同源小鼠SMMC/B与SMMC/C珠蛋白β肽链胰酶肽段变化的比较

目前生物医学应用的纯化小鼠,多采用近亲交配纯化法。其新的生物学性状的获得是由于在近交繁殖过程中获得了新的基因型。因此了解这种小鼠的遗传关系、基因纯度和基因变异,对于小鼠的培育和使用都具有十分重要的意义。本文拟对本校培育的两株同源近交小鼠Hbb基因的遗传特性和相互关系的研究结果加以讨论。

苦参素注射液联合顺铂对肝癌SMMC-7721细胞增殖抑制作用及其机制

目的探讨苦参素注射液(matrine injection,MI)联合顺铂(cisplatin,DDP)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖抑制作用及其机制。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞抑制率,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期分布,半定量RT-PCR法检测c-myc mRNA表达,二步法免疫组化检测c-Myc、P27和CyclinD1蛋白表达。结果 MI、DDP单独应用均对人肝癌SMMC-7721细胞有抑制作用(P<0.01或P<0.05),联合用药具有协同效应。与单药组相比,联合用药组的细胞抑制率显著上升(P<0.05或P<0.01),G0/G1期细胞比例显著升高(P<0.05),S期细胞比例明显减少(P<0.05),P27表达显著上升(P<0.05),c-myc mRNA和蛋白、CyclinD1表达显著降低(P<0.05)。结论 MI联合DDP具有明显的协同抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖的作用,使细胞周期阻滞于G0/G1期,其机制可能与上调P27、下调c-myc基因和CyclinD1表达有关。

白毛藤提取物对肝癌SMMC-7721细胞增殖及c-myc基因表达的抑制作用

目的观察白毛藤水提液对人肝癌SMMC-7721细胞增殖及c-myc基因mRNA表达水平的影响,探讨中药白毛藤的抗癌作用机制。方法用不同浓度白毛藤水提取物处理肝癌SMMC-7721细胞,观察细胞形态变化,用台盼兰染色并作细胞计数,cck-8试剂盒检测不同药物浓度组的细胞增殖抑制情况。RT-PCR检测c-myc基因mRNA表达水平。结果倒置显微镜下可见给药组细胞数目明显减少,且随药物浓度增加其抑制效果增强。WST-8法显示,在药物浓度为2,4,8,16 mg/ml时,细胞增殖明显受到剂量依赖性抑制,其抑制率分别为24.37%,50.07%,66.14%,83.23%。细胞中c-myc基因mRNA表达水平降低,并与药物浓度呈明显的量效关系。结论白毛藤可显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,下调c-myc基因mRNA表达,这可能是白毛藤的抗癌作用的部分机制。

羟基喜树碱通过线粒体途径诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的观察

目的:研究羟基喜树碱是否可通过线粒体途径诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡.方法:将不同浓度的羟基喜树碱作用于肝癌细胞SMMC-7721,用MTT法检测细胞增殖,光镜观察细胞形态;用荧光染料MitocaptureTM检测线粒体跨膜电位、用Western blot法检测细胞色素C从线粒体的释放;用AnnexinⅤ-FITC,hoechst法及电镜检测细胞的凋亡状况.结果:羟基喜树碱对肝癌细胞SMMC-7721的增殖有明显的抑制作用,IC50约是80 mg/L.当用80 mg/L羟基喜树碱作用不同时间后:线粒体膜跨电位下降并伴随有细胞色素C从线粒体至细胞质的释放;细胞膜的磷脂酰丝氨酸外翻;细胞核染色质固缩,呈致密浓染的凋亡状态.结论:羟基喜树碱通过线粒体途径引起线粒体跨膜电位下降与细胞色素C的释放可能是其诱导肿瘤细胞凋亡的途径之一.

雷氏大疣蛛毒素对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖及细胞周期的影响

目的探讨雷氏大疣蛛M acrothele raven i毒素对人肝癌细胞SMM C-7721增殖及细胞周期的抑制作用,进一步探讨其作用的分子机制。方法采用M TT法测定雷氏大疣蛛毒素对SMM C-7721细胞增殖作用的影响;采用[3H]-T dR掺入法检测雷氏大疣蛛毒素作用前后SMM C-7721细胞DNA合成的变化;采用流式细胞术(FCM)探讨雷氏大疣蛛毒素对SMM C-7721细胞凋亡率和细胞周期的影响;采用W estern B lot方法研究雷氏大疣蛛毒素对细胞周期相关c-m yc蛋白表达的影响。结果M TT方法表明雷氏大疣蛛毒素对SMM C-7721细胞增殖有较强的抑制作用(P<0.05),时效和量效关系良好。雷氏大疣蛛毒素可以抑制SMM C-7721细胞DNA的合成。流式细胞仪检测结果发现雷氏大疣蛛毒素作用后SMM C-7721细胞凋亡率增加,细胞周期阻滞在G2/M期。W estern B lot方法进一步检测到雷氏大疣蛛毒素作用SMM C-7721细胞72 h后,c-m yc蛋白表达减弱。结论雷氏大疣蛛毒素可以抑制人肝癌细胞SMM C-7721的增殖和DNA的合成,其机制可能是诱导细胞凋亡,使细胞周期相关c-m yc蛋白表达减弱,导致细胞周期的变化。

镰形棘豆对SMMC-7721细胞线粒体膜电位和凋亡相关蛋白表达的影响

目的研究藏药镰形棘豆对SMMC-7721人肝癌细胞活性、线粒体膜电位,细胞色素C(Cyt C)及Caspase-3蛋白表达的影响与细胞凋亡的关系。方法以镰形棘豆总黄酮0.05、0.075、0.1g/L处理肝癌细胞SMMC-7721,24h后观察细胞的生长状况;镰形棘豆总黄酮作用于SMMC-7721细胞后,流式细胞仪检测细胞总体凋亡率和线粒体膜电位,Western blot检测对凋亡相关蛋白Cyt C及Caspase-3表达的影响。结果结果表明,镰形棘豆总黄酮抑制肝癌细胞SMMC-7721的生长,呈浓度依赖关系;镰形棘豆作用后可观察到凋亡细胞的比例升高;可导致细胞的线粒体跨膜电位明显降低,与药物浓度呈负相关。中、高剂量组的细胞中Cyt C及Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.01)。结论镰形棘豆总黄酮诱导SMMC-7721细胞的凋亡可能是通过线粒体途径,并且与影响Cyt C及Caspase-3的表达有关。为镰形棘豆抗肿瘤的作用机制的实验和临床研究提供依据。

生长抑素类似物对肝癌细胞凋亡及c-myc蛋白表达的影响

目的 探讨生长抑素类似物 8肽 (SS 8)对人原发性肝癌细胞凋亡和c myc蛋白表达的影响。 方法 体外培养肝癌细胞SMMC 772 1 ,用 1 0 μg/mlSS 8处理后 ,流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡率和c myc蛋白的表达。 结果 与对照组相比 ,SS 8使实验组S期和G2 /M期细胞数减少、G0 /G1 期细胞数增加 ,两组细胞的凋亡率分别为 6 .1 %和1 4 .2 % ,差异有显著性意义 (P<0 .0 5)。经SS 8作用 2 4h后 ,实验组c myc蛋白表达水平为 0 .833± 0 .0 35 ,与对照组相比差异无显著性意义 (P>0 .1 0 ) ,而在SS 8作用 48、72、96、1 2 0和 1 4 4h后 ,实验组c myc蛋白表达水平分别为 0 .81 8±0 .0 4、0 .72 1± 0 .0 2 9、0 .669± 0 .0 2 6、0 .648± 0 .0 4 5和 0 .642± 0 .0 2 8,较对照组显著降低 (P<0 .0 5)。结论 SS 8有诱导肝癌细胞SMMC 772 1凋亡和降低c

3株亲缘小鼠珠蛋白β肽链分子遗传学分析

本文报告了作者培育的近交株SMMC/b(简称b),SMMC/c(简称c)和非近交亲代昆明种(简称K)等3株小鼠血红蛋白(简称Hb)β肽链的结构变化。解链分析表明,K小鼠β肽链有两种类型,1种(Ksingle)与b、c小鼠一样,只有1条β肽链,它们的繁育等位基因型分别为Hbb^(Ksingle)、Hbb^b和Hbb^c;另1种(Kpair)则有2条β肽链,其繁育等位基因型为Hbb^(Kpair)(即Hbb^(Kmaj)/Hbb^(Kmin))。这一事实表明,Hbb^(Kpair)等位基因是由两个连锁基因组成,为两个结构不同的β肽链编码,即βKmaj和βKmin。本文对Hbb^(Ksingle)在b和c株小鼠中的遗传固定的可能原因也作了讨论。

氯化镉和顺铂联合对人肝癌细胞增殖的抑制作用

背景与目的:研究氯化镉和顺铂联合对人肝癌细胞SMMC_7721增殖的抑制作用。材料与方法:采用MTT法测定不同浓度氯化镉和顺铂对人肝癌细胞SMMC_7721增殖的抑制作用;应用两药相互作用指数进行联合作用分析。结果:0.56、1.12、2.25μg/ml的氯化镉联合0.25、0.5、1.0μg/ml的顺铂可协同抑制SMMC_7721增殖,且随着作用时间延长,协同抑制作用增强(P<0.05或P<0.01)。结论:氯化镉与顺铂联合应用可以协同抑制人肝癌细胞SMMC_7721的增殖。

亚硝酸钠对人肝癌细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨亚硝酸盐对人肝癌细胞增殖和凋亡作用。方法用不同浓度的亚硝酸钠处理人肝癌SMMC-7721细胞不同时间,用MTT分析细胞增殖,荧光显微镜下观察细胞分裂指数和凋亡率,RT-PCR分析c-myc mRNA变化,Westernblot分析缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达。结果亚硝酸钠诱导SMMC-7721细胞增殖和凋亡呈双相剂量效应,亚硝酸钠在低浓度时(20～200 mg.L-1),刺激细胞增殖,抑制细胞凋亡,在高浓度时(>800 mg.L-1),抑制增殖,促进凋亡。20～200 mg.L-1亚硝酸钠处理细胞可以明显增加c-myc mRNA和HIF-1α蛋白表达。结论亚硝酸钠在一定浓度范围内刺激SMMC-7721细胞增殖,但是超过一定剂量则诱导细胞凋亡。

视黄酸对人肝癌细胞蛋白激酶的影响

视黄酸(RA)处理SMMC-7721人肝癌细胞株72小时后,胞浆、膜性组分的蛋白激酶C(PK-C)的活力及比活力均下降,活力分别下降44.9％和48.8％,比活力下降42.7％和35.0％。然而,胞浆与膜性组分的活力,比活力比值在RA处理前后并无十分明显的变化,这提示在RA作用过程中,未发生PK-C的膜-浆转位。蛋白激酶A(PK-A)的变化则相反,RA处理72小时,活力、比活力上升了295％,258％。PK-A/PK-C的活力比值则从0.342增加到1.849,比活力比值从0.210增加到0.897。因PKC和PKA分别和细胞的去分化性增殖和分化有关,故上述结果和我们已报道的RA可抑制SMMC-7721细胞株的增殖和促进其分化相一致。

转录因子C/EBPβ对肝癌细胞SMMC-7721影响

目的探讨靶向CCAAT/增强子结合蛋白-β(C/EBPβ)基因沉默对肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡、迁移的影响。方法设计C/EBP-β及e GFP、shRNA序列,装入p LKO.1-TRC质粒,进行慢病毒包装,感染肝癌SMMC-7721细胞,嘌呤霉素筛选并培养稳定干扰细胞株,cell counting kit-8(CCK-8试剂盒)法、transwell细胞迁移实验分别检测沉默C/EBP-β基因对SMMC-7721细胞增殖和迁移能力的影响,蛋白印迹(Western blot)检测干扰效率及沉默C/EBP-β基因对SMMC-7721细胞的凋亡相关蛋白影响。结果沉默C/EBP-β基因的SMMC-7721-p LKO-sh-C/EBP-β肿瘤细胞的增殖速度明显提高(相对增值率136.8%,P<0.05),细胞迁移能力也明显增强(迁移抑制率为-292.3%,P<0.05),且细胞周期蛋白cyclin B1的表达增强(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达增强(P<0.05),凋亡相关蛋白Bax的表达下降(P<0.05)。结论沉默C/EBP-β对肝癌细胞SMMC-7721的增殖、迁移有促进作用,对其凋亡有抑制作用。

Smac联合顺铂对人肝癌细胞凋亡调控因子影响

目的研究第二线粒体源的半胱天冬酶激活物(Smac)基因联合顺铂对人肝癌细胞SMMC-7721中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3、caspase-9和细胞色素c(Cyt c)蛋白表达的影响。方法利用脂质体介导的方法将Smac转染入SMMC-7721,G418筛选后采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白印迹(western blot)法检测筛选所得SMMC-7721/Smac细胞中Smac mRNA和蛋白的表达,四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线;顺铂处理后采用免疫细胞化学法检测细胞中caspase-3、caspase-9和Cyt c蛋白的表达。结果 SMMC-7721/Smac细胞中Smac mRNA和蛋白表达均明显增加,12～120 h A490值为0.28～0.70,均明显低于同一时间点的SMMC-7721(0.31～1.10)(P<0.05);与SMMC-7721比较,SMMC-7721/Smac细胞中caspase-3和Cyt c蛋白表达均增高,累积光密度值(IOD)分别从19 939/14 924增至28 347/21 017(P<0.05);顺铂作用下,SMMC-7721和SMMC-7721/Smac细胞中caspase-3、caspase-9和Cyt c蛋白表达均增加,且后者更明显;剂量为25μg/mL时,SMMC-7721/Smac的caspase-3、caspase-9的IOD分别从对照的28 347/22 412增至46 696/39 728(P<0.001)。结论 Smac稳定过表达联合顺铂可明显增强细胞中凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9和Cyt c表达,从而促进细胞凋亡。

氧化苦参碱抗丙型肝炎病毒的体外实验研究

目的观察氧化苦参碱体外抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的活性。方法借助脂质体将重组ＨＣＶ基因（ｐＢＫ－ＨＣＶ）转染ＳＭＭＣ－７７２１细胞，并以此为模型，通过ｂＤＮＡ信号扩增法定量检测细胞内ＨＣＶ ＲＮＡ的变化，观察氧化苦参碱对ＨＣＶ ＲＮＡ的抑制作用； ＭＴＴ比色法观察药物的细胞毒性。结果建立了重组ＨＣＶ基因转染的稳定表达细胞模型，可作为药物研究的工具。氧化苦参碱浓度为１００— １０００μｇ／ｍｌ时能明显降低细胞内ＨＣＶＲＮＡ水平，有效浓度范围内无明显细胞毒性作用。结论氧化苦参碱能够在细胞水平有效地抑制ＨＣＶ ＲＮＡ，具有直接抗ＨＣＶ作用。