TGF-β1/Smads信号通路在SIRT1抗心肌纤维化中的作用及机制研究

目的 观察沉默信息调节因子1(sirtuin 1,SIRT1)对压力超负荷致大鼠心肌纤维化及血管紧张素Ⅱ(angiotensin, AngⅡ)诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响,并探讨其分子机制。方法 在体实验通过不完全结扎大鼠腹主动脉,使压力负荷增加诱导心肌纤维化,给予SIRT1激活剂后,左室心肌组织行Masson染色,观察心肌间质纤维化并计算胶原容积分数,免疫组化染色检测心肌组织TGF-β1/Smads蛋白表达。提取新生大鼠心脏成纤维细胞,给予AngⅡ或AngⅡ加SIRT1激活剂后,采用MTT法检测细胞增殖,qRT-PCR和Western blot法检测心肌组织及成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原(collagenⅠ/Ⅲ,Col1α1/3α1)、SIRT1及TGF-β1/Smads mRNA及蛋白的表达。结果 与假手术组相比,压力超负荷模型组大鼠心肌间质出现显著的纤维化,心肌胶原容积分数增加,Col1α1/3α1、TGF-β1/Smads表达明显增多,SIRT1表达减少;给予SIRT1激活剂SRT1720干预后可改善压力超负荷诱导的心肌间质纤维化,下调Col1α1/3α1、TGF-β1/Smads表达,上调SIRT1的表达;同时,相关性分析显示SIRT1的蛋白表达与TGF-β1的表达呈负相关。另外,SRT1720亦可抑制AngⅡ诱导的成纤维细胞增殖、Col1α1/3α1及TGF-β1表达的增加。结论 激活SIRT1对压力超负荷导致的心肌纤维化及AngⅡ诱导的成纤维细胞增殖均有显著的抑制作用,其可能通过调节TGF-β1/Smads信号通路抑制或逆转心肌纤维化的发生。

Smad泛素化调节因子2对人胚胎眼巩膜成纤维细胞TGF-β1/Smads信号通路和I型胶原表达的影响

目的探讨Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导后对人胚胎眼巩膜成纤维细胞(HFSFs)分泌Smads蛋白、I型胶原α1(COLIA1)的影响,探讨泛素化在巩膜重塑中的作用。方法HFSFs复苏并稳定传代后,免疫组化(IHC)法检测细胞中Smurf2的表达。将HFSFs细胞分别设空白对照组、TGF-β1组(加入10 ng/mL TGF-β1)、Control siRNA转染组(10 ng/mL TGF-β1+Control siRNA)及Smurf2 siRNA转染组(10ng/mL TGF-β1+Smurf2 siRNA)。Western Blot法检测COLIA1蛋白表达水平。RT-PCR法检测各组细胞中Smurf2、Smad2、Smad3和Smad7的mRNA表达水平。结果IHC结果显示,HFSFs中有Smurf2蛋白表达。TGF-β1诱导HFSFs中COLIA1蛋白显著性高表达,而当Smurf2被抑制时,COLIA1蛋白表达受抑制。与空白对照组比较,Smad7 mRNA表达水平呈上升趋势,差异有统计意义(P<0.05),但Smad7蛋白表达水平与PCR结果不完全相同;各培养组中Smad2和Smad3 mRNA和蛋白表达水平,与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论Smurf2表达于HFSFs细胞中,且随着Smurf2表达减少,HFSFs细胞中Smad7蛋白含量呈上升趋势,COLIA1含量呈下降趋势。提示Smurf2可能通过作用于TGF-β1/Smads信号通路参与了巩膜重塑过程。

去泛素化酶USP10通过稳定Smurf1抑制TGF-β/BMP信号通路

目的 探究生理条件下去泛素化酶USP10调控的关键信号通路及分子机制。方法 利用GEO2R和Metascape对Usp10+/+和Usp10-/-新生小鼠肾组织基因芯片(GSE198574)差异表达基因和通路富集分析,使用免疫印迹实验和免疫组化技术检验核心转录因子的表达情况;进一步利用免疫印迹检测该信号通路,并通过基因芯片和免疫组化分析候选分子的表达情况;使用免疫共沉淀(Co-IP)和GST-pull down实验验证USP10与候选分子的相互作用,通过泛素化实验明确USP10对底物分子的调控机制;利用免疫印迹检测细胞增殖、凋亡相关蛋白p21、Cleaved-caspase 3的表达情况,使用CCK-8和克隆形成实验分析USP10对细胞增殖的影响。结果 Usp10-/-新生小鼠肾组织中TGF-β/BMP通路激活,USP10在小鼠体内缺失后导致Smad泛素相关因子1 (Smurf1)蛋白质水平降低,Smad1/5蛋白质水平上调,却不影响它们的转录水平;机制上,USP10与Smurf1存在相互作用,并依赖其去泛素化酶活性去除Smurf1多聚泛素化。Usp10敲除后促进细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21表达上调,并抑制细胞的增殖能力。结论 USP10通过去泛素化并稳定Smurf1,抑制TGF-β/BMP信号通路,从而维持小鼠组织器官和细胞增殖稳态。

超声造影联合血清SMURF1检测诊断甲状腺癌的临床分析

目的探讨超声造影联合血清Smad泛素调节因子1(SMURF1)检测对甲状腺癌的诊断价值。方法纳入东南大学附属中大医院溧水分院2019年2月至2020年2月收治的144例疑似甲状腺癌患者为研究对象,根据组织病理学结果,将其分为甲状腺癌组(76例)和良性组(68例)。所有患者均行超声造影检查及血清SMURF1水平测定;分析超声造影参数、血清SMURF1单独检测及二者联合检测对甲状腺癌的诊断价值。结果甲状腺癌组超声造影参数峰值强度(PI)、平均灌注强度(SImean)及最大灌注强度(SImax)均低于良性组,SMURF1 mRNA水平高于良性组(P<0.05)。超声造影参数SImax诊断甲状腺癌的敏感度为82.89%,特异度为72.06%,准确度为77.78%,Kappa值为0.552。血清SMURF1诊断甲状腺癌的敏感度为65.79%,特异度为94.12%,准确度为79.17%,Kappa值为0.589。SImax联合SMURF1诊断的敏感度、特异度、准确度、Kappa值分别为97.37%、85.29%、91.67%、0.832,均高于SImax、SMURF1单独诊断(P<0.05),且二者联合预测预后的AUC为0.927,明显高于二者单独诊断(Z联合vs.SImax=3.999,P<0.001;Z联合vs.SMURF1=3.270,P=0.001)。结论超声造影联合血清SMURF1检测可提高甲状腺癌的诊断效能,可在保证甲状腺癌患者诊断效率的前提下,避免临床甲状腺癌患者的过度诊断。

扶正化瘀方影响转化生长因子β1/Smad信号通路的抗肝纤维化作用机制

目的:探讨扶正化瘀方影响转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)/Smad信号转导的抗肝纤维化作用机制。方法:本研究分体内实验和体外实验两部分。在体内实验中,37只雄性Wistar大鼠分为正常组(5只)、模型组(18只)和扶正化瘀方组(14只)。模型组和扶正化瘀组大鼠采用二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)腹腔注射复制大鼠肝纤维化模型。灌胃治疗4周后,采用盐酸水解法检测肝组织中羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量,蛋白质印迹法分析肝组织中TGF-β1、TGF-β1Ⅰ型受体(TGF-β1 type Ⅰ receptor,TβR-Ⅰ)、Smad2、Smad3及磷酸化Smad2/3蛋白的表达。体外实验采用培养4d的原代大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC),分为对照组、TGF-β1组、10%扶正化瘀方药物血清组及TβR-Ⅰ胞内激酶抑制剂(SB-431542)组。后3组用2.5ng/mLTGF-β1刺激24h后,对照组及TGF-β1组加10%正常大鼠血清,10%扶正化瘀方药物血清组加10%服用扶正化瘀方的大鼠血清,SB-431542组加10%正常大鼠血清及10μmol/LSB-431542。共孵育24h后,免疫荧光染色检测HSC中α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和Smad3蛋白的表达,蛋白质印迹法分析HSC中α-SMA蛋白的表达。结果:体内实验发现,扶正化瘀方可明显降低纤维化肝组织中异常升高的Hyp含量及TGF-β1、TβR-Ⅰ、磷酸化Smad2/3蛋白的表达。体外研究发现,正常HSC中α-SMA、TβR-Ⅰ表达较低,TGF-β1刺激可显著上调其表达;扶正化瘀方药物血清共孵育后,可明显抑制TGF-β1诱导的HSC中α-SMA的表达;正常HSCSmad3主要表达在细胞质中,细胞核中表达较低,TGF-β1可显著刺激Smad3向细胞核转移,扶正化瘀方药物血清可明显抑制TGF-β1诱导的Smad3核转位。结论:扶正化瘀方可下调纤维化大鼠肝脏及HSC中的TGF-β1/Smad病理信号转导通路,这可能是扶正化瘀方抗肝纤维化的部分作用机制。

Smad6信号干扰对MSCs骨向分化中Smad5及Smurf1基因表达的影响

目的研究在骨形态发生蛋白2(BMP-2)诱导的骨髓间充质干细胞(MSCs)骨向分化中Smad6信号干扰对Smad5、Smurf1基因表达的影响。方法培养小鼠骨髓MSCs,并分为3组:A组为对照细胞;B组细胞用携带绿色荧光蛋白(GFP)的空白载体病毒转染+BMP-2骨向诱导;C组细胞用Smad6重组RNA干扰载体转染+BMP-2诱导。结果病毒转染后GFP在MSCs中有效表达,病毒转染效率接近100%。与A组比较,BMP-2诱导24h显著提高了B组Smurf1 mRNA水平(P<0.01);而Smad6信号干扰在两个时间点则进一步提高了C组Smurf1 mRNA水平,并显著高于B组(P<0.01)。C组磷酸化的Smad5(pSmad5)和Smurf1水平在两个时间点也显著高于B组(P<0.01),而Smad5蛋白水平则未受影响。结论在BMP-2诱导的MSCs骨向分化中,Smad6 RNA干扰可促进Smad5磷酸化,并引起Smurf1基因表达代偿性增高。

Smad泛素化调节因子与组织修复及器官纤维化的研究进展

泛素(ubiquitin)因其在整个生物界广泛存在而得名。泛素依赖性的蛋白质降解系统通过降解缺陷无用的蛋白质和失活的各种细胞器,影响着机体的染色体结构与功能、遗传信息的复制与表达、细胞信号传导与调节等常见生命现象。转化生长因子β(transforming growth factor β)及TGF-β/Smad信号传导通路在组织修复及器官纤维化过程中起重要作用。TGF-β/Smad信号传导调节机制复杂,其中探讨TGF-β/Smad信号传导通路的终止机制是近年研究热点。随着泛素-蛋白水解酶复合体可阻断TGFB/Smad信号分子作用的发现,一类特异性介导Smads泛素化降解的关键泛素酶—Smads泛素化调节因子(Smad ubiquitination regulatoryfactors,Smurfs)逐渐为学者所重视。本文对Smurfs与组织修复、纤维化过程中的生理及病理研究进展作如下综述。

绝经后骨质疏松患者血清SIK2,SMURF1表达水平及其与骨代谢、骨密度指标的相关性研究

目的探讨绝经后骨质疏松(postmenopausal osteoporosis,PMOP)患者血清盐诱导激酶2(salt-inducible kinase 2,SIK2)、Smad泛素化调节因子1(Smad ubiquitination regulatory factor 1,SMURF1)表达水平与骨代谢、骨密度的相关性。方法选取朝阳市第二医院2019年4月~2021年4月收治的154例绝经后骨质疏松患者作为研究组,另选取该院同期体检的绝经后健康女性150例作为对照组。用定量逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测两组血清SIK2和SMURF1相对表达水平;Pearson相关分析明确血清SIK2,SMURF1与骨代谢指标、骨密度的相关性;Logistic回归分析绝经后骨质疏松的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清SIK2和SMURF1对绝经后骨质疏松的预测价值。结果与对照组相比,研究组腰椎L1~4骨密度(0.71±0.20 g/cm^(3)vs 0.86±0.21 g/cm^(3))、25羟基维生素D[(25-hydroxyvitamin D,25-OH-D)(12.07±2.76 ng/ml vs 14.31±2.62 ng/ml)]和股骨颈骨密度(0.61±0.18 g/cm^(3)vs 0.82±0.19 g/cm^(3))水平均显著降低,差异均有统计学意义(t=6.378,7.254,9.895,均P<0.001);血清骨桥蛋白(osteopontin,OPN)(18.67±3.17 ng/ml vs 16.78±2.69 ng/ml)、甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)(71.26±8.88 pg/ml vs 64.31±8.24 pg/ml)、SIK2(0.94±0.16 vs 0.79±0.17)、Ⅰ型胶原羧基端肽β特殊序列(bate C-terminal cross-linked telopeptids of typeⅠcollagen,β-CTx)(5.12±0.96 pg/ml vs 4.28±0.84 pg/ml)、骨钙素(osteocalcin,OC)(15.64±2.73 ng/ml vs 13.28±2.14 ng/ml)、Ⅰ型胶原氨基端前肽(N-terminal propeptide of typeⅠprocollagen,PINP)(41.28±4.68 ng/ml vs 36.47±4.62 ng/ml)及SMURF1(0.93±0.22 vs 0.66±0.16)水平显著升高,差异均有统计学意义(t=5.598~11.759,均P<0.001)。血清SIK2,SMURF1与OPN,OC,SMURF1,β-CTx,PINP均呈正相关(rSIK2=0.169~0.292,rSMURF1=0.194~0.246,均P<0.05);血清SIK2,SMURF1与25-OH-D,股骨颈骨密度呈负相关(rSIK2=-0.212,-0.210;rSMURF1=-0.285,-0.252,均P<0.05)。股骨颈骨密度(OR=0.002,P<0.05),OPN(OR=1.592,P<0.05),OC(OR=1.603,P<0.05),PINP(OR=1.675,P<0.05),SIK2(OR=310.221,P<0.001)和SMURF1(OR=1359.044,P<0.001)是绝经后骨质疏松的影响因素。二者联合预测绝经后骨质疏松ROC曲线下面积(AUC)显著大于SIK2单独预测的AUC(Z=3.339,P<0.001),与SMURF1单独预测的AUC差异无统计学意义(P>0.05)。结论绝经后骨质疏松患者血清SIK2和SMURF1水平均明显升高,二者均与患者骨代谢指标、骨密度密切相关。

肝癌大鼠肝脏组织Smurf1表达变化及意义

目的探讨泛素连接酶Smad泛素化相关因子1(Smurf1)在肝细胞癌(简称肝癌)发生中的作用。方法将35只健康雄性Wistar大鼠随机分为模型组25只和对照组10只,模型组按照体质量给予0.2 mL/100 g二乙基亚硝胺(DEN)溶液(0.25 mL DEN+10 mL生理盐水)腹腔注射,对照组按照体质量给予0.2 mL/100 g生理盐水腹腔注射,2次/周。连续注射15周,称取体质量,麻醉后取肝组织观察其大体情况,称取肝脏质量,计算肝脏质量/体质量。取肝组织,HE染色后观察病理情况,分别采用免疫组化法及Western blotting法检测Smurf1表达。结果连续用药15周,模型组15只死亡,对照组无死亡。模型组体质量及肝脏质量/体质量低于对照组,肝脏质量高于对照组(P均<0.01)。模型组肝脏颜色为棕黄色,肝脏体积明显增大,被膜下可见大量粟粒样结节,质地变硬,肝缘变钝。对照组肝脏颜色为棕红色,被膜光滑,质地柔软。模型组肝脏细胞排列成小梁状,间质由衬覆单层内皮细胞的血窦样腔隙组成,细胞核大小不一,核膜增厚,可见核仁,核质比增高。对照组肝组织以中央静脉为中心呈放射状排列,肝索排列规整。免疫组化及Western blotting结果均显示,模型组肝脏组织Smurf1蛋白表达高于对照组(P均<0.01)。结论 Smurf1在肝癌大鼠肝脏组织中的表达升高,Smurf1可能参与了肝癌的发病过程。

骨质疏松症大鼠肾组织中Smurf1 mRNA和蛋白表达的实验研究

目的通过研究摘除卵巢致骨质疏松症大鼠肾组织中Smurf1的mRNA和蛋白的表达,揭示摘除卵巢致骨质疏松症的病理机制,并研究补肾中药防治疗效及其作用机制。方法摘除雌性大鼠双侧卵巢的方法复制骨质疏松症模型,采用具有补肾壮骨益精作用的纳米钙补肾中药(高、低剂量)对实验大鼠治疗12w,以骨疏康颗粒剂、盖天力片作为阳性对照组,正常大鼠、假手术组作为标准对照组,模型大鼠作为空白对照组,并与补脾方剂(补中益气汤)作疗效的比较。用RT-PCR法、Western印迹法检测骨质疏松症大鼠肾组织中Smurf1的mRNA和蛋白表达。结果RT-PCR及Western方法检测,正常大鼠肾组织中存在Smurf1的mRNA和蛋白表达;与正常组、假手术组比较,模型组Smurf1 mRNA和蛋白的表达水平在肾组织中明显降低。用药12w后,与模型组比较,补肾高、低剂量组、补脾组、盖天力组、骨疏康组均可明显上调Smurf1 mRNA和蛋白在肾组织中的表达水平。其中补肾高剂量组上调幅度大于其他各用药组。结论①正常大鼠肾组织中Smurf1可以在基因、蛋白水平表达;②骨质疏松症的发生,可能与肾组织中Smurf1的mRNA和蛋白表达的变化有关;③纳米钙补肾中药通过调控肾组织中Smurf1的mRNA和蛋白表达,对于骨质疏松症有一定的防治作用。

Smurf1拮抗BMP-2对C2C12细胞的诱导成骨作用

目的研究Smad泛素化调节因子1(Smurf1)对基因重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)诱导成骨作用的影响。方法通过将质粒pcDEF3-Smurf1临时转染C2C12细胞并应用实时PCR和Western免疫印迹法鉴定其表达Smurf1,空载体pcDNA3.1作为阴性对照;然后用比色法测定细胞碱性磷酸酶活性和实时PCR分析细胞碱性磷酸酶、骨钙素、成骨转录因子Osterix基因表达,观察Smurf1对rhBMP-2诱导C2C12细胞向成骨细胞分化的影响。同时在相差显微镜下观察细胞形态的变化。结果Smurf1在C2C12细胞可以通过临时转染获得很好的表达。尽管在细胞形态上没有明显的差别,但Smurf1转染的C2C12细胞在rhBMP-2作用48 h后,细胞碱性磷酸酶活性以及细胞碱性磷酸酶、骨钙素、成骨转录因子Osterix基因表达均较对照组明显下降。结论Smurf1在BMP诱导成骨过程中发挥着负性调节作用。

骨肉瘤与骨良性病变组织中Smurf1、BMP-2的表达及相关性分析

目的:研究Smad泛素化调节因子1(Smad ubiquitin regulatory factor-1,Smurf1)与骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)在骨的良性病变及骨肉瘤组织中的表达及相关性,以此分析Smurf1蛋白在骨肉瘤的发生、侵袭、转移中的意义。方法:共收集骨组织标本120例,其中良性病变36例,骨肉瘤84例。免疫组化法检测标本中Smurf1和BMP-2含量,相关性分析采用Spearman等级相关分析法。结果:骨肉瘤组织Smurf1蛋白阳性表达明显高于良性病变组织[(0.786±0.214)vs.(0.583±0.183)],BMP-2蛋白表达水平则相反[(103.57±13.23)vs.(152.19±19.42)],差异均有统计学意义(P<0.05)。Smurf1与BMP-2在骨肉瘤组织中的蛋白表达水平呈显著负相关(r=-0.598,P<0.05)。结论:Smurf1可通过抑制BMP-2的表达来促进骨肉瘤的形成和发展。

SMURF1蛋白在人胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:研究SMAD泛素化调节因子1(SMURF1)蛋白在人胃癌组织中的表达及临床意义。方法:采用免疫组化SP法检测68例胃癌及对应癌旁组织中SMURF1蛋白表达情况,分析SMURF1蛋白表达与胃癌不同临床病理特征的相关性。结果:SMURF1蛋白在胃癌组织中的阳性率为76.5%(52/68),而在对应癌旁组织中的阳性率仅为26.5%(18/68),差异具有统计学意义(χ2=34.029,P=0.000)。胃癌组织中SMURF1蛋白表达与浸润深度(χ2=5.461,P=0.019)、淋巴结转移(χ2=9.141,P=0.002)和肿瘤分期(χ2=8.380,P=0.004)显著相关,而与性别、年龄和肿瘤大小无明显相关。结论:胃癌组织中SMURF1蛋白异常高表达,其高表达与胃癌侵袭转移密切相关,提示SMURF1在胃癌发生、发展中可能发挥重要作用。

灯盏花素对肝纤维化大鼠的干预作用及机制

目的基于转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad2/胞外信号调节激酶1(ERK1)通路和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)/核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)通路,探讨灯盏花素对肝纤维化(HF)大鼠的干预作用及潜在机制。方法将60只大鼠随机分为正常对照组,模型组,灯盏花素低、中、高剂量组(5.4、10.8、21.6 mg/kg)和秋水仙碱组(阳性对照,0.45 mg/kg),每组10只,雌雄各半。除正常对照组外,其余各组大鼠均以四氯化碳诱导构建HF模型。随后,各药物组大鼠灌胃相应药液,每天1次,连续28 d。观察各组大鼠的肝脏外观并计算其肝脏系数,检测其血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平和肝组织中ALT、AST、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,观察其肝组织炎症和纤维化情况,检测肝组织中TGF-β1、Smad、ERK1、Nrf2、Keap1、HO-1蛋白及mRNA的表达情况。结果与正常对照组比较,模型组大鼠肝脏可见大面积的白色结节灶、明显的炎症细胞浸润和胶原纤维沉积;其体重,肝组织中SOD、GSH-Px水平和Nrf2、HO-1蛋白及mRNA的表达水平均显著降低(P<0.05);肝脏系数,Masson染色阳性面积百分比,血清及肝组织中ALT、AST水平,肝组织中MDA水平和TGF-β1、Smad2、ERK1、Keap1蛋白及mRNA的表达水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,各药物组大鼠肝组织病变均有所改善,上述定量指标普遍逆转(P<0.05)。结论灯盏花素对大鼠HF有较好的干预作用,其作用可能与抑制TGF-β1/Smad2/ERK1通路来抗纤维化,调控Keap1/Nrf2/HO-1通路来抑制氧化应激有关。

脉冲电磁场抗骨质疏松作用及对Smurf1表达的影响

目的研究脉冲电磁场(PEMF)对去卵巢骨质疏松(OVX-OP)大鼠的作用及机制。方法将6月龄雌性SD大鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(M组,双侧卵巢切除)、雌激素治疗组(E组,M组基础上进行雌激素治疗)和PEMF组(M组基础上进行PEMF治疗),每组各10只,术后饲养8周后进行治疗,治疗持续8周。称取治疗前后各组大鼠体重;采用双能X射线实验动物骨密度测定仪检测各组大鼠右肱骨骨密度。治疗结束后,采用半自动图像数字化分析仪对胫骨上1/3作静态骨形态计量学检测;采用免疫印迹(WB)检测各组大鼠骨组织Smad泛素化调节因子1(Smurf1)蛋白表达量。结果与S组比较,M组、E组、PEMF组精神状况欠佳,饮食、活动及大小便未见异常。治疗前,与S组比较,M组、E组、PEMF组大鼠体重显著增加(P<0.05),骨密度值显著降低(P<0.05)。治疗后,E组、PEMF组大鼠体重显著降低(P<0.05),骨密度值较治疗前显著增加(P<0.05);与S组比较,M组大鼠骨密度值、BV/TV、Tb.N、Tb.Th显著降低(P<0.05),体重、Tb.Sp、Smurf1蛋白水平显著增加(P<0.05);与M组比较,E组、PEMF组大鼠骨密度值、BV/TV、Tb.N、Tb.Th显著升高(P<0.05),体重、Tb.Sp、Smurf1蛋白水平显著降低(P<0.05);E组与PEMF组比较,大鼠各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论PEMF可增加骨密度、改善骨形态变化,发挥抗骨质疏松的作用,可能与Smurf 1蛋白表达下调有关。

Smurf2对肝纤维化中TGF-β/Smad通路的影响

转化生长因子β1(TGF-β1)在肝纤维化的发生、发展中起重要作用,它作为TGF-β1/Smad信号通路的起始因子激活下游信号,使处于非活性状态下的肝星状细胞分化为肌成纤维细胞,促进并维持了肝纤维化的发生。泛素化是体内蛋白质翻译后修饰并降解的重要途径之一,泛素-蛋白酶体途径中的泛素连接酶Smurf2通过多种途径抑制TGF-β1/Smad通路表达。Smurf2作为一种抗肝纤维化发生的酶受到广泛关注,但机制并未深入系统地被阐述。

MG132对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞Smad泛素化调节因子2和Smad7的影响

近来发现在肾纤维化模型（UUO）中Smad泛素化调节因子2（Smad ubiquitin regulatory factor2，Smurf2）表达增强，Smad7蛋白表达明显降低，Smurf2能通过泛素蛋白酶体途径增加Smad7降解。Smad7是TGF-β信号转导途径中的主要抑制性调控蛋白，因此阻断Smurf2的表达，有可能会起到抗纤维化的作用。MG132是一种有效、可逆的醛基肽类特异性蛋白酶体抑制剂，能阻断泛素蛋白酶体通路。我们主要研究MG132对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞（HKC）表达Smurf2、Smad7及Ⅳ型胶原的影响，为肾纤维化的防治寻找新的靶点。

雷公藤红素改善2型糖尿病大鼠肝纤维化的机制探讨

目的:探讨雷公藤红素(CEL)对2型糖尿病(T2DM)所致的肝纤维化的改善作用及其内在机制。方法:建立T2DM大鼠模型,将24只雄性SD大鼠分成4组,即空白对照(Con)组、对照给药(CEL)组、模型(T2DM)组和模型给药(T2DM+CEL)组。每周监测各组大鼠体质量和空腹血糖(FBG),T2DM造模成功2周后给予CEL 3 mg/(kg·d)灌胃,1次/天持续12周,检测血清空腹胰岛素(FINS)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)及肝组织羟脯氨酸(Hyp)水平。肝组织切片行Masson染色和天狼猩红染色,观察肝组织纤维化程度和胶原蛋白沉积。Western blot检测肝组织α-SMA、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、沉默信息调节因子1(SIRT1)、TGF-β1和Smad3的蛋白表达变化。结果:与Con组比较,T2DM组大鼠24 h尿量、FBG、FINS、AST、ALT、Hyp水平均升高(P<0.001);胶原容积分数(CVF)升高(P<0.001);肝组织α-SMA、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、TGF-β1、Smad3蛋白表达量均升高(P<0.05),SIRT1蛋白表达量降低(P<0.01)。与T2DM组相比,给予CEL后大鼠24 h尿量、FBG、FINS、AST、ALT、Hyp水平均降低(P<0.05);肝组织胶原沉积减少,纤维化状况改善;肝组织SIRT1表达升高(P<0.05),纤维化相关蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论:CEL可减轻T2DM大鼠肝脏组织的纤维化,其机制可能与调控SIRT1、抑制TGF-β/Smad信号通路有关。

转化生长因子β_1对人巩膜成纤维细胞Smad泛素化调节因子2和Ⅰ型胶原α_1影响的研究

目的探讨Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在人胚胎眼巩膜成纤维细胞(HFSFs)中的表达,检测转化生长因子β_1(TGF-β_1)影响下HFSFs中Smurf2和Ⅰ型胶原α_1(COLIA1)含量的变化。方法 HFSFs复苏并稳定传代后,用免疫细胞化学法检测细胞中Smurf2的表达。分别用不同浓度的TGF-β_1(0、1 ng/ml、5 ng/ml及10 ng/ml)处理HFSFs 24 h以及10 ng/ml TGF-β_1处理HFSFs不同时长(1 h、6 h、12 h及24 h)后,用实时荧光定量法检测各组Smurf2信使核糖核酸(mRNA)和COLIA1 mRNA表达水平。数据以均数±标准差(±s)描述,不同浓度和不同时长的组间比较采用单因素方差分析,当差异有统计学意义时,进一步采用SNK法两两比较。结果免疫细胞化学检测的结果显示,HFSFs中有COLIA1 mRNA和Smurf2蛋白的表达。与空白对照组比较,TGF-β_110 ng/ml组COLIA1 mRNA的表达呈上升趋势(F=3. 17,P <0. 05),TGF-β_15 ng/ml、10 ng/ml组Smurf2 mRNA表达上调(F=2. 35,2. 00; P <0. 05)。10 ng/ml TGF-β_1干预HFSFs培养1 h、6 h、12 h及24 h后,24 h组COLIA1 mRNA表达显著升高(F=29. 20,P <0. 05)。Smurf2 mRNA表达改变呈先上升后下降趋势,在6 h达到最高(F=10. 65,P <0. 05)。结论 TGF-β_1可能通过调控HFSFs Smurf2的表达,诱导HFSFs COLIA1的合成。

NF-κB对Smad泛素化调节因子1表达水平的调节作用

目的鉴定Smad泛素化调节因子1（Smad ubiquitination regulatory factor 1，SMURFl）基因启动子区的一个核因子-κB（nuclearfactor-κB，NF-κB）反应元件，并探讨后者对于SMURFl表达的调节作用。方法构建系列截短的SMURFl基因启动子荧光素酶报告基因载体，转染肝癌HepG2细胞，检测荧光素酶的活性，分析各段启动子的活性。应用DNA结合实验和染色质免疫沉淀实验鉴定SMURF1基因启动子区的NF-κB反应元件；构建NF-κB位点突变的荧光素酶报告基因载体并检测其活性；转染NF-xB特异性小干扰RNA，检测SMURF1表达水平的变化。结果SMURFl基因的各段启动子具有高转录活性，其中-519～-378区域为一个正调控区；SMURF1启动子-411--420区域为NF-κB反应元件，NF—κB特异性结合于该位点；该元件突变可使SMURF1启动子活性明显下降；转染NF-κB特异性小干扰RNA可下调SMURn的表达水平。结论NF-KB特异性结合于SMURF1启动子-411--420区，对SMURFl的表达水平具有重要的调节作用。