利用一步克隆方法快速高效构建Gateway入门载体

Gateway技术是一种非常便捷的载体构建方法,但目前构建入门克隆的方法成本较高,且存在一定的局限性.利用限制酶Eco RⅠ对pCR8-AtS5H入门克隆进行单酶切,获得入门载体pCR8片段,然后利用不依赖序列和连接的一步克隆方法(one-step sequence-and ligation-independent cloning,One-SLIC)将纯化后水稻异分支酸合成酶基因的启动子(ICS1 pro)片段连接至pCR8入门载体,并通过菌落PCR和测序方法鉴定得到阳性入门克隆,最后通过LR重组反应将ICS1 pro片段转移至Gateway目的载体pMDC163上.这种利用One-SLIC法快速高效构建入门克隆的方法操作简便,成功率高且成本低,是一种具有广泛应用前景的Gateway入门载体构建方法.