ABCB1(2677T>G)和SLCO1B1(521T>C)基因多态性对阿托伐他汀降脂疗效的影响

目的:探讨新乡地区人群ABCB1(2677T>G)、SLCO1B1(521T>C)基因多态性分布及其与阿托伐他汀降脂疗效的相关性。方法:采用荧光原位杂交方法,检测120例血脂异常患者ABCB1(2677T>G)、SLCO1B1(521T>C)基因型分布;入选患者每晚服用阿托伐他汀20 mg,连续用药4周后,检测用药前后血脂水平,评价降脂疗效。结果:在新乡市中心医院的120例入选患者中,ABCB1(2677T>G)和SLCO1B1(521T>C)基因突变频率分别为70.5%和21.8%,该基因分布符合Hardy-Weinberg平衡。携带ABCB1 2677GG型患者对LDL-C的调节作用显著高于同一位点的其他基因型,而其他血脂指标未见相关性。SLCO1B1(521T>C)各基因型患者间血脂变化差异无统计学意义。结论:携带ABCB1 2677GG基因型的患者接受阿托伐他汀治疗时,降脂疗效较佳。

不同剂量链脲佐菌素诱导C57BL/6小鼠1型糖尿病模型的复制与iNKT细胞的检测

目的腹腔注射不同剂量链脲佐菌素(STZ)于雌性C57BL/6小鼠,诱导建立与人类1型糖尿病相似的动物模型,研究最适链脲佐菌素(STZ)建模剂量。方法 35只雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(n=5)和模型一、二、三组(STZ剂量分别为40、50和60 mg/kg),每组10只。模型组连续5 d腹腔注射不同剂量STZ,测定注射前、注射后1、2、3、4和5周的空腹血糖和体重,小鼠胰岛素自身抗体(IAA)阳性率,观察小鼠饮食、饮水和排尿情况。流式细胞技术(FACS)分析血和脾细胞悬液中恒定自然杀伤T细胞(i NKT)细胞比例;HE染色观察胰岛病理。结果与对照组比较,模型三组饮水量、进食量和排尿量增加,体重减轻。与对照组比较,模型三组血糖变化明显,注射STZ后第1周迅速升高,第4周达高峰,随后下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,模型组3组胰岛萎缩,胰岛细胞不规则,数目减少。模型二组和模型三组IAA阳性率分别达到30%和90%。与对照组比较,模型三组外周血CD4+NK1.1+淋巴细胞和脾CD4+NK1.1+淋巴细胞比例减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论诱导建立雌性C57BL/6小鼠1型糖尿病模型的最适STZ剂量为60 mg/kg。

广东地区汉族人群OATP1B1 521T>C基因多态性对冠心病及血脂水平的影响

目的:探讨广东地区汉族人群有机阴离子转运多肽1B1(OATP1B1)521T>C与冠心病及血脂水平的相关性。方法:采用实时荧光定量Taq Man-MGB探针法,检测288例冠心病患者和267例对照组患者OATP1B1 521T>C的基因型,将其检测结果与DNA测序结果进行比较,并按常规方法测定、比较和分析突变基因型者和野生基因型者的血脂。结果:冠心病组OATP1B1521T>C的T/C基因型频率明显低于对照组(17%vs 25%,P<0.05),且OATP1B1 521T>C的C等位基因频率明显低于对照组(10%vs 18%,P<0.05),而Logistic回归分析法对影响冠心病的相关因素进行回归分析,亦显示OATP1B1 521T>C与冠心病有相关性(P<0.05)。且野生型OATP1B1 521T>C基因型者较突变型OATP1B1 521T>C基因型者胆固醇水平较低,甘油三酯差异无统计学意义。结论:OATP1B1 521T>C基因多态性与冠心病及高胆固醇血症的发生可能相关。

骨形态构建蛋白2型受体下调单核细胞趋化蛋白1/CC类趋化因子受体2通路对哮喘小鼠气道炎症和Th1/Th2平衡的影响

目的探究骨形态构建蛋白2型受体(BMPR2)对小鼠哮喘模型气道炎症和Th1/Th2平衡的影响及其机制。方法于2021年9月至2022年11月选用24只C57BL/6小鼠尾静脉注射BMPR2腺病毒,随后卵清蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘小鼠模型;采用随机数字表法分为对照组(生理盐水替代OVA造模)、OVA模型组(OVA诱导小鼠哮喘模型)、OVA+载体(Vector)组(空载慢病毒处理的OVA哮喘模型小鼠)、OVA+BMPR2组(BMPR2过表达慢病毒处理的OVA哮喘模型小鼠),每组6只。收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织。免疫组织化学检测肺组织BMPR2表达水平;苏木精-伊红染色观察肺组织病理学改变;瑞氏染色后计数BALF中各类炎症细胞数目;酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测BALF中白细胞介素(IL)-4,IL-5和IL-13炎症因子水平;蛋白质印迹法检测肺组织和气道上皮细胞16HBE中BMPR2、单核细胞趋化蛋白-1(MCP1)及其受体CC类趋化因子受体2(CCR2)蛋白表达水平。免疫共沉淀实验检测BMPR2与MCP1相互作用。结果与对照组相比,OVA模型组肺组织BMPR2(0.36±0.05比1.04±0.04)显著降低(P<0.01);小鼠肺泡破坏程度严重,肺组织有大量的淋巴细胞浸润;BALF中炎症细胞总数[(93.25±9.32)×10^(4)个/毫升比(4.79±0.41)×10^(4)个/毫升,P<0.001]、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞均升高;Th1相关炎症因子γ干扰素(IFN-γ)水平降低,Th2相关炎症因子IL-4,IL-5和IL-13水平升高。过表达BMPR2可降低肺泡破坏程度和淋巴细胞浸润程度。与OVA+Vector组相比,OVA+BMPR2组BALF中炎症细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞均降低;ELISA结果表明,OVA+BMPR2组BALF中IFN-γ水平升高,IL-4,IL-5和IL-13水平降低,提示过表达BMPR2可上调Th1百分比,下调Th2细胞百分比。进一步研究表明,BMPR2过表达显著下调了MCP1及其受体CCR2的表达水平,且BMPR2与MCP1存在相互作用。结论BMPR2可通过下调MCP1/CCR2通路降低哮喘小鼠气道炎症,并调节Th1/Th2平衡。

6种药物对有机阴离子转运多肽OATP1B1及其基因多态性A388G、T521C转运作用的影响

目的研究6种药物对有机阴离子转运多肽OATP1B1及其基因多态性A388G、T521C转运作用的影响。方法体外培养稳定高表达OATP1B1和OATP1B1基因多态性A388G、T521C的人胚肾细胞(HEK293)株,高表达空白载体(Mock)的HEK293细胞为空白对照,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各转运体细胞中mRNA表达;放射性标记化合物3Hestrone sulfate作为转运底物、利福平作为阳性抑制剂验证各高表达细胞的转运活性;测定30μmol·L^(-1)的达比加群、辛伐他汀、替格瑞洛、卡培他滨、多西他赛、依那普利对各细胞3H-estrone sulfate摄入活性的抑制作用,并依据抑制试验结果,进一步测定辛伐他汀、替格瑞洛、多西他赛对转运体细胞的半数抑制浓度(IC_(50))。结果HEK293细胞内导入的各种转运体基因都呈现良好的复制表达;OATP1B1、OATP1B1/A388G、OATP1B1/T521C对底物3H-estrone sulfate(5μmol·L^(-1))的转运活性分别为Mock细胞的39、49和48倍,30μmol·L^(-1)利福平添加后,可将细胞的转运活性抑制到50%以下;辛伐他汀、替格瑞洛、多西他赛对OATP1B1的抑制作用较强,30μmol·L^(-1)给药的转运活性分别为对照组的(40.09±1.95)%、(33.82±0.61)%、(45.08±0.22)%;辛伐他汀对OATP1B1、OATP1B1/A388G、OATP1B1/T521C的IC_(50)分别为14.2、>100、>100μmol·L^(-1),替格瑞洛的IC_(50)分别为19.1、68.4、>100μmol·L^(-1),多西他赛的IC_(50)分别为17.6、22.9、19.3μmol·L^(-1)。结论OATP1B1基因多态性在一定程度上改变了抑制剂对转运体活性的影响程度。

ResolvinE1对高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用

背景 以往防治角膜移植术后排斥反应的药物存在诱发局部或全身不良反应的风险，研究表明resolvinE1（RvE1）能够调节辅助性T细胞1（Th1）型免疫反应，但其对高危角膜移植术后的植片排斥反应有无抑制作用尚不清楚。目的观察高危角膜移植动物模型局部应用RvE1对植片免疫排斥反应的抑制作用。方法 以BALB/c小鼠为受体、C57BL/6小鼠为供体行角膜移植术。采用随机数字表法将90只BALB/c小鼠随机分成异体角膜移植组、异体角膜移植＋RvE1组和自体角膜移植组，每组各30只。BALB/c小鼠右眼先用缝线法刺激2周以建立高危角膜移植眼模型，然后行穿透角膜移植术。异体角膜移植组和异体角膜移植＋RvE1组小鼠右眼行异体角膜移植，自体角膜移植组小鼠将右眼角膜植片旋转180°后缝合于植床上。异体角膜移植组及自体角膜移植组小鼠术后每日用生理盐水10 μl结膜下注射1次，异体角膜移植＋RvE1组小鼠术后同法注射终质量浓度为0.1 μg/μl的RvE1 10 μl，连续7 d。术后裂隙灯显微镜下观察小鼠角膜植片反应并对其排斥反应进行评分。术后21 d处死各组小鼠各20只，收集小鼠术眼角膜、眼球和术眼侧颈部淋巴结，采用苏木精－伊红染色法观察各组小鼠角膜植片的组织病理学变化；采用免疫组织化学法检测术眼角膜中CD4及γ干扰素（IFN-γ）的表达；采用流式细胞术检测术眼侧颈部淋巴结淋巴细胞中Th1细胞（CD3＋CD8a－IFN-γ＋）比例；采用荧光定量PCR法检测Th1细胞相关因子白细胞介素-2（IL-2）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IFN-γ及T-bet mRNA的相对表达水平。结果 异体角膜移植＋RvE1组小鼠角膜植片存活时间为（28.5±1.7）d，明显长于异体角膜移植组的（14.0±1.6）d，差异有统计学意义（t＝4.14，P〈0.001），自体角膜移植组小鼠植片在术后50 d存活率为100%。苏木精－伊红染色显示，异体角膜移植＋RvE1组和自体角膜移植组小鼠角膜植片水肿及炎性细胞浸润程度均轻于异体角膜移植组。免疫组织化学法检测显示，各组角膜全层均有CD4表达，而IFN-γ主要表达于角膜上皮层，异体角膜移植组小鼠角膜组织中CD4和IFN-γ阳性细胞数均明显多于异体角膜移植＋RvE1组和自体角膜移植组。流式细胞术检测显示，异体角膜移植＋RvE1组和自体角膜移植组小鼠淋巴细胞中Th1细胞比例分别为（1.07±0.25）%和（0.85±0.12）%，明显低于异体角膜移植组的（1.56±0.20）%，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。荧光定量PCR检测显示，异体角膜移植组小鼠角膜中IL-2、TNF-α、IFN-γ及T-bet mRNA的相对表达量明显高于异体角膜移植＋RvE1组和自体角膜移植组，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论 RvE1可抑制小鼠高危角膜移植排斥反应，作用机制可能与其下调角膜植片和淋巴细胞中Th1细胞及相关细胞因子的表达有关。

正常C57BL/6小鼠钆塞酸二钠增强磁共振检查T1弛豫值特征及肝细胞膜表面有机阴离子转运系统和多耐药蛋白载体的表达水平

目的定量研究正常C57BL/6小鼠钆塞酸二钠增强磁共振检查T1弛豫值特征及肝细胞膜表面相关有机阴离子转运系统(OATP)和多耐药蛋白载体(MRP)的表达水平,用于进一步肝功能的评价。方法10只6周龄正常C57BL/6小鼠纳入研究,行钆塞酸二钠增强磁共振动态检查,并在对比剂注射前及注射后20min(肝胆特异期)获得纵向弛豫时间图。测量计算肝实质的钆塞酸二钠增强前后的T1弛豫时间、T1弛豫时间下降率(△T)以及首过快速上升期中的增强斜率百分比。肝实质标本行蛋白质印迹法检测,记录OATP1、MRP2、MRP3值。统计结果用平均值表示。结果10只正常C57BL/6小鼠增强前T1弛豫时间平均值为(659.13±24.07)ms,增强后T1弛豫时间平均值较增强前缩短,为(408.87±27.21)ms;T1弛豫时间下降率平均值为37.12%±4.95%;首过快速上升期中的增强斜率百分比为4.14%±0.96%。10只正常C57BL/6小鼠OATP1的值为29952.1±11475.2、MRP2的值为34376.4±33228.4及MRP3的为357308.9±64646.5。结论明确正常C57BL/6小鼠钆塞酸二钠增强磁共振检查增强前后T1弛豫值、T1弛豫值的下降率、首过快速上升期中的增强斜率百分比,以及肝细胞膜上分子水平OATP1、MRP2、MRP3的定量值,有助于与肝损伤模型做对照研究。

有机阴离子转运多肽1B1 521T〉C基因多态性与原发性高血压的相关性

目的探讨有机阴离子转运多肽181（OATP1B1）521T〉C与原发性高血压的相关性。方法采用实时荧光定量TaqMan—MGB探针法，检测164例原发性高血压患者和159例非高血压对照者OATP1B1521T〉C的基因型，并将其检测结果与DNA测序结果进行比较。结果高血压组OATP1BI521T〉c的T／C基因型频率明显低于对照组（16％、25％，P〈0．05），且OATP1B1521T〉C的c等位基因频率明显低于对照组（10％、17％，P〈0．05），而Logistic回归分析法对影响高血压的相关因素进行回归分析，亦显示OATP1B1521T〉C基因多态性与高血压有相关性（P〈0．05）。结论SLC01BI的521T〉C突变为中国原发性高血压人群中的常见突变，在原发性高血压人群和血压正常人群之间的分布有差异；SLC0181的52IT〉C突变与原发性高血压的发病之间可能具有相关性。

蕨菜提取物抗肥胖作用及其机制

研究蕨菜对3T3-L1前脂肪细胞分化和高脂饮食诱导C57BL/6J小鼠肥胖的抑制作用,初步探讨其作用机制。培养3T3-L1前脂肪细胞并诱导其分化,油红O染色比色分析蕨菜乙醇提取物(PAE)对其分化程度的影响,Western blot法检测其对脂肪细胞分化转录调控因子(PPARγ、CEBPα、SREBP-1c)与脂质合成相关基因(FAS、ACC)的表达水平。以高脂饮食6周建立C57BL/6J肥胖小鼠模型,将诱导成功的肥胖小鼠分为高脂对照组(HFD)、1%蕨菜乙醇提取物组(HFD+PAE),另设立正常饲料喂养的C57BL/6J小鼠为正常组(ND)。继续喂养8周后测定各组小鼠体质量,评价其脂代谢状况(甘油三酯、胆固醇)及糖代谢情况(血糖、葡萄糖耐量)。结果显示,PAE能显著抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,减少细胞中脂质的沉积。PAE显著影响脂肪细胞分化过程中细胞分化转录调控因子PPARγ、CEBPα、SREBP-1c的蛋白表达(P<0.05),同时降低脂质合成相关基因FAS、ACC的表达(P<0.05)。经过高脂饮食诱导C57BL/6J肥胖小鼠体质量增加,体脂沉积显著,血糖、血脂水平明显高于ND组(P<0.05)。PAE干预后,小鼠体质量、甘油三酯、血糖水平均较HFD明显降低(P<0.05),葡萄糖耐量也得到显著改善(P<0.05)。蕨菜乙醇提取物抑制了3T3-L1脂肪细胞分化,改善了肥胖小鼠体质量,消除了高血脂和高血糖异常,修复了葡萄糖耐量,这一作用可能与其调控脂肪细胞分化转录调控因子和脂质合成相关基因等密切相关。

急性肺损伤辅助性T细胞1和辅助性T细胞17失衡的研究

本研究旨在探讨急性肺损伤（ALI）时肺组织辅助性T细胞（Th）失衡变化及意义. 一、材料与方法 1.材料：C57BL/6小鼠24只（体质量18～22g）,由南京军区总医院实验动物中心提供.脂多糖（LPS）和胶原酶V购自Sigma-Aldrich公司.小鼠白细胞介素（IL）-6、γ-干扰素（IFN-γ）、IL-4和IL-17酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒购自上海依科赛生物有限公司.实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）试剂盒RNAisoTM Plus、PrimeScriptTM RT reagent试剂盒、SYBR（R） Premix Ex TaqTM和PCR引物购自宝生物工程有限公司.

鞘氨醇1-磷酸盐受体拮抗剂(FTY720)对咪喹莫特诱导的银屑病样小鼠模型皮肤中γδT细胞的作用研究

目的研究鞘氨醇1-磷酸盐受体拮抗剂(FTY720)对银屑病样小鼠模型的治疗效应及分子机制。方法8只SPF级雌性C57BL/6小鼠,每只耳朵涂抹咪喹莫特10mg/d,连续涂7d。实验组3只于第2、4、6天腹腔注射FTY720,对照组5只注射磷酸盐缓冲液。每天测量小鼠耳皮肤厚度,于第8天处死小鼠,观察耳皮肤组织学改变。取耳组织及颈部引流淋巴结细胞,流式细胞仪分析分泌白细胞介素(IL)17γδT细胞在两组小鼠皮肤及引流淋巴结组织中的比例变化,γδT细胞表面鞘氨醇1-磷酸盐受体KS1P1)及皮肤淋巴细胞抗原(CLA)表达情况。两独立样本均数比较采用t检验。结果咪座莫特涂抹2 d后,于第3天测量两组小鼠耳厚度,实验组小鼠耳厚度(0.217 mm ± 0.003 mm)低于对照组(0.232 μm ± 0.002 mm,t= 4.23,P < 0.01),直至用药7 d后,于第8天处死小鼠,实验组小鼠耳厚度均低于对照组(均P < 0.01)。耳皮肤组织病理显示,实验组小鼠耳组织表皮厚度(18.62 μm ±0.19 μm)低于对照组(27.79 μm± 1.58 μm,(= 4.35,P< 0.01);免疫荧光染色显示,实验组小鼠耳组织中性粒细胞浸润程度低于对照组。流式细胞仪检测耳组织显示,实验组中性粒细胞比例(1.57%±0.12%)低于对照组(3.03%±0.33%,t = 3.31,P= 0.016)。耳皮肤组织中,实验组γδT细胞、IL-17+γδT细胞比例(4.88%± 0.42%,40.53%± 1.76%)均低于对照组(9.45%± 1.22%.56.56%± 0.66%,t值分别为2.75、10.27, P < 0.05)。引流淋巴结中,实验组细胞、IL- 17γδT细胞比例亦高于对照组(t值分别为5.781、4.140,P< 0.05)。引流淋巴结中,实验组γδT细胞S1P1及CLA的荧光强度均低于对照组(P<0.05)。结论FTY720可通过下调γδT细胞S1P1及CLA的表达,使引流淋巴结中细胞的比例升高而降低其在皮肤中的比例,减少皮肤组织IL-17的产生,从而缓解由咪喹莫特诱导的小鼠银屑病。