BMP6和SMAD5在藏绵羊睾丸组织中的表达和定位

骨形态发生蛋白6(BMP6)能够促进睾丸支持细胞的DNA合成和细胞增殖,SMAD蛋白5(SMAD5)是其下游信号介质,抑制细胞凋亡,两者在雄性动物生殖过程中起着关键作用。以不同发育阶段(3月龄、1岁龄和3岁龄)藏绵羊(Ovis aries)为研究对象,运用实时荧光定量PCR、Western blot和免疫组织化学染色法从转录和翻译水平检测了BMP6和SMAD5在藏绵羊睾丸不同发育阶段的表达和分布模式,研究BMP6/SMAD5在藏绵羊睾丸发育和精子发生过程中的作用。结果显示:1岁龄(性成熟期)和3岁龄(成年)藏绵羊睾丸中BMP6 mRNA相对表达量和蛋白表达量均极显著高于3月龄(性成熟前)(P<0.01),且两者在性成熟后趋于稳定;随年龄增长,藏绵羊睾丸中SMAD5 mRNA相对表达量极显著降低(P<0.01),但SMAD5蛋白表达量极显著升高(P<0.01)。BMP6和SMAD5蛋白在藏绵羊睾丸不同发育阶段的支持细胞和间质细胞中均有表达,推测BMP6/SMAD5在精子发生过程中发挥作用。

益气化瘀法中药对糖尿病大鼠肉芽增生期创面TGF-β/ALK5/Smad2/3通路的影响

目的 :探讨益气化瘀法中药对糖尿病大鼠肉芽增生期创面转化生长因子-β(TGF-β)/激活素受体样激酶(ALK)5/Smad蛋白2/3通路的影响。方法 :将50只大鼠随机分为益气化瘀组、益气组、化瘀组、糖尿病对照组、正常对照组。通过腹腔注射链脲佐菌素和外科方法建立糖尿病大鼠全层皮肤缺损模型,运用Westernblot技术手段分别检测各组肉芽增生期创面成纤维细胞ALK5/Smad2/3的表达水平。结果:糖尿病对照组ALK5表达水平明显高于正常对照组(P<0.05);益气化瘀组ALK5表达水平明显低于糖尿病对照组(P<0.05),其与益气组、化瘀组、正常对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。糖尿病对照组smad2表达水平明显高于正常对照组(P<0.05);益气化瘀组smad2表达水平与各组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。糖尿病对照组smad3表达水平明显高于正常对照组(P<0.05);益气化瘀组smad3表达水平低于化瘀组(P<0.05),明显低于糖尿病对照组、益气组(P<0.01),高于正常对照组(P<0.05)。结论:糖尿病创面难以愈合及瘢痕形成的机制可能与ALK5/Smad2/3通路有关,益气化瘀中药可能通过抑制ALK5/Smad2/3通路,加速创面愈合,减少瘢痕形成。

昆仙胶囊治疗创伤性骨化性肌炎作用机制研究

目的:探讨昆仙胶囊治疗创伤性骨化性肌炎大鼠的可能作用机制。方法:选取78只SD大鼠,按随机数字表法分为空白组(6只)、假手术组(24只)、对照组(24只)及药物组(24只),空白组直接处死后取血,假手术组剪开踝关节表皮后予以缝合,对照组和药物组建立创伤性骨化性肌炎模型,对照组予安慰剂灌胃,假手术组和药物组均予昆仙胶囊汤剂灌胃,在术后14 d、28 d、42 d、56 d各断颈处死6只大鼠,测量造模前后踝关节的肿胀厚度并计算肿胀率,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、C-反应蛋白(CRP)和骨成型蛋白-4(BMP4)、Smad5水平,取跟腱组织用免疫组化检测BMP4和Smad5的表达情况。结果:对照组和药物组术后14 d、28 d、42 d、56 d的踝关节肿胀率均高于假手术组(P<0.01)。药物组术后42 d、56 d的踝关节肿胀率均低于对照组(P<0.01)。对照组和药物组术后14 d、28 d、42 d、56 d的血清TNF-α水平均高于假手术组(P<0.01);药物组术后28 d、42 d、56 d的血清TNF-α水平均低于对照组(P<0.01)。对照组术后14 d、28 d、42 d、56 d的血清IL-6水平均高于假手术组(P<0.01);药物组术后14 d、28 d、42 d的血清IL-6水平均高于假手术组(P<0.01)。药物组术后14 d、28 d、42 d、56 d的血清IL-6水平均低于对照组(P<0.01)。对照组和药物组术后14 d、28 d、42 d、56 d的血清CRP水平均高于假手术组(P<0.01);药物组术后42 d、56 d的血清CRP水平均低于对照组(P<0.01)。对照组术后14 d、28 d、42 d、56 d的血清BMP4水平均高于假手术组(P<0.01),药物组术后14 d、28 d、42 d的血清BMP4水平均高于假手术组(P<0.01);药物组术后28 d、42 d、56 d的血清BMP4水平均低于对照组(P<0.01)。对照组术后14 d、28 d、42 d、56 d的血清Smad5水平均高于假手术组(P<0.01),药物组术后14 d、28 d、42 d的血清Smad5水平均高于假手术组(P<0.01)。药物组术后56 d的血清Smad5水平低于对照组(P<0.01)。对照组术后14d、28d、42d、56d的跟腱组织BMP4平均光密度均高于假手术组(P<0.01),药物组术后14 d、28 d、42 d的跟腱组织BMP4平均光密度均高于假手术组(P<0.01);药物组术后28d、42d、56d的跟腱组织BMP4平均光密度均低于对照组(P<0.01)。对照组术后14d、28d、42 d、56 d的跟腱组织Smad5平均光密度均高于假手术组(P<0.01),药物组术后14 d、28 d、42 d的跟腱组织Smad5平均光密度均高于假手术组(P<0.01)。药物组术后28 d、42 d、56 d的跟腱组织Smad5平均光密度均低于对照组(P<0.01)。结论:昆仙胶囊对创伤性骨化性肌炎的治疗效果可能和调控BMP4/Smad5信号通路及抑制下游炎性因子有关。

CD137-CD137L信号通路通过活化TNF受体相关因子6促进小鼠动脉粥样硬化斑块内血管新生

目的探讨CD137-CD137L信号通路是否通过活化TNF受体相关因子6(TRAF6)促进粥样硬化斑块内血管新生。方法将小鼠内皮细胞(bEnd.3)和小鼠主动脉环分别分为对照组(培养基中加入10μg/L TNF-α)、IgG同型对照组(培养基中加入10μg/L TNF-α+5 mg/L IgG2b)和CD137刺激组(培养基中加入10μg/L TNF-α+5 mg/L CD137抗体)。利用转染小干扰RNA(siRNA)技术抑制内皮细胞和主动脉环TRAF6基因表达,将内皮细胞和主动脉环分别分为对照siRNA组(转染对照siRNA)和TRAF6 siRNA组(转染TRAF6 siRNA)。分别采用Western blot和实时荧光定量PCR(qPCR)检测内皮细胞和主动脉环TRAF6、血管内皮生长因子(VEGF)、Smad1/5蛋白和mRNA的表达;采用Transwell迁移实验检测内皮细胞的迁移能力;内皮细胞管腔形成实验检测内皮细胞的管腔形成能力;主动脉环血管新生实验检测主动脉环新生微血管形成能力。结果CD137刺激组内皮细胞和主动脉环TRAF6、VEGF蛋白和mRNA表达水平均高于对照组和IgG同型对照组(均P<0.05)。与对照siRNA组比较,TRAF6 siRNA组内皮细胞和主动脉环TRAF6、Smad1/5蛋白和mRNA表达水平明显降低,内皮细胞迁移数量减少,内皮细胞小管长度和分支数量降低,主动脉环新生微血管数量减少(均P<0.05)。结论CD137-CD137L信号通路可能通过TRAF6促进小鼠动脉粥样硬化斑块内血管新生。