构建靶向小鼠Slc39a4基因的CRISPR/Cas9系统及打靶功能验证

目的:构建靶向小鼠Slc39a4基因的CRISPR/Cas9系统并在细胞水平上对其打靶功能进行验证。方法:参考数据库中人SLC39A4强致病位点,对比分析人和小鼠Slc39a4蛋白序列,将人强致病位点定位于小鼠基因组上。根据定位区域的小鼠基因组DNA序列,设计3个向导RNA(small guide RNA,sgRNA)序列,构建表达载体。通过细胞转染、药物筛选,获得阳性细胞。利用PCR扩增、T7 Endonu-clease酶切反应和TA克隆测序分析打靶情况以及打靶位点的基因型和编辑效率。结果:成功构建了3个sgRNA,sgRNA3导向序列可诱导Cas9蛋白打靶小鼠Slc39a4基因,打靶效率为30%。结论:成功构建靶向小鼠Slc39a4基因的CRISPR/Cas9系统,为制备SLC39A4基因编辑动物模型,深入研究SLC39a4基因的致病机理奠定基础。

血清锌正常的肠病性肢端皮炎患儿1例SLC39A4基因突变检测

目的报道1例血清锌正常肠病性肢端皮炎患儿及SLC39A4基因新突变位点。方法收集患儿及家系成员临床资料及外周血,检测患儿血清锌及碱性磷酸酶水平,并对家系成员进行基因测序。结果3次检测患儿血清锌水平分别为57.3、48.0和47.7μmol/L,均处于正常范围,但血清碱性磷酸酶(ALP)水平偏低(34 U/L)。基因测序发现,患儿存在SLC39A4基因c.1462_1474+1delAGACTGAGCCCAGG(p.Arg488fs)和c.296C>T(p.Ala99Val)复合杂合变异。结论该例血清锌正常的肠病性肢端皮炎患儿,SLC39A4基因中发现新的突变位点:c.296C>T(p.Ala99Val),本研究扩展了肠病性肢端皮炎的基因突变谱。

11岁女孩反复全身散在皮疹10年

病例介绍患儿,女,11岁,因发现四肢及腔口(口周、眼周、肛周等皮肤与黏膜交界的部位)部位皮疹10年余就诊。患儿自3月龄开始出现手足关节、外阴、肛周处红斑,红斑上可见水疱、溃疡,就诊当地医院,考虑“尿布皮炎”,予鞣酸软膏及激素类乳膏(具体不详)外用,好转不明显。而后皮疹加重,并逐渐累及口周、四肢。曾多次前往广州某医院就诊,诊断考虑“肛周皮炎、湿疹”,查微量元素未见异常,但考虑患儿脱屑明显,予口服补锌及外用药物(具体不详)治疗,病情好转,但停药后复发,皮疹反复出现。患儿大小便正常,无腹泻。

一例肠病性肢端皮炎患者的SLC39A4基因突变研究

目的检测1例肠病性肢端皮炎患者SLC39A4基因的突变情况。方法收集1例肠病性肢端皮炎患者的临床资料，提取患者及其家庭成员的外周血DNA，同时选取100名无关健康人作为正常对照，用PCR扩增sLC39A4基因所有外显子编码区及其侧翼序列，通过对PCR反应产物直接测序进行序列分析。结果测序的结果显示患者和其母亲SLC39A4基因的第6外显子存在c．1110InsG（p．Gly370G1yfsX47→TGA）新的移码突变，患者和其父亲、祖母SLC39A4基因的第5外显子存在新的c．958C〉T（p．Q320X）无义突变。100名正常对照未检测出该位点突变。结论来源于母亲的c．1110InsG（p．Gly370GlyfsX47→TGA）移码突变和来源于父亲的c．958C〉T（p．Q320X）无义突变可能是导致该肠病性肢端皮炎患者发病的原因。

肠病性肢端皮炎SLC39A4基因突变

目的 研究1例散发肠病性肢端皮炎(acrodermatitis enteropathica,AE)患者及其家系的SLC39A4基因突变情况,为完善该病的发病机制和产前咨询提供生物学依据。方法 收集AE患者及其家系成员的临床资料和外周血,采用PCR技术对SLC39A4基因编码区及其侧翼进行扩增,并进行DNA测序。结果 该患者SLC39A4基因发现c.948delC的纯合核苷酸变异,该变异导致从第317号氨基酸Val开始的氨基酸合成发生改变,并在改变后的第32个氨基酸终止,为移码突变。该患者的父亲和母亲均发现c.948delC杂合突变,其弟弟及与该家系无血缘关系的100例正常对照均未发现此突变。结论 SLC39A4基因c.948delC纯合突变是导致该AE患者发病的机制。此突变之前未有报道,有助于了解AE基因型与表现型的关系。

肠病性肢端皮炎研究进展

肠病性肢端皮炎(acrodermatitis enteropathica,AE)是一种锌缺乏性疾病,本病临床特征为腔口周围及肢端皮炎、秃发和腹泻三联征。临床上AE可由基因突变导致肠道锌吸收障碍引起,称为遗传性AE或典型性AE,也可由各种获得性因素导致锌缺乏所致,后者称为获得性AE或获得性AE样疾病,二者在发病机制、治疗及预后上显著不同。目前发现SLC39A4基因是遗传性AE的致病基因,故SLC39A4基因突变检测可作为区分遗传性AE或获得性AE的重要手段,该文就AE研究的最新进展进行综述。