超表达蛋白激酶B对SMMC7721肝癌细胞增殖和凋亡的影响

采用脂质体转染的方法 ,将含持续激活蛋白激酶B的真核表达质粒转染到SMMC 772 1肝癌细胞中 ,研究蛋白激酶B对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响 .用RNA印迹及蛋白激酶B测活鉴定 ,并获得稳定表达持续激活蛋白激酶B的细胞株 ,用MTT法、软琼脂克隆形成率及细胞周期测定等方法检测超表达蛋白激酶B的 772 1细胞增殖情况 ,结果显示超表达蛋白激酶B的 772 1细胞生长能力增强 ,软琼脂克隆形成率增高 ,S期细胞增多 ,p2 7Kip1表达下降 .用流式细胞术检测悬浮培养诱导的细胞失巢凋亡 ,发现超表达蛋白激酶B能抑制细胞失巢凋亡 .上述结果提示蛋白激酶B能促进肝癌细胞增殖 ,抑制细胞凋亡 .

刺梨三萜对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响

目的:观察刺梨三萜(Rosa roxburghii Tratt triterpene,RRTT)对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响,研究其可能的作用机制。方法:采用形态学观察和MTT法分析RRTT对SMMC-7721细胞增殖的影响;通过NBT还原实验和细胞培养上清液中甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)含量的测定分析RRTT对SMMC-7721分化的影响;采用AO/EB染色法和FCM检测RRTT对肿瘤细胞周期和细胞凋亡的影响;RT-PCR检测Bad mRNA的表达。结果:RRTT对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用呈时间和剂量依赖性。与阴性对照组比,随RRTT剂量的增加,NBT阳性细胞比率增加,AFP含量逐渐降低。RRTT对SMMC-7721细胞凋亡和增殖周期均无明显影响。RRTT作用后,Bad mRNA的表达下调。结论:RRTT具有体外抗SMMC-7721作用,其机制可能通过下调Bad mRNA的表达而诱导细胞分化,而与抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡无关。

白毛藤提取物对肝癌SMMC-7721细胞增殖及c-myc基因表达的抑制作用

目的观察白毛藤水提液对人肝癌SMMC-7721细胞增殖及c-myc基因mRNA表达水平的影响,探讨中药白毛藤的抗癌作用机制。方法用不同浓度白毛藤水提取物处理肝癌SMMC-7721细胞,观察细胞形态变化,用台盼兰染色并作细胞计数,cck-8试剂盒检测不同药物浓度组的细胞增殖抑制情况。RT-PCR检测c-myc基因mRNA表达水平。结果倒置显微镜下可见给药组细胞数目明显减少,且随药物浓度增加其抑制效果增强。WST-8法显示,在药物浓度为2,4,8,16 mg/ml时,细胞增殖明显受到剂量依赖性抑制,其抑制率分别为24.37%,50.07%,66.14%,83.23%。细胞中c-myc基因mRNA表达水平降低,并与药物浓度呈明显的量效关系。结论白毛藤可显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,下调c-myc基因mRNA表达,这可能是白毛藤的抗癌作用的部分机制。

热疗对SMMC-7721肝癌细胞形态、增殖、凋亡的影响

目的探讨热疗对SMMC-7721肝癌细胞的影响。方法将SMMC-7721肝癌细胞置恒温循环水浴锅中(42.5±0.5)℃孵育1h,然后放入37℃、5%CO2的培养箱中继续培养,分别于热处理后0、6、12、24h采用倒置显微镜(LM×400)观察细胞形态变化,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,予Annexin V/PI染色后用流式细胞仪检测细胞凋亡,予366EC和FITC-羊抗鼠IgG处理细胞后用流式细胞仪检测细胞DR5表达,用Fluo-3/AM负载细胞检测胞内Ca2+浓度的变化。结果热疗可导致肿瘤细胞形态改变,表现为细胞变小,变圆,脱落,出现空泡;热疗可抑制细胞增殖,细胞热疗后0、6、12、24h细胞抑制率分别为22.18%、26.76%、31.30%、36.62%。热疗后0h细胞凋亡率为15.00%,其中早期凋亡率为2.00%,晚期凋亡率为13.00%;热疗后6h细胞凋亡率为65.45%,其中早期凋亡率为43.23%,晚期凋亡率为22.22%;热疗后12h细胞凋亡率为12.32%,其中早期凋亡率为4.60%,晚期凋亡率为7.72%;热疗后24h细胞凋亡率为22.58%,其中早期凋亡率为7.15%,晚期凋亡率为15.43%。热疗后0、4、8、12、24h细胞内钙离子浓度分别为18.13、7.87、13.01、37.23μmol/L,对照组为14.28μmol/L。热疗后0、6、12、24h细胞膜DR5表达率分别为79.74%、83.22%、91.28%、92.52%,对照组为83.02%。结论热疗导致肿瘤细胞凋亡的因素是复杂的,DR5表达增加和细胞内Ca2+增加是原因之一;热疗可增加肿瘤细胞DR5的表达,提示热疗加化疗或其他治疗可能会增加疗效。

清肝化瘀方药含药血清对肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响

目的 :观察用两种方法制备的清肝化瘀方药含药血清对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 :中药血清A为正常状态下大鼠的含药血清 ,中药血清B为病理状态下大鼠的含药血清 ,应用MTT比色法比较两种中药血清对人肝癌细胞SMMC 772 1的抑制作用。用流式细胞术检测中药血清B对肝癌细胞凋亡和细胞周期的影响。结果 :中药血清A对肝癌细胞SMMC 772 1增殖有轻微的抑制作用。中药血清B对肝癌细胞有明显的抑制作用 ,两种血清的抑制效应均呈时间依赖性。中药血清B还能促进肝癌细胞凋亡 ,使细胞滞留于G0 /1期 ,降低SPF和PI。结论 :病理状态下长期给药制备的清肝化瘀方药含药血清能够明显抑制人肝癌细胞增殖 ,促进其凋亡。

蛇床子素诱导内质网应激抑制SMMC7721人肝癌细胞增殖的机制研究

目的研究蛇床子素抑制肝癌细胞增殖的机制。方法采用20-100μM蛇床子素干预SMMC7721人肝癌细胞24 h、48 h和72 h,运用MTT方法检测细胞增殖;采用20-80μM蛇床子素干预SMMC7721肝癌细胞24 h,运用流式细胞术检测细胞凋亡及Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达;采用60μM蛇床子素干预SMMC7721肝癌细胞48 h,运用流式细胞术检测细胞周期,以实时荧光定量PCR技术检测GRP78、DDIT3、GADD34、ATF4、EIF2A、GDF15、CDKN1B、FOXO3、RICTOR、SGK1基因表达,Western blot方法检测CyclinD1、CyclinE1、p27Kip1和CDK4细胞周期蛋白及GRP78、GRP94、PERK、XBP-1s、CHOP、peIF2α(Ser51)内质网应激蛋白表达。各实验均以0.1%DMSO为对照组,并以0.1μM毒胡萝卜素为内质网应激诱导剂组。结果与对照组比较,100μM蛇床子素干预24 h显著抑制SMMC7721肝癌细胞增殖,其抑制率为36.76%(P<0.05);60-100μM蛇床子素干预48 h后显著抑制SMMC7721肝癌细胞增殖,抑制率为30.84%-52.49%(P<0.05);40-100μM蛇床子素干预72 h后显著抑制SMMC7721肝癌细胞增殖,抑制率为32.7%-73.15%(P<0.05)。大于60μM蛇床子素可诱导SMMC7721肝癌细胞晚期凋亡且显著抑制促凋亡蛋白Bax表达(P<0.05)。60μM蛇床子素干预SMMC7721肝癌细胞48 h后,G1期细胞数增加、G2期和S期减少,且CyclinD1、CyclinE1和p27Kip1蛋白表达显著被抑制(P<0.05)。20-80μM蛇床子素处理SMMC7721肝癌细胞24 h后,均显著促进GRP78、DDIT3(CHOP)、ATF4、FOXO3、RICTOR和SGK1基因表达(P<0.05);20μM蛇床子素显著促进GADD34和EIF2A基因表达(P<0.05);80μM蛇床子素显著促进GDF15基因表达(P<0.05),且CHOP、XBP-1s蛋白表达显著增强。结论蛇床子素通过诱导内质网应激反应以抑制SMMC7721肝癌细胞增殖,从而发挥抗肝癌活性。

高压芒刺静电场抑制人肝癌细胞SMMC7721增殖的研究

目的:研究高压芒刺静电场(high-voltage prick electrostatic field,HVPEF)对肿瘤细胞增殖的抑制作用.,方法:分别以电压为6kV、10kV和14kV的HVPEF作用于体外培养的人肝癌细胞SMMC7721,绘制细胞生长曲线,并用MTT法和流式细胞术检测电场对细胞增殖的抑制效果。结果:HVPEF处理后,各实验组细胞生长受到不同程度抑制,细胞死亡率升高(P<0.01),细胞增殖活性分别降为对照组的75.7%、88.5%和72.2%,且存在统计学差异(P<0.05)。结论:一定强度的高压芒刺静电场作用能够有效抑制肿瘤细胞增殖。

LINE-1 ORF-1p过表达对肝癌细胞株SMMC7721增殖和锚定非依赖性生长的影响

目的研究逆转座子L1编码蛋白ORF-1p的表达对肝癌细胞株SMMC7721细胞增殖的影响。方法利用带Flag标签的L1 ORF1表达载体,转染SMMC7721细胞;采用Western blot法检测反转座子L1 ORF1编码蛋白ORF-1p的表达;采用软琼脂成集落实验和相关报告基因检测ORF-1p表达对肝癌细胞p53、p15和p21活性的影响。结果在SMMC7721细胞中,Flag-ORF-1p表达能够显著促进该细胞的增殖(P<0.05),增强该细胞的锚定非依赖性生长(P<0.05),降低p53、p15和p21报告基因的活性。结论 L1基因编码蛋白ORF-1p能够促进肝癌细胞的生长、浸润以及肿瘤的形成。

熊果酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖作用的实验研究

目的:评定熊果酸对肝癌细胞SMMC-7721的增殖作用,流式细胞术研究对肝癌细胞凋亡的影响。方法:将不同浓度的熊果酸分别与人肝癌细胞SMMC-7721共同培养24,72 h后,采用中性红染色法测定吸光度(A),评定熊果酸对肝癌细胞的增殖作用,流式细胞术研究其对肝癌细胞的凋亡。结果:熊果酸对SMMC-7721细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.05或P<0.01),呈时间-剂量依赖关系,24 h和72 h半数抑制浓度(IC50)分别为12.59,8.32μg·mL-1;对肝癌细胞凋亡率为14.07%,药物浓度与凋亡率呈正相关。结论:熊果酸对肝癌细胞SMMC-7721增殖有明显抑制作用,该抑制作用可能与诱导肝癌细胞凋亡有关。

VEGFsiRNA对肝癌SMMC7721细胞株VEGF表达和增殖的抑制作用

目的:探讨VEGFsiRNA对肝癌SMMC7721细胞株VEGF表达和增殖的抑制作用。方法:采用siRNA设计法则并用计算机辅助设计9条VEGFsiRNA序列,长度为19个核苷酸;体外构建9条VEGFsiRNA序列,通过脂质体介导转入肝癌SMMC7721细胞株,培养72h,采用CCK8试验分析VEGFsiRNA(25nmol/L)对细胞增殖的抑制效果,用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白水平,流式细胞仪检测细胞周期的改变。结果:VEGFsiRNA1-VEGFsiRNA9序列对肝癌细胞的增殖有明显抑制作用,与脂质体对照组和空白对照组相比均有显著差异(P<0·05);其中,VEGFsiR-NA2、VEGFsiRNA4、VEGFsiRNA6、VEGFsiRNA7、VEGFsiRNA8、VEGFsiRNA9对细胞增殖的抑制效果均强于反义寡核苷酸组。VEGFsiRNA1-VEGFsiRNA9序列均能下调肝癌细胞VEGF蛋白的表达水平,以VEGFsiRNA7和VEGFsiR-NA2的效果最强,抑制率分别为52·65%和50·43%。VEGFsiRNA将肝癌细胞阻滞在S期,但未引起细胞凋亡现象。结论:成功地设计和合成VEGFsiRNA。后者能有效地抑制肝癌细胞的增殖,降低VEGF蛋白的表达量。

小檗碱对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨小檗碱对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞株增殖和凋亡的作用。方法应用MTT、流式细胞仪和软琼脂克隆形成试验,研究小檗碱对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞株增殖和凋亡的作用。结果小檗碱对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞有抑制增殖、促进凋亡和抑制细胞克隆形成能力。结论小檗碱对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞有抑制增殖和促进凋亡作用。

谷氨酰胺对人肝癌细胞系SMMC-7721增殖影响的体外研究

背景谷氨酰胺与肿瘤的发生密切相关,但其促体外培养肿瘤细胞增殖的机制目前尚不明确。目的探讨谷氨酰胺在体外影响人肝癌细胞系SMMC鄄7721增殖的可能机制。方法人肝癌细胞系SMMC鄄7721与不同浓度(0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0mmol/L)的谷氨酰胺共培养24h。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期变化,逆转录聚合酶链反应(RT鄄PCR)检测热休克蛋白(HSP)70的表达。结果谷氨酰胺能显著促进人肝癌细胞系SMMC鄄7721的增殖,谷氨酰胺浓度为2.0mmol/L时其促肿瘤生长的作用最强,而后又逐步下降。添加谷氨酰胺的肿瘤细胞,S期细胞比(SPF)和细胞增殖指数(PI)以及HSP70的表达较无谷氨酰胺者显著增加,且其作用随谷氨酰胺浓度的增加而增强,至浓度为2.0mmol/L时其作用最强,而后逐渐下降。结论谷氨酰胺可诱导体外培养的人肝癌细胞系SMMC鄄7721HSP70表达增高,可能是其促肿瘤生长的作用机制之一。

羽扇豆醇影响肝癌细胞株SMMC-7721增殖与凋亡的机制

目的:讨论羽扇豆醇影响肝癌细胞株SMMC-7721增殖及促进其凋亡作用机制.方法:使用不同浓度(0、2、5、10、20μg/m L)的羽扇豆醇在不同处理时间(24、36、48 h)下,处理S M M C-7721细胞株后,通过MTT法检测SMMC-7721细胞增殖情况;对使用不同浓度的羽扇豆醇处理48 h后的SMMC-7721细胞,利用流式细胞仪检测S M M C-7721细胞的细胞周期以及细胞凋亡情况,还使用Western blot检测细胞细胞增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear a n t i g e n,P C N A)、B淋巴细胞瘤-2(B-c e l l lymphoma-2,Bcl-2)基因及Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)蛋白的表达情况,最后我们通过免疫组织化学的方式检测在裸鼠体内接种的SMMC-7721细胞瘤体的微血管密度(microvessel density,M V D)值,检测羽扇豆醇对抑制肿瘤血管生成的作用.结果:相较于对照组,通过不同浓度的羽扇豆醇处理后的SMMC-7721细胞增殖水平均受到不同程度的抑制,而且既显示出量效关系又显示出时效关系;受到羽扇豆醇体外诱导处理后的SMMC-7721细胞能够使G0/G1期受到阻滞,甚至出现凋亡现象,SMMC-7721细胞的PCNA和Bcl-2蛋白表达情况下调,Bax蛋白的表达情况上调(P<0.05).肿瘤瘤体MVD值下降(P<0.01).结论:SMMC-7721细胞的增殖会因为羽扇豆醇的处理而受到抑制,并且还会因为羽扇豆醇的处理而出现凋亡.羽扇豆醇还可以抑制肿瘤瘤体血管生成.

消癌平与奥沙利铂及恩度联合对人肝癌细胞株SMMC-7721的体外增殖抑制实验

目的:通过体外实验研究消癌平(Xiaoaiping,XAP)注射液、奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)、恩度(Endostar,重组人血管内皮抑制素)单药及其与XAP的两药及三药联合应用对人肝癌SMMC-7721增殖的影响,探讨其联合用药的理论依据.方法:采用MTT法观察XAP、L-OHP、恩度单药及其XAP的两药及三药联合应用对人肝癌SMMC-7721细胞增殖抑制作用,并观察细胞形态的变化.结果:10-40μL/mL XAP和1-4μg/mL L-OHP对SMMC-7721均有明显的抑制作用,并呈时间和浓度依赖性(P<0.01和P<0.05).1-12μg/mL恩度对该细胞无增殖抑制作用.20μL/mL XAP和1μg/mL L-OHP联合对SMMC-7721细胞增殖抑制率分别为82.08%,优于对照组(P<0.01),联合具有相加作用.20μL/mL XAP与6μg/mL恩度联合则具有明显的协同作用.三药联合抑制作用更明显.结论:XAP、L-OHP单药能抑制肝癌细胞增殖;恩度无抑制作用;与XAP两药联合对肝癌细胞增殖有协同增效作用,三药联合作用更明显.

抑制AFP基因表达能直接抑制肝癌细胞系SMMC-7721增殖

甲胎蛋白(alpha fetoprotein, AFP)是哺乳动物胚胎时期由肝脏和软黄囊产生的一个主要的血清蛋白.在正常成人外周血中常常检测不到AFP的存在,而在肝癌患者外周血中,AFP常显著升高,是诊断原发性肝癌的一个重要的肿瘤标志物.

茜草蒽醌对肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制作用

目的探讨茜草提取物蒽醌单体对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制作用.方法采用MTT法、形态学、集落形成法,检测蒽醌对人肝癌细胞增殖的抑制结果.结果MTT法显示各个浓度的蒽醌对肝癌SMMC-7721细胞的增殖均有抑制作用,呈现出与药物浓度、作用时间的依赖性;生长曲线由＂S＂型逐渐变得低平;倒置显微镜下可见药物组细胞数减少,间隙增大,细胞间出现＂接触性抑制＂;集落形成率降低（P〈0.01）,集落中细胞数减少.结论茜草蒽醌对人肝癌SMMC-7721细胞生长具有抑制作用;蒽醌有可能成为抗肝癌新药,为抗癌新药的开发提供理论与实验依据.

肝癥口服液含药血清对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响

目的:探讨肝口服液含药血清对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响,为临床应用肝口服液治疗肝癌提供实验室依据。方法:选取Ⅱb或Ⅲ期肝癌病人和健康志愿者各5例,分别在用药前及用药后8周采集血清,与SMMC-7721细胞共同培养24h、48h后,应用噻唑氮蓝(MTT)比色法测定肝癌细胞SMMC-7721增殖水平。结果:HCC患者含药血清对SMMC-7721细胞增殖抑制率在24h、48h分别为45.00%3、9.32%;而健康志愿者为4.58%、7.70%,HCC患者含药血清对肝癌细胞增殖抑制作用明显高于健康志愿者。结论:肝口服液含药血清对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用并促进其凋亡,表明肝口服液有抗肿瘤作用。

无梗五加果实3种提取物对人肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响

目的:研究无梗五加果实3种提取物对人肝癌细胞SMMC-7721增殖、细胞周期和凋亡的影响,为明确其抗肿瘤作用机制提供参考。方法:采用MTT法考察低、中、高质量浓度的无梗五加果实乙醇提取物(0.92、1.84、3.68 mg/m L)、粗多糖提取物(0.06、0.12、0.24 mg/m L)和精多糖提取物(0.04、0.08、0.16 mg/m L)分别作用24、36、48 h后对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用;采用流式细胞术考察1.84 mg/m L乙醇提取物、0.24 mg/m L粗多糖提取物和0.16 mg/m L精多糖提取物分别作用24 h后对人肝癌细胞SMMC-7721细胞周期和细胞凋亡的影响。以上试验均设阴性对照(只加细胞不加药物)。结果:与阴性对照比较,无梗五加果实3种提取物均可显著抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖(P<0.01),显著降低G0/G1、G2/M期细胞的百分率(P<0.01),显著升高S期细胞的百分率(P<0.01),显著升高细胞凋亡率(P<0.05),其中以无梗五加果实乙醇提取物的作用最为明显。结论:无梗五加果实3种提取物均能抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖,阻滞其细胞周期于S期,诱导其凋亡。

奥曲肽对肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响

目的 :探讨生长抑素类似物奥曲肽 (octreotide)对人肝癌细胞SMMC - 772 1增殖和凋亡的影响。方法 :用MTT比色法分析octreotide对肝癌细胞生长的影响 ,用流式细胞仪检测细胞凋亡率 ,细胞周期分布及凋亡相关基因p5 3,bcl- 2的表达。结果 :octreotide对人肝癌细胞SMMC - 772 1的增殖存在抑制作用 ,与对照相比有明显差别 (P <0 0 1) ,这种作用表现出量效及时效关系。流式细胞仪检测发现 :octreotide处理组肝癌细胞凋亡率升高 ,p5 3基因表达增强 ,bcl- 2表达下降 ,细胞从G1期进入S期受阻。结论 :生长抑素类似物octreotide可抑制肝癌细胞SMMC - 772 1的增殖 ,并通过影响细胞的周期分布及凋亡相关基因p5 3、bcl- 2的表达 ,诱导肝癌细胞的凋亡。

蜂王浆冻干粉对人肝癌细胞系SMMC-7721增殖的影响

目的观察蜂王浆冻干粉对人肝癌细胞系SMMC-7721增殖的影响。方法体外培养人肝癌细胞系SMMC-7721,MTT比色法观察蜂王浆冻干粉水溶液及蜂王浆冻干粉含药血清对其增殖的影响。结果蜂王浆冻干粉水溶液能促进人肝癌细胞系SMMC-7721增殖,呈剂量依赖性。而蜂王浆冻干粉含药血清则能抑制该细胞的增殖,其抑制效应亦呈剂量依赖性。结论蜂王浆冻干粉的抗癌效应可能是其代谢产物或刺激机体产生的活性物质所致。