鸭TRPV6和SLC4A4基因SNPs对蛋壳品质的影响

试验旨在探究三穗鸭TRPV6基因和SLC4A4基因SNPs突变对蛋壳品质的影响,筛选出与蛋壳品质相关的分子标记。利用PCR扩增和直接测序法相结合的方法检测鸭TRPV6基因和SLC4A4基因的SNPs,并与蛋壳品质进行关联分析。结果显示:在TRPV6基因第2内含子发现的g.81465153 C>G和g.81465176A>G突变分别对蛋壳重和蛋重有显著影响,在第3外显子发现同义突变g.81465450 T>C;3个SNPs联合产生5种单倍型和7种双倍型,位点联合对蛋壳重有显著影响。在SLC4A4基因第24外显子发现同义突变位点g.15125097 C>T,在内含子25发现g.15132523 G>A突变对蛋形指数有极显著影响,在内含子26发现g.15135079G>A突变;3个SNPs联合产生4种单倍型和7种双倍型,位点联合对蛋壳重有极显著影响。2个基因聚合后6个SNPs联合产生8种单倍型和7种双倍型,位点联合对蛋壳重和蛋重均有显著影响。表明TRPV6基因和SLC4A4基因新发现的3个SNPs联合和2个基因的6个SNPs联合均对蛋重和蛋壳重有显著效应,可作为鸭蛋壳品质选择的遗传标记。

鸭产蛋循环中IP3R1、SLC4A4基因的组织表达及其对子宫Ca^(2+)浓度的影响

以三穗鸭为研究对象,于产蛋后0、2、5、16 h宰杀并采集各个组织,采用实时荧光定量PCR技术检测1型1,4,5-三磷酸肌醇受体(IP3R1)和碳酸氢钠协同转运蛋白(SLC4A4)基因在各组织中的表达水平,同时测定产蛋循环不同时期子宫的Ca^(2+)浓度,并进行相关分析.结果表明:0~2 h,IP3R1基因在子宫的表达量较低,5 h极显著增高(P<0.01),16 h达到最大值,差异极显著(P<0.01);16 h,IP3R1基因在肾脏、大肠的表达量极显著高于0~5 h(P<0.01);2 h,IP3R1基因在十二指肠的表达量极显著高于0、5、16 h(P<0.01),0 h的表达量极显著高于5、16 h(P<0.01);5 h,IP3R1基因在小肠的表达量显著低于0、2、16 h(P<0.05).16 h,SLC4A4基因在肾脏、大肠、子宫的表达量极显著高于0~5 h(P<0.01);2 h,SLC4A4基因在小肠的表达量显著高于0、5、16 h(P<0.05);0 h,SLC4A4基因在十二指肠的表达量极显著高于2~16 h(P<0.01).5 h,子宫的Ca^(2+)浓度极显著高于0~2 h(P<0.01),在16 h达到最大值,极显著高于0~5 h(P<0.01).0 h,肝脏IP3R1基因的表达量与子宫Ca^(2+)浓度呈显著正相关(P<0.05);5 h,胸肌IP3R1基因的表达量与子宫Ca^(2+)浓度呈显著负相关(P<0.05);16 h,小肠IP3R1基因的表达量与子宫Ca^(2+)浓度呈极显著负相关(P<0.01).5 h,脾脏SLC4A4基因的表达量与子宫Ca^(2+)浓度呈显著负相关(P<0.05);5 h,胰脏SLC4A4基因的表达量与子宫Ca^(2+)浓度呈极显著负相关(P<0.01).以上结果表明,鸭蛋壳形成过程中IP3R1、SLC4A4基因对子宫Ca^(2+)的转运具有一定的作用.

SLC2A1,SLC4A4以及ADCY5基因在大鼠牙胚发育中的表达研究

目的:探究SLC2A1、SLC4A4以及ADCY5基因在大鼠牙胚发育中的表达。方法:取E14.5 d(蕾状期)、E16.5 d(帽状期)、E18.5 d(钟状早期)的胚胎及P1 d(钟状晚期)、P7 d(硬组织形成期)的仔鼠,处死后分离牙胚;对E16.5 d、E18.5 d的牙胚样本进行RNA测序、差异基因分析及RT⁃qPCR检测;免疫组化染色、Western blot检测牙胚中SLC2A1、SLC4A4、ADCY5蛋白在各个时期的表达分布。结果:在E14.5 d,SLC2A1、SLC4A4、ADCY5主要在上皮细胞中表达。在E16.5 d和E18.5 d,SLC2A1主要在内/外釉上皮和星网状层中表达。SLC4A4、ADCY5主要在内/外釉上皮中表达。在P1 d,SLC2A1、SLC4A4、ADCY5主要在成釉细胞和成牙本质细胞中表达;另外SLC2A1也在星网状层中表达。在P7 d,SLC2A1和SLC4A4主要在成釉细胞和成牙本质细胞中表达;而ADCY5不表达。结论:SLC2A1、SLC4A4、ADCY5基因参与大鼠牙胚发育,且各个时期略有差异。

NBCe1 Na+-HCO3-cotransporter ablation causes reduced apoptosis following cardiac ischemia-reperfusion injury in vivo

AIM To investigate the hypothesis that cardiomyocytespecific loss of the electrogenic NBCe1 Na^+-HCO3^- cotransporter is cardioprotective during in vivo ischemiareperfusion(IR)injury.METHODS An NBCe1 (Slc4a4 gene) conditional knockout mouse(KO)model was prepared by gene targeting.Cardiovascular performance of wildtype (WT) and cardiac-specific NBCe1 KO mice was analyzed by intraventricular pressure measurements,and changes in cardiac gene expression were determined by RNA Seq analysis.Response to in vivo IR injury was analyzed after 30 min occlusion of the left anterior descending artery followed by 3 h of reperfusion. RESULTS Loss of NBCe1 in cardiac myocytes did not impair cardiac contractility or relaxation under basal conditions or in response toβ-adrenergic stimulation,and caused only limited changes in gene expression patterns,such as those for electrical excitability.However,following ischemia and reperfusion,KO heart sections exhibited significantly fewer apoptotic nuclei than WT sections.CONCLUSION These studies indicate that cardiac-specific loss of NBCe1 does not impair cardiovascular performance,causes only minimal changes in gene expression patterns,and protects against IR injury in vivo.

碱度胁迫对尼罗罗非鱼鳃离子细胞形态以及鳃、肾和肠中HCO3^-转运因子的影响

采用扫描电镜观察了不同碱度(0、2、4 g/L Na HCO_3)胁迫对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)鳃离子细胞形态变化的影响,并采用免疫组化技术观察了鳃、肾、肠中4个HCO_3^-转运因子碳酸酐酶(CAⅡ、CAⅣ)、碳酸氢钠协同转运载体(SLC4A4)、Cl^-/HCO_3^-离子交换体(SLC26A6)的阳性反应变化。扫描电镜结果表明,鳃离子细胞分布在鳃小片基部。根据其表面开孔形状和尺寸,可分为Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型和Ⅳ型4种亚型,各亚型离子细胞的开孔尺寸随碱度胁迫强度增高呈正比增大,Ⅲ型离子细胞开孔尺寸变化最明显(P<0.01);离子细胞总数目也随碱度升高而增加,Ⅲ型离子细胞数目上升最为显著(P<0.01)。免疫组化结果表明,在淡水、碱水组中,CAⅡ、CAⅣ、SLC4A4、SLC26A6在鳃小片基部和肾中均有阳性反应,且随着碱度升高,阳性反应增强,但在肠道中未观察到阳性反应。本研究结果初步表明,尼罗罗非鱼可通过鳃离子细胞形态和数量调节适应碱度变化,鳃和肾为主要应答调节器官。

Na^+/HCO_3-共转运体NBCe1的生理及病理学作用

维持机体的酸碱稳态对各项生理活动的有序进行具有根本性的意义,酸碱紊乱会导致一系列疾病。碳酸氢根(HCO3-)是机体中最重要的酸碱缓冲离子。SLC4家族的HCO3-跨膜转运体是机体最主要的HCO3-跨膜运输载体之一,在细胞的pH调控以及上皮细胞中HCO3-的吸收或分泌过程中起着非常重要的作用。SLC4家族的NBCe1(SLC4A4)是一个生电型的Na+/HCO3-共转运体,在各种组织中有着非常广泛的表达,具有极其重要的生理学作用。在肾脏近端肾小管中,NBCe1负责80%以上的HCO3-的重吸收,对于维持机体全局的酸碱平衡极其重要。人类的SLC4A4突变常导致严重的近端肾小管性酸中毒,且常伴有侏儒症、偏头疼、白内障、青光眼以及牙齿釉质发育异常等。本文对最近十多年来有关NBCe1的结构-功能关系、功能调控机制、NBCe1的生理及病理学作用机理等方面的研究进展进行综述与分析。

大鼠胚胎发育期NBC1在胰腺的表达与定位

目的:探讨碳酸氢钠协同转运载体(NBC1)在大鼠胰腺胚胎发育期不同阶段核酸、蛋白水平的动态变化以及在腺泡和β细胞的定位表达。方法:采用高密度寡核苷酸芯片对孕12.5 d(E12.5)、E15.5、E18.5、新生和成年胰腺进行基因转录水平分析,用RT-PCR和Western blot分别验证了NBC1核酸和蛋白在E15.5、E18.5、新生和成年时期胰腺中的表达情况,用Double fluorescence immunohistochemistry分析了NBC1在E18.5、新生和成年时期胰腺腺泡和β细胞的定位表达。结果:在大鼠胰腺胚胎发育过程中,NBC1核酸、蛋白在E18.5时特异高表达,新生下降直至成年最低;在腺泡基底侧膜和β细胞膜有强烈的阳性信号,且在成年胰腺中β细胞膜阳性信号较腺泡基底侧膜强。NBC1的表达变化与其功能近似基因的表达趋势相反,而与其协同发挥作用的基因及胰腺特异基因的表达趋势一致。结论:NBC1在胰腺发育过程中不仅与结构形成而且与功能发挥相关。