粉防己碱对VSMC表型转化和p38及MKP-1表达的影响

研究粉防己碱(tetrandrine,Tet)抑制内膜损伤后血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化和对p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)及丝裂原激活蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)表达的影响。采用HE染色检测28 d假损伤组(S组)、损伤组(I组)和损伤+Tet治疗组(Tet组)血管形态学改变;分别使用免疫组化、Western blot和RT-PCR技术检测I组和Tet组7、14、28 d增殖细胞核抗原(PCNA)、平滑肌α-肌动蛋白(SMα-actin)、p38 MAPK和MKP-1表达的变化。结果为:①28天S组血管壁各层结构完整;I组新生内膜(NI)面积显著增加,管腔面积(LA)显著缩小;Tet组NI增殖较I组明显减轻,LA增加。②损伤后7 d,Tet组与I组之间血管壁SMα-actin、PCNA、p38 MAPK和MKP-1表达基本一致,NI增殖程度亦基本相同。Tet组14和28 d,血管壁中PCNA和p38 MAPK表达均低于I组;而MKP-1表达均高于I组;14、28 d SMα-actin表达均略高于I组。因此Tet可不同程度地拮抗内膜损伤后P38MAPK信号转导途径及其调节,抑制VSMC表型转化,继而减缓NI增殖。

组织块贴壁法和混合酶消化法分离原代血管平滑肌细胞的表型特征比较

目的:探究组织块贴壁法、混合酶消化法分离培养的原代大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)在形态、生长、表型特征蛋白表达方面的不同,为合理使用VSMCs提供参考。方法:分别使用组织块贴壁法和混合酶消化法分离获得原代VSMCs,进行体外传代培养,观察细胞形态及细胞表型特征蛋白免疫荧光亮度。结果:混合酶消化法获得的原代VSMCs特征蛋白SMα-actin表达明显,表明在收缩表型特征方面优于组织块贴壁法,随着传代次数的增加,混合酶消化法在第7代仍部分保留收缩表型特性,而组织块贴壁法在第7代已丧失收缩表型特性,转变为合成型。结论:混合酶消化法在获得较稳定的收缩表型VSMCs方面比组织块贴壁法更具有优势,各实验室应根据自身的实验条件和实验设计准确选择。

虎杖3个单体成分对TGF-β1诱导A549细胞表型转化的干预作用

目的:探究虎杖苷、白藜芦醇和大黄素对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导下A549细胞表型转化的干预作用。方法:以1ng/mL TGF-β1诱导A549细胞,采用免疫荧光法观察虎杖苷、白藜芦醇和大黄素对表型标志性相关蛋白平滑肌α-肌动蛋白(SMα-actin)和纤连蛋白(fibronectin)表达的影响。结果:虎杖苷(25μmol/L)和白藜芦醇(20μmol/L)可抑制TGF-β1诱导的A549细胞SMα-actin和fibronectin的表达,大黄素(3.5μmol/L)对fibronectin的蛋白表达有抑制作用,对SMα-actin的表达有促进作用。结论:虎杖对肺纤维化的治疗作用可能通过多种不同结构类型的成分、不同的作用机制发挥疗效。