HCV核心蛋白对人肝癌细胞系SMMC-7721增殖的影响

目的:观察HCV核心蛋白对低侵袭性人肝癌细胞系SMMC-7721增殖的影响。方法:将HCV核心蛋白的原核表达质粒pcDNA3.0-C-EGFP转染SMMC-7721细胞,以空质粒pcDNA3.0(-)转染的细胞作对照。分别采用RT-PCR、Western blot和ELISA法检测转染细胞HCV核心蛋白mRNA、蛋白及培养上清中蛋白的表达水平;进行纤维连接蛋白黏附实验、侵袭实验及运动实验,MTT法观察细胞增殖情况。结果:重组质粒pcDNA3.0-C-EGFP转染的SMMC-7721细胞HCV核心蛋白mRNA、蛋白及培养上清中蛋白的表达水平,细胞黏附率,侵袭实验及运动实验穿膜细胞数均高于对照(t=8.141、5.762、19.931、2.961、4.112和4.213,P均<0.05)。pcDNA3.0-C-EGFP转染的SMMC-7721细胞增殖率也较对照明显增加(P<0.05)。结论:HCV核心蛋白外源基因可促进SMMC-7721细胞系的增殖。

土贝母水提物对体外培养人肝癌细胞增殖及代谢的影响

目的 研究中药土贝母(BPF)水提物对体外培养的人肝癌细胞的抑癌活性。 方法 BPF经粉碎、浸提、超速离心、减压浓缩、冷冻干燥得BPF水提物,人肝癌SMMC-7721细胞经BPF提取物处理不同时间后以MTT法测其对人肝癌细胞线粒体代谢活性的影响,以细胞记数法观察了其对细胞增殖的影响。 结果 ①经200mg/L BPF提取物处理48h,人肝癌SMMC-7721细胞线粒体活性为对照组的31.3％,处理72h为21.4％;②以100mg/L BPF提取物处理7d中,人肝癌细胞数分别为0.57,0.316,0.29,0.285,0.57,1.287,1.2,对照FCS组分别为1.82,3.67,6.2,9.4,10.1,11,9,NON组分别为1.7,3.35,5.6,8.4,8.9,9.3,7.6,实验组人肝癌细胞数不仅低于对照组,而且低于处理前细胞数(P<0.01);③经BPF提取物处理24h后,即使更换为正常培养基,人肝癌细胞数在96h的恢复培养中基本无增加。 结论 中药BPF提取物能显著抑制体外培养的肝癌细胞增殖和降低线粒体代谢活性。

药物作用量-效关系的Thiele型连分式插值法分析

目的:提出Thiele型连分式插值法,研究并建立新的量-效关系分析方法。方法:以原卟啉钠(NAPP)抑制人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖的实验数据为例,基于Thiele型连分式插值,求出量-效关系表达式并绘制量-效曲线图;预测最大抑制率,计算半抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)和半效浓度(half effective concentration,EC50);求导并绘制导数图,研究抑制率随药物浓度变化的快慢程度。结果:通过Thiele型连分式插值法,得出NAPP作用于SMMC-7721细胞24、48、72 h的量-效关系表达式,预测不同时间下最大抑制率分别为43.75%,55.97%,64.93%;EC50分别为1.04 mg/L、0.36 mg/L、0.30 mg/L;作用48 h、72 h后IC50分别为16.46 mg/L、8.26 mg/L。导数图表明NAPP浓度在10 mg/L内,抑制率随浓度变化速度快,药效不稳定;大于10 mg/L后,变化不明显,药效稳定,出现平台期。结论:Thiele型连分式插值法简单、实用,逼近效果好,可作为研究药物量-效关系的一种新方法。

TNF-α对人肝癌细胞E-钙粘蛋白、α_5β_1整合蛋白及粘着斑激酶蛋白表达的影响

目的 研究应用肿瘤坏死因子 (TNF α)单独处理SMMC 772 1肝癌细胞不能引起肝癌细胞凋亡的原因。方法 采用免疫组化ABC法 ,结合图像分析仪及流式细胞术和Western印迹方法测定SMMC 772 1细胞表面E 钙粘蛋白 (E cadherin)、α5β1整合蛋白 (α5β1intergrin)、粘着斑激酶 (FAK )表达及粘着斑激酶磷酸化的程度。结果 在肿瘤坏死因子的作用下 ,E 钙粘蛋白的表达略有下降 ,但无明显差异。整合蛋白α5亚基的表达明显下降 ,而整合蛋白 β1亚基表达基本无变化。粘着斑激酶的蛋白表达随着肿瘤坏死因子浓度的增加略有下降 ,但变化不明显 ,粘着斑激酶的磷酸化程度无明显的变化。结论 单独用肿瘤坏死因子处理SMMC 772 1肝癌细胞后 ,并没有阻断由整合蛋白α5β1亚基及E 钙粘蛋白介导的 2条信号通路 ,且由胱冬肽酶 (caspases)介导的凋亡也没有被完全启动 ,不足以引起细胞的凋亡。