miR-139-5p靶向SLC39A7基因通过Wnt/β-catenin信号抑制肾癌细胞周期和增殖

目的 研究miR-139-5p对肾癌(RC)细胞周期和增殖的影响和潜在机制。方法 以正常肾小管上皮细胞HK-2为对照,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western印迹检测RC细胞系A498、786-O和SN12C-PM6中miR-139-5p和SLC39A7的表达;在786-O细胞中高表达miR-139-5p和敲减SLC39A7,Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、CyclinE和β-catenin蛋白表达水平,CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞存活率和细胞周期,双荧光素酶报告系统验证miR-139-5p和SLC39A7的关系。结果 与NC组和miR-con组相比,miR-139-5p组miR-139-5p表达量显著上升(P<0.05),细胞存活率显著降低(P<0.05),CyclinD1和CyclinE表达量均显著降低(P<0.05),G0/G1期和G2/M期细胞百分比显著升高(P<0.05),S期细胞百分比显著降低(P<0.05)。与NC组和si-con组相比,si-SLC39A7组786-O细胞中SLC39A7、CyclinD1和CyclinE表达量显著下降(P<0.05),细胞存活率显著降低(P<0.05),G0/G1期和G2/M期细胞百分比显著升高(P<0.05),S期细胞百分比显著降低(P<0.05)。与miR-con组相比,miR-139-5p组WT-SLC39A7的萤火虫荧光素酶相对活性显著下降(P<0.05)。与miR-con组SLC39A7蛋白表达量相比,过表达miR-139-5p组显著下降(P<0.05);与anti-miR-con组SLC39A7表达量相比,anti-miR-139-5p表达组显著上升(P<0.05)。与miR-con组SLC39A7水平相比,过表达miR-139-5p可抑制786-O细胞中SLC39A7表达(P<0.05)。与miR-139-5p+pcDNA-con组相比,miR-139-5p+pcDNA-SLC39A7组的SLC39A7、CyclinD1和CyclinE表达量显著升高(P<0.05),细胞存活率显著升高(P<0.05),G0/G1期和G2/M期细胞百分比显著降低(P<0.05),S期细胞百分比显著升高(P<0.05)。与miR-con组786-O细胞中β-catenin表达水平相比,过表达miR-139-5p组显著降低(P<0.05);与miR-139-5p+pcDNA-con组786-O细胞中β-catenin表达相比,miR-139-5p+pcDNA-SLC39A7组显著升高(P<0.05)。结论 miR-139-5p靶向SLC39A7可能通过Wnt/β-catenin信号通路调控RC细胞周期和增殖。miR-139-5p是RC的潜在分子靶点。

微RNA-128-3p靶向SLC39A7基因促进卵巢癌细胞内质网应激诱导的细胞凋亡

目的探讨微RNA(miR)-128-3p/SLC39A7分子轴在卵巢癌细胞内质网应激诱导的细胞凋亡中的作用。方法应用3μmol/L的衣霉素(TM)诱导OVCAR-3细胞内质网应激,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blotting)检测未经TM处理及TM处理24 h后人卵巢癌细胞OVCAR-3内miR-128-3p和SLC39A7表达水平差异。构建过表达miR-128-3p或敲减SLC39A7的OVCAR-3细胞株,流式细胞术检测过表达miR-128-3p或敲减SLC39A7对内质网应激状态下的OVCAR-3细胞凋亡的影响,Western blotting检测SLC39A7蛋白、内质网应激蛋白ATF4和CHOP及凋亡蛋白Cleaved-caspase-3的表达。双荧光素酶报告基因实验和Western blotting验证miR-128-3p和SLC39A7的靶向关系。结果TM处理可显著促进OVCAR-3细胞miR-128-3p的表达,抑制SLC39A7的表达。过表达miR-128-3p或敲减SLC39A7均可促进内质网应激状态下的卵巢癌细胞凋亡。SLC39A7是miR-128-3p的靶基因,miR-128-3p可负性调控SLC39A7的表达。过表达SLC39A7可部分逆转miR-128-3p对内质网应激状态下的卵巢癌细胞凋亡的影响。结论miR-128-3p通过靶向下调SLC39A7表达促进内质网应激诱导的卵巢癌细胞凋亡。