白藜芦醇通过下调PRMT5表达抑制肝胆管癌SMMC-7721细胞的增殖、侵袭和细胞周期

目的:探究白藜芦醇(Res)通过调控PRMT5表达对肝胆管癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭、细胞周期的影响及其机制。方法:常规培养正常肝细胞LO2和SMMC-7721细胞,用0、20、40、80μmol/L的Res进行处理,用qPCR法、MTT法、Transwell实验、流式细胞术和WB法分别检测Res处理后PRMT5 mRNA在LO2和SMMC-7721细胞中的表达,Res对SMMC-7721细胞增殖能力、侵袭能力、细胞周期和凋亡,以及PRMT5、cyclin D1和cyclin E1蛋白表达的影响。结果:PRMT5在SMMC-7721细胞中呈高表达(P<0.01);20、40、80μmol/L Res均能明显抑制PRMT5 mRNA和蛋白在SMMC-7721细胞中的表达(均P<0.01),抑制SMMC-7721细胞的增殖能力(P<0.01)和侵袭能力(P<0.05),阻滞SMMC-7721细胞周期于G0/G1期并促进其凋亡(P<0.01),明显抑制SMMC-7721细胞中周期蛋白cyclin D1、cyclin E1蛋白的表达(P<0.01)。结论:PRMT5在SMMC7721细胞中呈高表达,Res可有效抑制SMMC-7721细胞的增殖和侵袭能力并诱导其凋亡,其机制可能与抑制PRMT5表达相关。

当归、红芪提取物对人肝癌SMMC-7721细胞辐射增敏作用

目的:探讨当归、红芪提取物对直线加速器(X射线)辐射后人肝癌细胞SMMC-7721的增敏作用。方法:96孔板培养人肝癌细胞SMMC-7721,设9个组,对照组(N)即正常对照组,纯辐射组(F)给以源皮距100cm 4Gy的X射线,另设3个纯药物组(DH),设高(H:8mg/mL)、中(M:6mg/mL)、低(L:4mg/mL)三个药物浓度梯度,3个辐射加药组(F+DH)和1个空白组(只有培养液无细胞)。每组设6个复孔。采用MTT法计算当归、红芪提取物对人肝癌SMMC-7721细胞辐射前后增殖活性的影响。流式细胞术检测不同组细胞的周期情况,透射电镜及倒置显微镜分别观察各组细胞结构变化,用蛋白印记法检测不同组细胞中p21蛋白表达情况。结果:MTT法证明当归、红芪提取物具有抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖作用,对于辐射后的肝癌细胞具有很好的周期抑制作用。不同剂量当归、红芪提取物作用于细胞24h后,抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖呈剂量依赖关系,药物浓度越高,抑制作用越显著。SMMC-7721细胞经辐射后,细胞的抑制率为37.58%,辐射后加不同浓度当归、红芪提取物(4mg/mL、6mg/mL、8mg/mL),联合作用对细胞的抑制率升高,分别为45.27%、51.86%、59.34%,且呈药物浓度依赖关系,差异具有统计学意义(P<0.01)。辐射组肝癌细胞较正常组细胞G0/G1期细胞数明显增多,由44.70%升至71.60%(P<0.01),S期细胞减少,高浓度药物也可以使G0/G1期细胞比例有所升高(P<0.01)。辐射加药组细胞G0/G1期阻滞最为明显,并呈药物浓度梯度关系。高浓度药物组、辐射组细胞p21蛋白表达较正常组升高,辐射组+高浓度药物组细胞p21蛋白表达较辐射组明显升高。结论:当归、红芪提取物对于人肝癌SMMC-7721细胞具有很好的抑制作用,对经X线辐射后的细胞具有很好的增敏作用。

蟾蜍灵对肝癌细胞SMMC 7721的细胞毒作用及生长相关基因表达的影响

为探讨蟾蜍灵的抗癌作用机理 ,以肝癌SMMC772 1细胞为靶细胞 ,应用噻唑蓝还原法检测细胞毒作用 ,双荧光染色法和DNA电泳技术检测细胞凋亡与坏死 ;免疫组织化学方法检测细胞生长相关基因p2 1waf1/cip1和增殖细胞核抗原 (PCNA)蛋白表达 .结果表明 ,0 .0 1μmol·L- 1及以上浓度蟾蜍灵对SMMC772 1细胞具有显著细胞毒作用 ,形态学和DNA片段化检测证实蟾蜍灵诱导的细胞死亡以凋亡为主 ;p2 1waf1/cip1在蟾蜍灵诱导下表达上调 ,同时PCNA的表达下降 ,两者呈负相关 (P <0 .0 1) .提示蟾蜍灵通过上调p2 1waf1/cip1表达 ,下调PCNA表达 。

苦参碱诱导SMMC-7721细胞分化过程中侵袭转移相关指标的实验研究

目的 :研究苦参碱诱导人肝癌SMMC 772 1细胞分化过程中对其侵袭转移能力的抑制作用。方法 :SMMC 772 1细胞体外培养 ,0 5 g/L、0 8g/L、1 0 g/L浓度的苦参碱分别处理细胞 ,通过生长曲线测定、细胞形态观察、细胞粘附试验、运动试验、侵袭试验全面观察苦参碱对该细胞株的生长增殖、形态变化、侵袭转移等各方面的诱导分化作用。结果 :经 0 8g/L和 1 0g/L浓度的苦参碱处理后 ,SMMC 772 1细胞的生长增殖明显减缓 ,恶性细胞形态逐渐向成熟细胞分化 ,肿瘤细胞与FN的粘附力、细胞穿膜运动力、对基底膜的降解力等侵袭转移相关指标均受到显著抑制。结论 :苦参碱是一种较好的诱导分化剂 ,不仅抑制细胞的生长增殖 ,诱导细胞形态分化 ,而且从细胞的粘附、运动、降解等多环节全面抑制SMMC 772 1细胞的侵袭转移能力。

三种蟾毒单体对SMMC-7721和BEL-7402人肝癌细胞生长的抑制作用

目的:探讨蟾蜍中主要蟾毒内酯类成分蟾毒灵、华蟾酥毒基、酯蟾毒配基的抗肝癌作用及机制。方法:以SMMC-7721、BEL-7402人肝癌细胞为靶细胞,以丝裂霉素为阳性对照药物,应用四甲基偶氮唑盐比色法、锥虫蓝染色和DNA染色分析法观察这3种蟾毒单体对肝癌细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。结果:蟾毒灵和华蟾酥毒基对上述肝癌细胞具有明显生长抑制作用,华蟾酥毒基较蟾毒灵作用略弱,但两者达到相同生长抑制效果所需浓度均低于丝裂霉素,酯蟾毒配基只有在较高浓度下才显示对肝癌细胞的生长抑制作用;不同浓度蟾毒灵、华蟾酥毒基对人肝癌细胞细胞膜具有破坏作用;可使人肝癌细胞阻止于G2/M期,使处于S期的细胞比例降低,并有明显诱导肝癌细胞凋亡作用。结论:蟾毒灵、华蟾酥毒基对上述人肝癌细胞具有明显生长抑制作用,具有对肝癌细胞膜的直接破坏作用和诱导凋亡作用;酯蟾毒配基抗肿瘤作用较弱。

刺梨三萜对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响

目的:观察刺梨三萜(Rosa roxburghii Tratt triterpene,RRTT)对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响,研究其可能的作用机制。方法:采用形态学观察和MTT法分析RRTT对SMMC-7721细胞增殖的影响;通过NBT还原实验和细胞培养上清液中甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)含量的测定分析RRTT对SMMC-7721分化的影响;采用AO/EB染色法和FCM检测RRTT对肿瘤细胞周期和细胞凋亡的影响;RT-PCR检测Bad mRNA的表达。结果:RRTT对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用呈时间和剂量依赖性。与阴性对照组比,随RRTT剂量的增加,NBT阳性细胞比率增加,AFP含量逐渐降低。RRTT对SMMC-7721细胞凋亡和增殖周期均无明显影响。RRTT作用后,Bad mRNA的表达下调。结论:RRTT具有体外抗SMMC-7721作用,其机制可能通过下调Bad mRNA的表达而诱导细胞分化,而与抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡无关。

莪术挥发油抑制人肝癌细胞株SMMC-7721生长的实验研究

[目的]探讨莪术挥发油对肝癌细胞生长抑制的作用机制。[方法]用荧光显微镜观察药物作用前后细胞形态学的变化 ,采用噻唑氮蓝 (MTT)法检测莪术油对细胞生长的抑制作用 ,并用流式细胞仪检测细胞周期的阻滞及凋亡率。[结果]MTT结果表明莪术油浓度与细胞生长抑制率成正比。荧光显微镜观察结果显示 ,1.0mg/mL的莪术挥发油作用24h后可有效诱导肝癌细胞凋亡 ,细胞形态产生明显的凋亡特征 ,细胞核凹陷或固缩成均一的致密物。流式细胞仪检测结果表明 ,莪术油作用后细胞凋亡率可达28.15 % ,细胞周期被阻滞在S期。[结论]莪术挥发油可抑制肝癌细胞SMMC_7721的生长 ,诱导凋亡及阻滞细胞周期是其抑制生长的重要机制。

β-谷甾醇、豆甾醇诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡

目的研究β-谷甾醇、豆甾醇诱导人肝癌细胞SMMC-7721的凋亡作用。方法 MTT法观察β-谷甾醇、豆甾醇对细胞增殖的抑制作用;激光共聚焦显微镜观察细胞形态变化;用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率、细胞内活性氧ROS、钙离子Ca2+含量、线粒体膜电位ΔΨm变化。结果β-谷甾醇、豆甾醇均明显抑制SMMC-7721细胞增殖,使细胞形态发生典型凋亡变化,凋亡率和细胞内Ca2+、ROS的含量均显著增加,线粒体膜电位降低。β-谷甾醇使细胞周期阻滞在G2/M期,而豆甾醇则同时阻滞在S期和G2/M期。结论β-谷甾醇、豆甾醇具有抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导细胞凋亡的作用。

乳香挥发油抑制人肝癌SMMC-7721细胞株增殖及诱导凋亡的作用

目的探讨乳香挥发油体外抑制人肝癌SMMC-7721细胞株增殖及诱导凋亡的作用。方法使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察乳香挥发油对SMMC-7721的增殖抑制作用;通过吖啶橙染色,观察SMMC-7721的形态学变化;使用琼脂糖凝胶电泳法检测乳香挥发油对细胞DNA降解的影响;利用流式细胞术分析乳香挥发油诱导SMMC-7721凋亡的凋亡率及对细胞周期的影响;应用间接免疫荧光法观察凋亡调控基因bax和bcl-2蛋白的表达变化。结果乳香挥发油浓度为0.7、0.07、0.007、0.0007、0.00007mg.mL-1作用24h时,能抑制SMMC-7721的生长,并呈浓度依赖性。在浓度为0.07mg.mL-1时,作用48h或72h,电泳结果显示了DNA梯状条带,流式细胞仪检测到凋亡峰,且细胞被阻滞于G1期。间接免疫荧光法的结果表明,促凋亡蛋白bax的表达增强,抗凋亡蛋白bcl-2的表达无明显变化。结论乳香挥发油能抑制肝癌细胞株SMMC-7721的增殖,并可能通过上调线粒体内bax/bcl-2的表达比例诱导SMMC-7721细胞的凋亡,而且其诱导的凋亡具有细胞周期依赖性。

红花多糖对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制作用

目的:观察红花多糖(Safflower polysaccharide,SPS)对SMMC-7721肝癌细胞增殖的抑制作用。方法:不同浓度SPS处理体外培养的SMMC-7721细胞株,采用MTT法测定SPS对SMMC-7721细胞增殖的影响;倒置显微镜观察细胞形态学变化;吖啶橙(AO)染色荧光显微镜观测以及Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。结果:MTT法检测结果显示SPS对人肝癌SMMC-7721细胞体外增殖具有明显的抑制作用,该抑制作用呈明显的时间和剂量依赖性(P<0.05或P<0.01)。光镜下可见SPS组贴壁细胞数明显减少,细胞变小、变圆,折光性差,贴壁不牢,悬浮细胞增多。AO染色荧光显微镜下观察,24h部分细胞出现胞质浓缩,体积缩小,核固缩,染色增强,荧光更为明亮,形成致密浓缩的绿色荧光等;48h和72h部分细胞可见细胞核固缩为新月状。流式细胞术结果显示细胞凋亡率随药物浓度增加亦呈增长趋势。结论:SPS能显著抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长且呈明显的量效和时效关系。SPS可诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡,具有一定的剂量依赖性。

半枝莲提取物诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其对凋亡相关蛋白表达的影响

目的探讨半枝莲提取物(Scutellaria barbata D.Don extract,SBE)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2,Survivin和Caspase-3表达的影响。方法体外培养SMMC-7721细胞,以2.5,5和10 mg.L-1SBE处理48 h,并以2.5 mg.L-1顺铂(DDP)作为阳性对照。用MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,二步法免疫组化检测Bcl-2,Survivin和Caspase-3蛋白表达。结果与正常对照组相比,SBE各浓度组细胞抑制率显著升高(P(0.001),细胞凋亡率明显上升(P(0.01),Caspase-3蛋白表达显著上升(P<0.01或P<0.05),Bcl-2和Survivin蛋白表达明显下降(P<0.01或P<0.05)。结论SBE具有诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用,其分子机制可能与上调Caspase-3蛋白表达以及下调Bcl-2和Survivin蛋白表达有关。

藤黄酸促进bax和p53表达诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡(英文)

目的:观察藤黄酸(gambogicacids,GA)对肝癌细胞凋亡的诱导作用并探讨其分子作用机制。方法与结果: 采用MTT比色法检测藤黄酸对人肝癌和人正常肝细胞增殖作用的影响,结果表明,藤黄酸对人肝细胞性肝癌SMMC 7721 细胞株和QGY 7701细胞株有明显增殖抑制作用,并呈剂量依赖性,而对正常人肝组织L 02细胞株作用相对较弱;光镜及电镜形态学观察结果显示,给予GA后,肝癌细胞发生明显的细胞凋亡形态学变化,如细胞体积变小,细胞核固缩,出现凋亡小体等;采用RT PCR和Westernblotting方法检测baxmRNA以及bax和p53蛋白表达变化,结果表明GA可诱导baxmR NA及bax和p53蛋白表达上调;琼脂糖凝胶电泳显示,给予GA后,SMMC-7721裸小鼠移植瘤组织呈现典型的DNAladder 电泳梯状条带。结论:藤黄酸可显著抑制人肝癌细胞的增殖,其分子作用机制可能通过促进bax和p53表达上调,从而诱导人肝细胞性肝癌细胞凋亡。

复方苦参注射液对人肝癌SMMC-7721肿瘤细胞作用的实验研究

选用人肝癌SMMC－7721肿瘤细胞，分别采用MTT法、流式细胞仪检测复方苦参注射液对人肝癌SMMC-7721肿瘤细胞体外增殖抑制率、细胞周期、凋亡率的影响。提示18．75～300μl／ml的复方苦参注射液在作用48h时对人肝癌SMMC-7721肿瘤细胞的增殖抑制率在12．3％～82．5％，随着浓度的增加，细胞增殖抑制率逐渐上升，呈剂量依赖性。复方苦参注射液终浓度75μl／ml作用后的人肝癌SMMC-7721肿瘤细胞G0～G1期明显增高，S期、G2～M期的细胞比例明显减少，凋亡率（58．21％）明显高于对照组（4．17％）。提示复方苦参注射液对人肝癌SMMC-7721细胞具有明显的增殖抑制作用，并影响细胞周期，促进其凋亡。

白毛藤提取物对肝癌SMMC-7721细胞增殖及c-myc基因表达的抑制作用

目的观察白毛藤水提液对人肝癌SMMC-7721细胞增殖及c-myc基因mRNA表达水平的影响,探讨中药白毛藤的抗癌作用机制。方法用不同浓度白毛藤水提取物处理肝癌SMMC-7721细胞,观察细胞形态变化,用台盼兰染色并作细胞计数,cck-8试剂盒检测不同药物浓度组的细胞增殖抑制情况。RT-PCR检测c-myc基因mRNA表达水平。结果倒置显微镜下可见给药组细胞数目明显减少,且随药物浓度增加其抑制效果增强。WST-8法显示,在药物浓度为2,4,8,16 mg/ml时,细胞增殖明显受到剂量依赖性抑制,其抑制率分别为24.37%,50.07%,66.14%,83.23%。细胞中c-myc基因mRNA表达水平降低,并与药物浓度呈明显的量效关系。结论白毛藤可显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,下调c-myc基因mRNA表达,这可能是白毛藤的抗癌作用的部分机制。

褪黑素、顺铂协同抑制人肝癌细胞SMMC-7721的机制研究

目的 研究褪黑素 (melatonin ,MLT)、顺铂 (cisplatinumum ,DDP)联用对人肝癌细胞SMMC 772 1的抑制作用机制。方法 用不同浓度的褪黑素、顺铂及二者联用处理人肝癌细胞株SMMC 772 1,采用MTT法测定细胞抑制率 ;流式细胞仪分析细胞周期及凋亡 ;通过酶解可见光底物DEVD pNp测定Caspase3的活性 ;Westernblot分析p2 7Kip1蛋白表达。结果 ①褪黑素、顺铂单独应用和联合应用均能抑制SMMC 772 1生长 ,且低浓度联合应用可达到甚至超过单用高浓度顺铂的抑制效果。②褪黑素无论与顺铂联用与否均能激活Caspase3,诱导细胞凋亡 ,而顺铂单独使用无此效应。③褪黑素与顺铂均可导致细胞周期阻滞 ,二者联用更明显。④褪黑素无论与顺铂联用与否均明显诱导p2 7Kip1的表达 ,而顺铂单独使用无此作用。结论 褪黑素能够通过诱导细胞凋亡和促进p2 7Kip1表达协同增强顺铂抑制肝癌细胞作用。

Survivin反义核酸对SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

Surv iv in是凋亡抑制蛋白(IAP)家族的一个成员,具有强大的抗细胞凋亡功能,在几乎所有肿瘤组织中特异性表达,而在正常成年终末分化组织中低表达甚至不表达。本研究针对Surv iv in mRNA序列设计了反义寡核甘酸,RT-PCR检测表明,该序列反义寡核苷酸可明显降低细胞中surv iv in基因的mRNA含量;W estern印迹显示Surv iv in蛋白水平也被降低。M TT比色实验法检测结果说明人Surv iv in反义寡核苷酸抑制SMM C-7721细胞增殖,抑制率为43%,远高于无义寡核苷酸组和空白对照组。反义寡核苷酸还显著增强SMM C-7721细胞对于抗肿瘤药高三尖杉酯碱的敏感性,TUNEL法检测结果显示,在较低高三尖杉酯碱浓度下,反义寡核苷酸转染细胞的凋亡率明显高于其它对照组。本研究结果提示,surv iv in表达的靶向抑制有望应用于肿瘤的辅助治疗之中。

薏苡仁脂肪酸类成分对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞周期及细胞凋亡的影响

目的研究薏苡仁脂肪酸类成分对人肝癌细胞株SMMC-7721增值的影响及作用机制初探。方法采用MTT法考察不同给药剂量,不同给药时间下薏苡仁脂肪酸类成分对SMMC-7721细胞的增值抑制作用及其与时间、剂量的关系;碘化丙啶PI单染色法检测薏苡仁脂肪酸作用后,SMMC-7721细胞周期DNA水平变化;Annexin V-EGFP/PI双染法研究薏苡仁脂肪酸对SMMC-7721细胞凋亡率的影响。结果不同质量浓度的薏苡仁脂肪酸作用SMMC-7721细胞24、48、72 h后,均呈现出较好的细胞增殖抑制作用,且具有明显的时间-剂量-效应关系,差异有统计学意义(P<0.05);不同质量浓度的薏苡仁脂肪酸处理SMMC-7721细胞22 h后可显著增加肝癌细胞凋亡率,(P<0.001);作用36 h后,可显著降低G2/M期细胞比例,(P<0.001)。结论薏苡仁脂肪酸对人肝癌SMMC-7721细胞具有明显的抑制作用并可诱导其凋亡,其作用是通过抑制G2/M细胞周期实现的。

苦参素注射液联合顺铂对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡相关基因c-myc、bcl-2和bax表达的影响

目的探讨苦参素注射液(MI)联合顺铂(DDP)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡相关基因c-myc、bcl-2和bax表达的影响。方法分别采用MI、顺铂及MI联合顺铂干预SMMC-7721细胞。TUNEL法检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR法检测c-myc、bcl-2和bax mRNA表达,二步法免疫组化检测c-myc、bcl-2和bax蛋白表达。结果苦参素组、顺铂组和联合用药组细胞凋亡率显著上升,与对照组(不干预)比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),联合用药具有单纯相加或协同作用;联合用药组的细胞凋亡率显著增加,bax mRNA和蛋白表达显著升高,c-myc、bcl-2 mRNA和蛋白表达显著减少,与DDP单药组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论苦参素注射液联合顺铂具有单纯相加或协同诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡作用,其机制可能与bax基因表达上调和c-myc、bcl-2基因表达下调有关。

壳寡糖抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖及其机制探讨

探讨壳寡糖抑制人肝癌细胞株SMMC-7721的增殖作用及其分子机制。采用噻唑蓝(MTT)法检测壳寡糖的细胞增殖抑制作用;利用流式细胞仪检测肝癌细胞的凋亡情况;用RT-PCR和Western blot方法研究壳寡糖引起凋亡的原因。结果显示,0.8mg/mL的壳寡糖能够抑制SMMC-7721细胞增殖,并且促进SMMC-7721细胞的凋亡,其原因是壳寡糖能够上调促凋亡蛋白Bax的表达。