HPLC法测定血浆中伊立替康及其代谢产物SN-38、SN-38G浓度及方法学研究

目的:建立同时测定晚期结直肠癌患者血浆中伊立替康(CPT-11)及其活性代谢产物7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)和非活性代谢产物的SN-38葡萄糖醛酸化(SN-38G)的浓度测定方法,并进行方法学验证。方法:以Kromacil C_(18)为色谱柱,甲醇-水(含5 mmol·L^(-1)KH_2PO_3,p H=3.0)=55∶45为流动相,激发波长λ_(ex)=385 nm、发射波长λ_(em)=535 nm。结果:CPT-11在20~5000 ng·m L^(-1)范围内线性良好,SN-38在2~500 ng·m L^(-1)范围内线性良好,r值均为0.999。CPT-11和SN-38的提取回收率分别为53.26%~59.86%和66.83%~71.30%。CPT-11低、中、高三种浓度的日间和日内精密度均小于6.32%;SN-38低、中、高三种浓度的日间和日内精密度均小于7.02%。血浆样品反复冻融3次、室温放置8 h、进样器中放置24 h及长期冻融,稳定性均良好,样品浓度均未见显著改变。结论:使用高效液相色谱-荧光定量检测法简便、准确、灵敏,适用于晚期结直肠癌患者血浆中伊立替康及其代谢产物SN-38、SN-38G的血药浓度测定。

LC-MS/MS法同时测定人血浆中伊立替康与其主要代谢产物及在治疗药物监测中的应用

目的建立LC-MS/MS法同时测定人血浆中伊立替康及其主要代谢产物SN-38与SN-38G的浓度,并将其应用于消化道肿瘤患者的治疗药物监测。方法以伏立康唑为内标,前处理方法为0.1%甲酸-甲醇蛋白沉淀。色谱柱为Waters Atlantis T3(3.0 mm×100 mm,3μm);流动相为0.1%甲酸水溶液(A相)-甲醇(B相);采用梯度洗脱方式,流速为0.3 mL·min^-1。采用电喷雾离子源,多反应监测模式(MRM)进行质谱分析。结果伊立替康、SN-38、SN-38G分别在2.5~625、0.5~125、1.0~250ng·mL^-1与峰面积线性关系良好。日内与日间RSD均小于10%。各化合物的提取回收率均>74%,基质效应在97%~106%。结论该方法精密度和准确性好,灵敏度高,操作简便,能快速检测人血浆中伊立替康及其代谢产物SN-38、SN-38G的浓度,适用于治疗药物监测。

HPLC-MS/MS法测定人血浆中伊立替康及主要代谢产物的浓度

目的建立液质联用(HPLC-MS/MS)法同时测定人血浆中伊立替康(CPT-11)及主要活性代谢产物7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)及无活性的葡萄糖醛酸化SN-38(SN-38G)的浓度。方法以氘代伊立替康、氘代SN-38、氘代SN-38G为内标,沉淀蛋白法进行提取。色谱柱:ZORBAX XDBC8(2.1 mm×50 mm,5μm),水相:0.1%甲酸,有机相:纯甲醇,进行梯度洗脱,流速:0.35 m L·min-1。通过电喷雾离子源,以正离子多反应监测模式(MRM)进行检测,考察该方法的专属性、标准曲线和定量下限、精密度和准确度、稳定性、基质效应和提取回收率。结果伊立替康标准曲线方程为y=1.32×10-3x-5.30×10-3(r=0.999 7),在10~2000 ng·m L-1线性关系良好,定量下限为10 ng·m L-1。SN-38标准曲线方程为y=8.50×10-3x+4.00×10-3(r=0.999 5),在2~400 ng·m L-1线性关系良好,定量下限为2 ng·m L-1。SN-38G标准曲线方程为y=6.53×10-3x-1.28×10-3(r=0.9997),在5~1000 ng·m L-1线性关系良好,定量下限为5 ng·m L-1。日内与日间RSD均小于15%,平均回收率>92%。结论该方法简便快速,准确度高,灵敏度好,专属性强,适用于同时测定人血浆中伊立替康、SN-38及SN-38G的浓度。