应用CRISPR/Cas9技术敲除SLC5A8基因对黑色素瘤的影响

目的:采用CRISPR/Cas9技术研究SLC5A8基因对肿瘤细胞的影响。方法:通过CRISPR/Cas9技术建立SLC5A8基因敲除模型,将C57小鼠分为两组各4只,分别为敲除SLC5A8基因负瘤鼠实验组(KO组)和普通负瘤鼠对照组(WT组)。对比两组的肿瘤时间-生长曲线、肿瘤体积、肿瘤重量及病理学改变。结果:与WT组相比,KO组黑色素瘤生长速度更快,肿瘤体积显著增大(t=7.845,P<0.01)。KO组肿瘤重量较WT组显著增加(t=3.804,P<0.01)。KO组小鼠肿瘤细胞表现出更深层次的异型性,细胞密度不均,结构复杂、形态多样,且存在大量炎细胞浸润。结论:敲除SLC5A8基因影响了C57负瘤鼠黑色素瘤细胞的发展,SLC5A8基因是黑色素瘤进展过程中的负调控因子。

SLC5A8基因敲除后皮下种植结肠癌细胞株的负瘤模型小鼠肿瘤微环境中T淋巴细胞亚群占比观察

目的观察SLC5A8基因敲除后皮下种植结肠癌细胞株MC-38的负瘤模型小鼠肿瘤微环境中T淋巴细胞亚群占比变化,为结肠癌基因治疗提供实验依据。方法应用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建SLC5A8基因敲除型C57BL/6小鼠,记为实验组。将普通C57BL/6小鼠记为对照组。将两组小鼠皮下种植结肠癌细胞株MC-38细胞悬液制备MC-38负瘤模型,制备成功后完整剥离肿瘤组织,采用流式细胞法测算各组小鼠结肠肿瘤微环境中T淋巴细胞亚群占比。结果实验组小鼠肿瘤微环境中CD3^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)T淋巴细胞、CD8^(+)T淋巴细胞占比分别为27.730%±2.861%、50.923%±4.823%、10.205%±1.234%,对照组小鼠肿瘤微环境中CD3^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)T淋巴细胞、CD8^(+)T淋巴细胞占比分别为40.790%±9.940%、58.355%±3.292%、22.950%±1.948%,两组相比,P均<0.05。结论与普通C57BL/6小鼠相比,SLC5A8基因敲除后皮下种植MC-38细胞的负瘤模型小鼠肿瘤微环境中CD3^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)T淋巴细胞、CD8^(+)T淋巴细胞占比均下降。

SLC5A8基因过表达的炎症性肠病细胞模型结构及IL-8、TGF-β_(1)表达变化观察

目的观察SLC5A8基因过表达后,脂多糖诱导的炎症性肠病细胞模型结构及白细胞介素(IL)-8、转化生长因子(TGF)-β_(1)水平变化。方法培养人正常结肠上皮细胞并分为对照组、模型组及实验组。对照组转染pcDNA3.1-GFP空载质粒;模型组转染pcDNA3.1-GFP空载质粒,并以100µg/mL的脂多糖刺激24 h;实验组转染过表达SLC5A8基因质粒,并以100µg/mL的脂多糖刺激24 h。透射电镜下观察三组结肠上皮细胞结构,采用RT-qPCR法检测三组细胞中的IL-8、TGF-β_(1)mRNA,采用ELISA法检测培养液上清中的IL-8、TGF-β_(1)。结果对照组细胞膜表面微绒毛无断裂,无脱落,紧密连接结构致密呈带状;模型组细胞膜表面微绒毛变稀疏,脱落,紧密连接的细胞间隙增宽;实验组细胞膜表面存在微绒毛脱落,紧密连接结构部分破坏。与对照组相比,模型组IL-8 mRNA表达及培养液上清中IL-8水平升高,TGF-β_(1)mRNA表达及培养液上清中TGF-β_(1)水平降低(P均<0.01);与模型组相比,实验组IL-8 mRNA表达及培养液上清中IL-8水平降低,TGF-β_(1)mRNA表达及培养液上清中TGF-β_(1)水平升高(P均<0.01)。结论SLC5A8基因过表达有助于维持炎症性肠病细胞模型的结构,抑制炎症细胞因子IL-8表达,促进抗炎细胞因子TGF-β_(1)表达,从而有助于减轻炎症性肠病的炎症反应。

抑癌基因SLC5A8在食管癌组织及血浆中的甲基化状态分析

目的:探讨食管癌组织中抑癌基因SLC5A8的甲基化状态和表达情况,以及食管癌术前和术后血浆中SLC5A8基因的甲基化状态。方法:采用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)法检测45例食管癌、癌旁、切缘组织及30例食管癌术前、术后血浆中SLC5A8基因的甲基化状态。RT-PCR法检测组织中SLC5A8基因表达情况。结果:45例食管癌、癌旁及切缘组织中SLC5A8基因的甲基化率分别为68.8%、11.1%和4.4%,癌组织的甲基化阳性率显著高于癌旁及切缘组织(P<0.01)。RT-PCR检测结果显示,31例SLC5A8甲基化阳性的食管癌标本中仅有2例SLC5A8基因阳性表达,14例甲基化阴性的标本中有10例检测到基因表达,差异具统计学意义(P<0.001)。30例术前、术后血浆中SLC5A8基因的甲基化率分别为43.3%及16.7%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:SLC5A8基因甲基化是食管癌发生的重要早期分子事件。血浆中SLC5A8基因甲基化检测可作为术前诊断的重要参考指标,并有可能成为监测治疗反应与判断预后的一项生物学指标。

SLC5A8基因在原发性肝癌组织中的表达及其与肝癌预后的关系

目的探讨SLC5A8蛋白在肝癌组织中的表达及其与肝癌预后的关系。方法选取石蜡包埋的肝癌、癌旁组织及正常肝组织标本各97例,采用免疫组化Elivision plus方法检测SLC5A8蛋白的表达情况,分析SLC5A8在不同病理状态下的表达,并结合术后随访资料,研究SLC5A8基因与肝癌预后的关系。结果 97例肝癌标本中, SLC5A8蛋白在肝癌组织中表达明显低于其在癌旁组织及正常肝组织中的表达(P<0.01)。其中,SLC5A8蛋白在肿瘤直径≤5 cm、组织分化程度良好/中等、无肝硬化、AFP≤400 ng/ml、肿瘤分级Ⅰ～Ⅱ级的肝癌组织中的表达分别高于肿瘤直径>5 cm、组织分化程度差、有肝硬化、AFP>400 ng/ml、肿瘤分级Ⅲ～Ⅳ级的肝癌,有统计学差异(P<0.05);而在不同年龄段、不同性别、不同HBsAg(阴性、阳性)的原发性肝癌中,SLC5A8蛋白的表达无统计学差异(P>0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析, SLC5A8高表达者预后比SLC5A8低表达者好,两者中位生存时间比较有统计学差异(P<0.001)。结论 SLC5A8基因表达降低或缺失在肝癌发生、发展中起到了一定的作用,合并肝硬化可能是肝癌发生的重要相关因素。SLC5A8蛋白高表达的患者术后生存时间相对较长,对原发性肝癌术后患者判断预后可能有一定的作用。

贲门癌高发区贲门癌组织SLC5A8基因甲基化检测

目的:探讨SLC5A8基因甲基化在贲门癌变过程中的作用。方法:采用甲基化特异性PCR法检测42例贲门腺癌及15例癌旁组织SLC5A8基因的甲基化,采用RT-PCR方法检测42例贲门癌组织SLC5A8基因表达水平。结果:42例GCA组织中有18例(43%)SLC5A8基因甲基化阳性。15例癌旁贲门组织中有2例(13%)甲基化阳性。癌组织的甲基化阳性率(43%)显著高于癌旁正常组织(13%)(P<0.01)。贲门癌组织SLC5A8基因甲基化状况与肿瘤分化程度,肿瘤体积,淋巴结转移情况和远处转移情况等临床病理因素均无相关性。18例SLC5A8基因甲基化阳性标本中仅有3例(17%)检测到SLC5A8基因的表达;而24例SLC5A8基因甲基化阴性标本中有10例(42%)检测到SLC5A8基因的表达;SLC5A8基因甲基化阳性的贲门癌组织中SLC5A8基因表达率显著低于甲基化阴性的贲门癌组织的发生率(P<0.05)。结论:SLC5A8基因甲基化是GCA癌变过程中的重要分子事件,是SLC5A8基因失活的重要机制之一。

宫颈癌SLC5A8基因甲基化与高危型HPV的相关性研究

目的:研究宫颈鳞癌组织中SLC5A8基因甲基化状态,以及SLC5A8基因甲基化与高危型HPV的相关性。方法:随机选取2017年1月至2020年6月于湖北医药学院附属东风医院妇科住院患者共77例,术前均行HPV核酸分型检测。收集宫颈鳞状细胞癌石蜡标本36例(其中31例合并高危型HPV阳性、5例高危型HPV阴性)。收集慢性宫颈炎石蜡标本41例(其中31例合并高危型HPV阳性、10例高危型HPV阴性)。采用甲基化特异性PCR检测SLC5A8基因的甲基化状态。结果:宫颈鳞癌组中共检测到30例(83.3%)发生SLC5A8基因甲基化,宫颈炎组中检测到6例(14.6%)发生SLC5A8基因甲基化,宫颈鳞癌组的基因甲基化阳性率显著高于宫颈炎组(P<0.05)。在宫颈鳞癌组中,31例高危型HPV阳性标本中检测到28例(90.3%)发生SLC5A8基因甲基化,5例高危型HPV阴性标本中检测到2例(40%)发生SLC5A8基因甲基化,高危型HPV阳性的标本SLC5A8基因甲基化显著高于高危型HPV阴性的标本(P<0.05)。在宫颈炎组中,31例高危型HPV阳性标本中有3例(9.6%)发生SLC5A8甲基化,10例高危型HPV阴性标本中有3例(30%)发生SLC5A8甲基化,二者的SLC5A8基因甲基化差异无统计学意义(P>0.05)。结论:SLC5A8基因甲基化水平升高与宫颈鳞癌有相关性。宫颈鳞癌组织中,SLC5A8基因甲基化水平升高与高危型HPV有相关性。

结直肠癌与抑癌基因SLC5A8甲基化的相关性

目的探讨结直肠癌组织中SLC5A8基因mRNA转录水平及其甲基化状态。方法分别采用实时荧光定量PCR法及甲基化特异性PCR法(MSP)检测40例结直肠癌组织、癌旁组织SLC5A8基因mRNA转录水平及其甲基化水平。结果 SLC5A8基因在结直肠癌组织中mRNA转录水平显著低于癌旁组织(χ~2=16.241,P<0.05);结直肠癌组织中SLC5A8基因甲基化阳性率显著高于癌旁组织(χ~2=32237,P<0.05);该基因的mRNA转录水平与其甲基化状态呈负相关,相关系数为0.875。结论 SLC5A8基因甲基化能显著降低该基因的表达,与结直肠癌的发生可能存在一定关联。

乳腺癌中SLC5A8基因的甲基化及转录水平

目的研究SLC5A8基因在乳腺癌中的甲基化及转录水平。方法将2017年5月至2019年12月河北大学附属医院基本外科的32例乳腺癌患者经手术治疗的肿瘤标本及癌旁正常组织标本分为2组,分别为实验组和对照组。采用甲基化特异性PCR法检测32例乳腺癌及乳腺癌周围正常组织SLC5A8基因甲基化,运用RT-PCR法检测32例乳腺癌组织SLC5A8基因的转录表达水平情况。结果实验组32例乳腺癌组织SLC5A8基因甲基化阳性20例(62.50%),对照组32例癌旁组织SLC5A8基因甲基化阳性7例(21.87%)。实验组的甲基化阳性率显著高于对照组(P<0.05)。实验组甲基化阳性的20例乳腺癌组织中检测到基因mRNA转录表达的有6例(30.00%)。实验组甲基化阴性的12例癌组织中检测到基因mRNA转录表达的有7例(58.33%)。实验组中甲基化阳性的癌组织基因转录表达率较甲基化阴性的癌组织基因转录表达率显著降低(P<0.05)。结论SLC5A8基因甲基化是乳腺癌中普遍存在的一种现象,可能参与乳腺癌的演变过程,并且乳腺癌组织SLC5A8基因甲基化与基因的转录表达不是完全一致的,二者具有一定的反向一致性。

宫颈病变组织中高危型乳头瘤病毒感染及SLC5A8、RASSF2A基因启动子甲基化阳性率

目的:探究高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染及SLC5A8基因、RASSF2A基因启动子甲基化在宫颈病变中的变化。方法:收集本院2018年5月-2021年5月收治的186例宫颈病变患者临床资料,根据阴道镜宫颈活检病理诊断结果,分为宫颈上皮内瘤变I级组(n=73)、宫颈上皮内瘤变II级组(n=57)和III级组(n=56),同时收集正常细胞43份作为对照组(n=43)。检测4组标本HPV DNA、SLC5A8以及RASSF2A基因启动子甲基化阳性率。结果:对照组、宫颈上皮内瘤变I级、II级、III级组标本HPV DNA(0、28.8%、63.2%、92.9%)、SLC5A8(0、30.1%、66.7%、89.3%)以及RASSF2A(0、13.7%、49.1%、82.1%)基因启动子甲基化阳性率依次升高(均P<0.05)。结论:高危型HPV感染及SLC5A8、RASSF2A基因启动子甲基化在宫颈病变组织中异常升高,并随病情发展而增加。

SLC5A8 CpG岛甲基化与肝癌临床病理特征及预后的关系

目的:探讨SLC5A8 CpG岛甲基化与肝细胞肝癌临床病理特征及预后的关系。方法:采用甲基化特异性PCR检测85例肝癌组织及癌旁组织中SLC5A8 CpG岛甲基化情况,分析SLC5A8 CpG岛甲基化与肝癌临床病理特征的关系,比较SLC5A8 CpG岛甲基化与未甲基化肝癌患者术后5年生存率,分析肝癌患者预后的影响因素。结果:肝癌组织SLC5A8 CpG岛甲基化阳性率为61.2%,高于癌旁组织的36.5%,差异有统计学意义(P<0.05)。SLC5A8 CpG岛甲基化与肝癌肿瘤直径、组织分化、TNM分期及血清AFP有关,差异均有统计学意义(P<0.05),而与年龄、性别、HBsAg是否阳性无关,差异均无统计意义(P<0.05)。SLC5A8 CpG岛甲基化组患者5年生存率26.2%,低于阴性组的49.1%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:SLC5A8 CpG岛甲基化在肝癌发生、发展中扮演重要角色,可作为判断肝癌患者预后的独立预测因子。

SLC5A8基因转录沉默与乳腺癌

目的 探讨乳腺癌发生过程中的SLC5A8基因转录沉默现象.方法 回顾性分析2014年6月-2015年6月河北大学附属医院基本外科收治的32例乳腺癌患者的病例资料,分析术中采集的乳腺癌组织及癌旁组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测两组标本中SLC5A8基因的转录水平.应用配对t检验和x2检验的方法分析结果.结果 癌组织SLC5A8基因mRNA转录水平显著低于癌旁组织(P＜0.05).乳腺癌组织中有20例(62.5％) SLC5A8基因无转录产物.癌旁组织标本中仅有4例(12.5％) SLC5A8无基因转录产物.癌组织的SLC5A8的失活率显著高于癌旁组织(P＜0.05).结论 SLC5A8基因转录沉默是乳腺癌发生过程中的重要事件.

新肿瘤抑制基因SLC5A8研究进展

目前研究认为，SLC5A8是一种新的候选肿瘤抑制基因，在人类的甲状腺癌、食管癌、胃癌、结肠癌和急性髓系白血病中表达降低或缺失。该基因位于人类染色体12q13—23编码蛋白，属于Na^＋／葡萄糖共转运蛋白家族成员，是Na^＋耦联的转运短链脂肪酸、乳酸、烟酸和碘化物的载体。其外显子1的GPG岛的甲基化及组蛋白去乙酰化可使SLC5A8基因表达沉默，促进肿瘤的发生。SLC5A8表达的转运体的所有底物中，丁酸、丙酸和丙酮酸的功能是作为组蛋白脱乙酰基酶抑制剂，它们可以介导多种肿瘤细胞的凋亡，可能为其抑制肿瘤的机制。

SLC5A8基因甲基化与甲状腺肿瘤临床特征及预后相关性的分析

目的探讨SLC5A8基因甲基化与甲状腺肿瘤临床病例特征及预后的关系。方法选取甲状腺癌、甲状腺腺瘤、癌旁组织及正常甲状腺组织标本各100例,采用甲基化特异性PCR检测组织中SLC5A8基因甲基化及mRNA转录水平,了解SLC5A8基因甲基化与甲状腺肿瘤临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线并建立Cox比例风险回归模型,对术后2年复发风险进行评估。结果甲状腺癌组织及甲状腺腺瘤组织SLC5A8基因甲基化阳性率分别为79%和66%,均显著高于癌旁组织及正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。SLC5A8基因甲基化与甲状腺肿瘤患者包膜侵犯、甲状腺结合球蛋白(TG)水平、胆固醇水平、术前甲状腺功能、淋巴结转移及TNM分级等因素有关,差异有统计学意义(P<0.05)。此外,SLC5A8甲基化、包膜侵犯、TG水平、淋巴结转移及TNM分级等因素为甲状腺肿瘤患者预后的影响因素。SLC5A8基因甲基化阳性患者术后2年复发率(25.67%)显著高于阴性患者(10.20%),差异有统计学意义(P<0.001)。结论SLC5A8基因甲基化有望作为甲状腺肿瘤预后判断的生物标志物。

新肿瘤抑制基因SLC5A8在结直肠癌组织中mRNA转录水平的研究

目的 分析新肿瘤抑制基因SLC5A8在结直肠癌组织中mRNA的转录水平.方法 收集23例结直肠癌患者标本,分别切取癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术检测基因SLC5 A8的mRNA转录水平,并对癌组织和癌旁组织的结果进行t检验分析.结果 结直肠癌组织中SLC5 A8基因的mRNA转录水平显著低于癌旁组织（P=0.002）.结论 SLC5A8基因在结直肠癌组织中表达下降或缺失,提示其与结直肠癌的发生存在一定关系.

短链脂肪酸对亚急性瘤胃酸中毒的影响和钠离子耦合单羧酸转运蛋白1和氢离子耦合单羧酸转运蛋白1对短链脂肪酸的转运机制

高精料饲粮在反刍动物瘤胃内经微生物发酵可产生大量短链脂肪酸(SCFA),使瘤胃内环境处于低pH状态,因此引起反刍动物亚急性瘤胃酸中毒(SARA)。在SARA发生时,SCFA不仅参与瘤胃上皮的糖、脂和能量代谢,还在维持黏膜屏障和减轻炎性反应等方面发挥重要调节作用,而单羧酸转运蛋白中的钠离子耦合单羧酸转运蛋白1(SLC5A8)与氢离子耦合单羧酸转运蛋白1(MCT1)负责瘤胃上皮内SCFA的转运与吸收,对于探究反刍动物发生SARA时,SLC5A8与MCT1基因的表达在SCFA转运机理上有重要意义。本文主要对SARA的定义、SCFA的调控机制以及SLC5A8、MCT1基因的表达与转运机制进行综述。

脑肿瘤

脑胶质瘤中SLC5A8和TMS1／ASC基因启动子区甲基化及mRNA表达的研究;神经上皮来源脑肿瘤中肿瘤干细胞的分离培养与鉴定;颅鼻眶联合入路切除筛窦恶性肿瘤;应用神经内镜治疗鞍上池囊肿42例;

结直肠癌与溶质载体家族第5家族8基因甲基化相关性研究

目的研究结直肠癌组织中溶质载体家族第5家族8(SLC5A8)基因甲基化现象。方法采集结直肠癌患者标本中的癌组织、癌旁组织和正常组织,应用甲基化特异性聚合酶链式反应(PCR)法检测SLC5A8基因甲基化水平。结果结直肠癌组织、癌旁组织及正常组织中SLC5A8基因甲基化率,差异有统计学意义(P<0.05),其中结直肠癌组织中SLC5A8基因甲基化阳性率与癌旁组织及正常组织之间差异有统计学意义(P<0.05)。SLC5A8的表达与其甲基化状态成负相关(r=-0.682)。结论 SLC5A8基因的甲基化是结直肠癌发生过程中的重要事件,与其发生、发展可能存在密切关联。

新肿瘤抑制基因溶质载体家族5成员8在结直肠癌组织中的表达及甲基化研究

溶质载体家族5成员8（SLC5A8）是一种新的候选肿瘤抑制基因,2002年由Rodriguez等发现,并且从人肾cDNA文库中克隆鉴定的编码610个氨基酸,认为是溶质载体家族5（SLC5）的第8个成员,被命名为SLC5A8,该基因位于人类染色体的12q13-23,编码蛋白属于钠离子/葡萄糖共转运蛋白家族成员[1].本研究旨在探讨SLC5A8基因在结直肠癌患者肿瘤组织中的表达及甲基化水平.

大肠癌组织中溶质转运体家族5成员8基因甲基化状态的研究

溶质转运体家族5成员8（SLC5A8）作为新的候选抑癌基因，位于人染色体12q13，属于Na＋／葡萄糖共转运蛋白家族成员。SLC5A8基因在多种肿瘤中沉默，提示与肿瘤的发生有关川。本研究旨在研究大肠癌组织中SLC5A8基因甲基化与其表达之间的关系，探讨其作用机制。