.结果 黑线仓鼠皮肤中的SLC24A5、SLC39A9基因mRNA的相对表达量分别是A：CHA组织中的2倍和3.8倍.结论 SLC24A5、SLC39A9基因在A：CHA皮肤组织的表达量下调,说明SLC24A5和SLC39A9基因与A：CHA白化性状的产生存在一定的关联性.

SLC39A6基因表达与膀胱癌的关系研究

目的探讨SLC39A6基因在膀胱癌中的表达情况及其临床意义。方法采用荧光定量PCR检测54例膀胱癌患者手术切除的病理标本中膀胱癌组织和相应的癌旁正常组织中SLC39A6基因的表达情况,并分析膀胱癌组织中SLC39A6基因的表达量变化与肿瘤的分级和临床病理分期之间的关系。结果 SLC39A6基因在癌旁正常组织中呈低表达,相对表达量为0.353±0.057;在膀胱癌组织中高表达,相对表达量为0.592±0.069,两组SLC39A6基因相对表达量比较差异有统计学意义(P<0.05)。在膀胱癌组织中,SLC39A6基因相对表达量与癌组织的临床分期、分化程度呈正相关(P=0.000)。结论人膀胱癌组织中SLC39A6基因的表达水平较正常膀胱组织增高,并可能促进了膀胱癌细胞的侵袭和转移。

一例锌缺乏患者的SLC39A4基因突变检测并文献复习

目的:检测1例锌缺乏患者SLC39A4基因的突变,并对国内外报道的肠病性肢端皮炎和获得性锌缺乏的文献进行回顾性分析。方法:提取患者外周血DNA,采用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)和DNA直接测序方法检测患者SLC39A4基因的突变。结果:在SLC39A4基因上没有检测出致病突变。文献检索共检索锌缺乏患者139例,结合本院1例,共140例。其中肠病性肢端皮炎患者有84例,获得性锌缺乏患者有56例。肠病性肢端皮炎患者中进行SLC39A4检测的有39例,突变检出率为100%,其中预后需要长期补锌治疗的34例(87.2%)。获得性锌缺乏患者中进行SLC39A4基因检测的有19例,突变检出率为0%,均不需要长期补锌治疗。结论:肠病性肢端皮炎与SLC39A4基因的突变有关,而获得性锌缺乏的发病未发现与SLC39A4基因的突变相关,SLC39A4基因检测对肠病性肢端皮炎和获得性锌缺乏的鉴别有重要意义。

全基因组关联分析确认食管鳞癌中SLC39A6基因常见变体与生存期长短有关

本实验团队第一阶段对1 331例食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）进行全基因组单核苷酸多态性（SNP）研究发现其变体与生存期长短相关,并在第二阶段1 962例食管鳞状细胞癌患者中进行确认变体与生存期长短相关,本组发现食管鳞状细胞癌中SLC39A6基因5＇端非编码区上rs1050631位点与个人生存时间相关,合并第一阶段与第二阶段的样本死亡危险比为1．30（95％可信区间=1．19～1．43，P=3．77×10^-8）。

miR-139-5p靶向SLC39A7基因通过Wnt/β-catenin信号抑制肾癌细胞周期和增殖

目的 研究miR-139-5p对肾癌(RC)细胞周期和增殖的影响和潜在机制。方法 以正常肾小管上皮细胞HK-2为对照,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western印迹检测RC细胞系A498、786-O和SN12C-PM6中miR-139-5p和SLC39A7的表达;在786-O细胞中高表达miR-139-5p和敲减SLC39A7,Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、CyclinE和β-catenin蛋白表达水平,CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞存活率和细胞周期,双荧光素酶报告系统验证miR-139-5p和SLC39A7的关系。结果 与NC组和miR-con组相比,miR-139-5p组miR-139-5p表达量显著上升(P<0.05),细胞存活率显著降低(P<0.05),CyclinD1和CyclinE表达量均显著降低(P<0.05),G0/G1期和G2/M期细胞百分比显著升高(P<0.05),S期细胞百分比显著降低(P<0.05)。与NC组和si-con组相比,si-SLC39A7组786-O细胞中SLC39A7、CyclinD1和CyclinE表达量显著下降(P<0.05),细胞存活率显著降低(P<0.05),G0/G1期和G2/M期细胞百分比显著升高(P<0.05),S期细胞百分比显著降低(P<0.05)。与miR-con组相比,miR-139-5p组WT-SLC39A7的萤火虫荧光素酶相对活性显著下降(P<0.05)。与miR-con组SLC39A7蛋白表达量相比,过表达miR-139-5p组显著下降(P<0.05);与anti-miR-con组SLC39A7表达量相比,anti-miR-139-5p表达组显著上升(P<0.05)。与miR-con组SLC39A7水平相比,过表达miR-139-5p可抑制786-O细胞中SLC39A7表达(P<0.05)。与miR-139-5p+pcDNA-con组相比,miR-139-5p+pcDNA-SLC39A7组的SLC39A7、CyclinD1和CyclinE表达量显著升高(P<0.05),细胞存活率显著升高(P<0.05),G0/G1期和G2/M期细胞百分比显著降低(P<0.05),S期细胞百分比显著升高(P<0.05)。与miR-con组786-O细胞中β-catenin表达水平相比,过表达miR-139-5p组显著降低(P<0.05);与miR-139-5p+pcDNA-con组786-O细胞中β-catenin表达相比,miR-139-5p+pcDNA-SLC39A7组显著升高(P<0.05)。结论 miR-139-5p靶向SLC39A7可能通过Wnt/β-catenin信号通路调控RC细胞周期和增殖。miR-139-5p是RC的潜在分子靶点。

SLC39A13基因的泛癌分析

目的研究SLC39A13基因在人肿瘤组织内的基因及蛋白表达情况,并探究其临床意义。方法使用TIMER2.0和GEPIA2数据库探索SLC39A13基因在肿瘤组织中的表达情况。使用GEPIA2和cBioPortal数据库探索肿瘤预后情况和SLC39A13基因变异分析。使用TIME2.0探索SLC39A13表达与免疫浸润之间的关系。使用STRING,GEPIA2,Veen网站和R包进行SLC39A13相关基因的富集分析。结果SLC39A13基因在乳腺癌、宫颈癌、肝癌等组织中高表达,高表达的SLC39A13与预后不良有关的肿瘤有多形成性胶质细胞瘤、脑低级别胶质瘤、间皮瘤等。SLC39A13基因在睾丸癌、子宫肉瘤等组织中低表达,其低表达与胰腺癌的预后差有关。SLC39A13最主要的变异类型是错义突变。在结肠癌、胰腺癌、前列腺癌等6种肿瘤中SLC39A13的表达与免疫浸润呈正相关,SLC39A13的表达水平与肾乳头状细胞癌的相关成纤维细胞浸润水平呈负相关。结论通过对SLC39A13的泛癌分析表明,SLC39A13的表达与临床预后、基因突变、肿瘤细胞的免疫浸润之间存在相关性,有助于从临床角度理解SLC39A13在肿瘤发生发展中的作用,为临床诊断治疗提供帮助。

急性髓系白血病中SLC39A1表达及其临床意义

目的通过分析SLC39A1基因在急性髓系白血病(AML)中的表达及其临床意义,揭示SLC39A1促进AML发生发展的作用。方法应用GEO数据库(GSE30029)分析90例AML患者和31例健康对照者骨髓细胞SLC39A1基因的表达水平;应用TCGA数据库中172例含随访信息的AML患者病历资料,分析SLC39A1基因表达对预后的影响。结果健康对照组中SLC39A1的中位表达水平为455.1,AML患者中SLC39A1的中位表达水平为585.5,SLC39A1在AML患者中表达上调,差异有统计学意义(P<0.001)。ROC曲线评价结果显示,当截断值为560.7时,诊断AML的敏感度和特异度分别为60.0%和90.3%。SLC39A1高表达组年龄和白细胞数量高于低表达组,差异均有统计学意义(P<0.05);SLC39A1高表达组FAB分型中M4和M5组比率高于低表达组,差异有统计学意义(P<0.001)。SLC39A1高表达组患者的总生存期显著短于SLC39A1低表达组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论SLC39A1高表达是AML患者中常见的分子事件,SLC39A1高表达与AML患者预后不良相关,并可用于AML疾病进展的监测。

构建靶向小鼠Slc39a4基因的CRISPR/Cas9系统及打靶功能验证

目的:构建靶向小鼠Slc39a4基因的CRISPR/Cas9系统并在细胞水平上对其打靶功能进行验证。方法:参考数据库中人SLC39A4强致病位点,对比分析人和小鼠Slc39a4蛋白序列,将人强致病位点定位于小鼠基因组上。根据定位区域的小鼠基因组DNA序列,设计3个向导RNA(small guide RNA,sgRNA)序列,构建表达载体。通过细胞转染、药物筛选,获得阳性细胞。利用PCR扩增、T7 Endonu-clease酶切反应和TA克隆测序分析打靶情况以及打靶位点的基因型和编辑效率。结果:成功构建了3个sgRNA,sgRNA3导向序列可诱导Cas9蛋白打靶小鼠Slc39a4基因,打靶效率为30%。结论:成功构建靶向小鼠Slc39a4基因的CRISPR/Cas9系统,为制备SLC39A4基因编辑动物模型,深入研究SLC39a4基因的致病机理奠定基础。

血清锌正常的肠病性肢端皮炎患儿1例SLC39A4基因突变检测

目的报道1例血清锌正常肠病性肢端皮炎患儿及SLC39A4基因新突变位点。方法收集患儿及家系成员临床资料及外周血,检测患儿血清锌及碱性磷酸酶水平,并对家系成员进行基因测序。结果3次检测患儿血清锌水平分别为57.3、48.0和47.7μmol/L,均处于正常范围,但血清碱性磷酸酶(ALP)水平偏低(34 U/L)。基因测序发现,患儿存在SLC39A4基因c.1462_1474+1delAGACTGAGCCCAGG(p.Arg488fs)和c.296C>T(p.Ala99Val)复合杂合变异。结论该例血清锌正常的肠病性肢端皮炎患儿,SLC39A4基因中发现新的突变位点:c.296C>T(p.Ala99Val),本研究扩展了肠病性肢端皮炎的基因突变谱。

敲低SLC39A6表达对人脑胶质瘤增殖和侵袭的影响

目的探讨锌铁转运蛋白SLC39A6对人脑胶质瘤增殖和侵袭过程的影响。方法选取患者来源的不同级别的脑胶质瘤组织45例及正常脑组织10例,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot方法检测组织和已有细胞系中SLC39A6的mRNA和蛋白表达水平,构建SLC39A6的RNA干扰慢病毒,利用慢病毒转染T98G和U251细胞系来敲低SLC39A6的表达,通过qRT-PCR与Western blot方法检测转染效率,MTS方法检测敲低SLC39A6后细胞的活性变化,Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化。结果SLC39A6 mRNA和蛋白在人脑胶质瘤组织表达水平显著高于正常脑组织,并随级别增高而增高。构建稳定敲低SLC39A6的T98G和U251细胞系,与对照组相比,敲低SLC39A6后胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力显著降低。结论敲低SLC39A6抑制胶质瘤细胞增殖和侵袭能力,是潜在的治疗靶点。

SLC39A8介导的铁稳态对糖尿病肾小管上皮细胞铁死亡的作用及机制研究

目的探索SLC39A8介导的肾脏铁稳态在糖尿病肾病肾小管上皮细胞铁死亡中的作用及可能机制。方法将16只db/db小鼠随机分为db/db组、Fe-db/db组,每组8只。另取8只db/m小鼠作为对照组。饲料铁含量不同,对照组,db/db组的铁含量约为33 ppm、Fe-db/db组的铁含量约为200 ppm。采用相关试剂盒检测尿白蛋白/肌酐比值、空腹血糖,采用生化分析仪检测肾功能(血清肌酐及尿素氮)。共聚焦免疫荧光检测肾组织SLC39A8、GPX4蛋白表达。Western blot检测SLC39A8、铁死亡相关蛋白GPX4、GSH、SLC7A11、ACSL4及TGF-β/Smad通路关键蛋白Smad3、Smad4、p-Smad3及p-Smad4蛋白表达。结果与对照组及db/db组小鼠相比,Fe-db/db组小鼠的肾功能明显降低,蛋白尿明显增加,肾组织铁水平升高。免疫荧光共聚焦及免疫电镜检测显示SLC39A8在db/db小鼠近端肾小管上皮细胞高表达,亚细胞定位于线粒体。与对照组及db/db组相比,Fe-db/db小鼠的SLC39A8蛋白表达增高、铁死亡相关因子GPX4、GSH、SLC7A11的蛋白表达降低,而ACSL4表达升高,Smad3和Smad4的磷酸化表达明显升高。结论SLC39A8介导的肾小管上皮细胞铁超载参与DKD肾小管上皮细胞的铁死亡,触发TGF-β/Smad通路活化可能是其重要机制之一。

一例肠病性肢端皮炎患者的SLC39A4基因突变研究

目的检测1例肠病性肢端皮炎患者SLC39A4基因的突变情况。方法收集1例肠病性肢端皮炎患者的临床资料，提取患者及其家庭成员的外周血DNA，同时选取100名无关健康人作为正常对照，用PCR扩增sLC39A4基因所有外显子编码区及其侧翼序列，通过对PCR反应产物直接测序进行序列分析。结果测序的结果显示患者和其母亲SLC39A4基因的第6外显子存在c．1110InsG（p．Gly370G1yfsX47→TGA）新的移码突变，患者和其父亲、祖母SLC39A4基因的第5外显子存在新的c．958C〉T（p．Q320X）无义突变。100名正常对照未检测出该位点突变。结论来源于母亲的c．1110InsG（p．Gly370GlyfsX47→TGA）移码突变和来源于父亲的c．958C〉T（p．Q320X）无义突变可能是导致该肠病性肢端皮炎患者发病的原因。

锌转运蛋白家族SLC39A/ZIP和SLC30A/ZnT的研究进展

必需微量元素锌通过催化和结构作用参与机体多种酶和蛋白功能,与机体发育、脑功能、骨骼生长、生殖健康及免疫功能等密切相关。补充锌可以一定程度防治儿童腹泻、慢性丙型肝炎、急性下呼吸道感染以及感冒等疾病,然而过多的锌具有毒性。因此,机体存在复杂的锌离子稳态体系维持锌离子的吸收、储存和丢失的平衡过程。已发现哺乳动物中SLC39A和SLC30A两个转运蛋白家族直接参与细胞内锌离子的稳态代谢。SLC39A家族又称ZIP家族,共有14个成员,该家族多个成员已被证明可促进细胞外或细胞器内的锌离子转运到细胞质;SLC30A家族又称ZnT家族,共有10个成员,与SLC39A家族功能相反,多个家族成员可协助锌离子从细胞质内流出到细胞外或流进到细胞器内。研究提示ZnT1、ZIP4和ZIP5参与小肠锌离子吸收过程,ZIP10和ZnT1参与肾脏锌离子再吸收过程,ZIP5、ZnT2和ZnT1参与胰腺锌离子分泌丢失过程。另有证据证明SLC39A和SLC30A两个家族的蛋白还可能参与许多疾病包括肿瘤及糖尿病的发生和发展。本文将对哺乳动物SLC39A和SLC30A两个锌转运蛋白家族的最新研究进展进行综述。

微RNA-128-3p靶向SLC39A7基因促进卵巢癌细胞内质网应激诱导的细胞凋亡

目的探讨微RNA(miR)-128-3p/SLC39A7分子轴在卵巢癌细胞内质网应激诱导的细胞凋亡中的作用。方法应用3μmol/L的衣霉素(TM)诱导OVCAR-3细胞内质网应激,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blotting)检测未经TM处理及TM处理24 h后人卵巢癌细胞OVCAR-3内miR-128-3p和SLC39A7表达水平差异。构建过表达miR-128-3p或敲减SLC39A7的OVCAR-3细胞株,流式细胞术检测过表达miR-128-3p或敲减SLC39A7对内质网应激状态下的OVCAR-3细胞凋亡的影响,Western blotting检测SLC39A7蛋白、内质网应激蛋白ATF4和CHOP及凋亡蛋白Cleaved-caspase-3的表达。双荧光素酶报告基因实验和Western blotting验证miR-128-3p和SLC39A7的靶向关系。结果TM处理可显著促进OVCAR-3细胞miR-128-3p的表达,抑制SLC39A7的表达。过表达miR-128-3p或敲减SLC39A7均可促进内质网应激状态下的卵巢癌细胞凋亡。SLC39A7是miR-128-3p的靶基因,miR-128-3p可负性调控SLC39A7的表达。过表达SLC39A7可部分逆转miR-128-3p对内质网应激状态下的卵巢癌细胞凋亡的影响。结论miR-128-3p通过靶向下调SLC39A7表达促进内质网应激诱导的卵巢癌细胞凋亡。

SLC39A6基因在肾癌中的表达及其临床意义

目的探讨SLC39A6基因在肾癌中的表达情况及其临床意义。方法采用免疫组织化学法和荧光定量PCR检测于武汉大学人民医院收集的68例肾癌患者手术切除的病理标本中肾癌组织和相应的癌旁正常组织中SLC39A6基因的表达情况,并分析肾癌组织中SLC39A6基因的表达量变化与临床病理因素之间的相关性。结果 SLC39A6基因在癌旁正常组织中呈低表达,相对表达量为0.225±0.054;在肾癌组织中高表达,相对表达量为0.467±0.072,两组SLC39A6基因相对表达量比较差异有统计学意义(P<0.05)。肾癌组织中,SLC39A6基因相对表达量在不同年龄、性别及肿瘤大小间差异无统计学意义(P>0.05)。高分化肾癌组织SLC39A6基因表达量显著低于中低分化肾癌组织(P<0.05)。I和II期肾癌组织SLC39A6基因表达量显著低于III和IV期肾癌组织(P<0.05)。有淋巴结转移肾癌组织SLC39A6基因表达量显著高于无淋巴结转移肾癌组织(P<0.05)。结论肾癌组织中SLC39A6基因的表达水平较正常肾脏组织增高,并可能促进肾癌细胞的侵袭和转移。