Snail基因在小儿急性淋巴细胞性白血病中的表达及预后价值

目的 观察Snail基因在小儿急性淋巴细胞性白血病(ALL)中的表达水平,探讨其在ALL中的预后价值。方法 应用实时定量荧光定量聚合酶反应(RT-PCR)检测42例小儿ALL患者骨髓中的Snail mRNA表达,并结合初诊时临床特征进行分析。结果 (1)初诊时高白细胞组的Snail mRNA表达显著高于非高白细胞组[(32.38±2.34)vs(25.06±1.94),P<0.001];(2)治疗后达完全缓解/部分缓解组的Snail mRNA表达明显低于未缓解组[(13.89±3.54)vs(25.98±4.21),P<0.001];(3)有中枢神经系统白血病(CNS-L)组的Snail mRNA明显高于无CNS-L组[(26.47±5.59)vs(19.62±3.28),P<0.001];(4)Snail基因表达与危险分层具有明显相关性(P=0.0001),低危组Snail基因表达显著低于中危组(P=0.001)与高危组(P=0.0001),但中危与高危组间比较差异无统计学意义(t=1.37,P=0.18)。结论 Snail基因表达与初诊时白细胞数、危险分层及疗效密切相关,且与小儿ALL的CNS浸润呈正相关,可作为疗效判断与预测继发CNS-L发生的潜在观察指标。

Snail基因与食管癌细胞侵袭迁移能力的相关性分析

目的:探索Snail基因与食管癌细胞侵袭迁移能力的关系。方法:体外合成Snail序列特异性双链小干扰RNA,转染人食管癌细胞EC9706,应用RT-PCR及Western blotting方法检测干扰效果,细胞划痕实验检测细胞迁移能力变化,Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力变化。结果:经Snail特异性siRNA干扰后细胞Snail基因及蛋白表达水平明显降低,细胞的侵袭迁移能力随之降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:Snail基因与食管癌细胞的侵袭迁移能力有关,采用siRNA干扰Snail基因的表达能有效逆转食管癌细胞的侵袭迁移能力。

Snail基因mRNA与结肠癌患者预后的生物信息学分析

目的:探讨Snail在结直肠癌中的表达及其与患者预后的关系。方法:应用生物信息分析工具比对TCGA数据库中Snail基因mRNA在结直肠癌组织和癌旁组织中的表达水平;在STRING数据库中构建Snail蛋白-蛋白相互作用网络,并对相关蛋白功能和KEGG信号通路进行富集。同时,回顾性分析我院69例手术治疗的结直肠癌患者资料,根据Snail表达水平分为高、低表达组,比较两组患者总生存期(OS)和无疾病进展生存期(DFS)的差异。采用免疫组织化学法检测患者癌组织中Snail蛋白表达水平及其与患者临床病理特征的关系。结果:结直肠癌组织Snail基因mRNA表达水平明显高于癌旁组织;PDGFB基因与Snail呈正相关(r=0.624,P<0.05),SLC44A4基因与Snail呈负相关(r=–0.48,P<0.05)。Snail基因在生物学过程、细胞成分和分子功能方面分别富集于组蛋白H4脱乙酰化、ESC/E(Z)复合体和NAD依赖性组蛋白脱乙酰酶活性(H3-K14特异性)。KEGG信号通路富集于肿瘤相关信号通路、Notch信号通路、Wnt信号通路和结直肠癌相关信号通路等。生存分析显示,Snail高表达患者的OS低于低表达患者(HR=1.6,P<0.05),而Snail高、低表达患者的DFS差异无统计学意义(P>0.05)。Snail蛋白在结肠癌组织中的表达率为59.2%(41/69)。Snail蛋白高表达者在肿瘤分化程度、淋巴结转移、淋巴管侵犯率、Dukes分期等方面均差于低表达者,差异有统计学意义。结论:Snail基因在结直肠癌患者癌组织中表达水平上调,并可作为结直肠癌预后不良的分子标志物。

Snail基因在不同分化程度胃癌细胞中的表达及其意义

目的探讨Snail基因在不同分化程度人胃癌细胞中的表达及意义。方法分别以0ng/ml、5ng/ml、10ng/mlTGF-β1处理未分化、低分化、中分化的人胃癌细胞株,RT-PCR法测定Snail基因的表达。结果在0ng/ml浓度TGF-β1刺激下,不同分化程度人胃癌细胞SnailmRNA表达有显著性差异,随着肿瘤分化程度的降低,SnailmRNA表达水平增高;在5ng/ml浓度TGF-β1刺激下,不同分化程度人胃癌细胞SnailmRNA表达有显著性差异,随着肿瘤分化程度的降低,SnailmRNA表达水平增高;在10ng/ml浓度TGF-β1刺激下,不同分化程度人胃癌细胞SnailmRNA表达有显著性差异,随着肿瘤分化程度的降低,SnailmRNA表达水平增高。结论 Snail在分化程度越低的胃癌细胞中表达水平越高,Snail可以作为判断肿瘤恶性程度的辅助标志。

Snail基因慢病毒载体的构建及其促进结肠癌细胞上皮间质化的研究

【目的】构建Snail基因慢病毒载体,研究Snail基因的表达与结肠癌细胞上皮间质化的关系。【方法】利用Gateway Technology法构建Snail基因表达质粒和空白对照质粒,行慢病毒包装。成功构建Snail基因慢病毒载体后,在结肠癌细胞系caco2中转染Snail基因质粒及空白载体对照,构建稳转细胞株caco2-Snail和caco2-vc,并在LoVo细胞中瞬时转染上述质粒,对Snail及E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达进行检测,并用划痕、Tanswell实验对细胞的迁移侵袭能力进行研究。【结果】成功构建Snail基因慢病毒载体并经测序证实。在转染Snail的细胞株中有明显的Snail基因及蛋白表达,其上皮标记E-cadherin的表达比转染空载体的对照组细胞明显下调,且其迁移侵袭能力要强于对照组细胞。【结论】Snail基因慢病毒载体在宿主细胞中表达稳定可靠,可以作为研究上皮间质化很好的工具,Snail基因有明显促进结肠癌细胞上皮间质化的作用。

非小细胞肺癌组织中snail基因的表达及意义

目的为研究snail在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达水平差异以及snail的表达水平与NSCLC患者临床病理特征的关系。方法收集NSCLC患者术中切除的癌组织、配对癌旁组织以及因良性疾病切除的正常肺组织。采用实时免疫荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测snail mRNA的表达及免疫组化S-P法检测snail的蛋白水平表达。结果 NSCLC组织snail mRNA及蛋白表达均明显高于配对癌旁组织(P<0.01)及正常的肺组织标本(P<0.01);snail mRNA和蛋白阳性表达与NSCLC淋巴结转移、临床分期相关(P<0.05)。结论高表达的snail可能在某种程度上促进了NSCLC的转移,snail可以作为判定NSCLC恶性程度的参考因素及预后不良的高危因素,为snail的形态学及功能学实验的深入研究和靶向治疗提供了重要基础。

上皮细胞-间质细胞转换过程中Snail基因家族的作用

上皮细胞一间质细胞转换是控制多细胞生物形态发生的重要过程，与肾脏纤维化、癌症等疾病有关。该现象也发生在眼科的一些难治性病变中，如增生性玻璃体视网膜病变（PVR）、增生性糖尿病视网膜病变（PDR）以及青光眼滤过口纤维化形成等。Snail基因家族是诱导上皮一间质细胞转换的关键转录凶子。本文对上皮一间质细胞转换在生理和病理情况下的进展、Snail基因家族在上皮一间质细胞转换过程中的作用及其与眼部纤维化疾病的关系作一综述。

Snail家族基因功能研究进展

Snail家族基因编码具有锌指结构的转录因子,通过结合下游基因参与了多个生理水平的调控,在上皮-间质转化、胚胎发育、免疫调节、癌细胞迁移等方面具有广泛的生物学功能。Snail家族基因参与了脂肪的生成和脂代谢过程,同时也是肌生成决定因子(MyoD)的下游靶基因,也可能参与了肌肉发育调控。因此,Snail家族基因在脂肪生成、肌肉发育及脂代谢等方面发挥了重要作用,是影响哺乳动物特别是农业动物产肉性能和肉品质的一类重要候选功能基因。作者介绍了Snail家族基因及其蛋白结构和基本生物学功能,简述了Snail家族参与Wnt/β-catenin、Notch等信号通路的调控作用方式,总结了Snail家族基因在哺乳动物脂肪生成和肌肉发育中的作用和调控方式。然而,目前关于Snail家族基因在协同参与哺乳动物脂肪生成和肌肉发育中扮演的角色仍待深入研究。另一方面,一般认为发挥转录抑制作用的Snail家族近年来也被发现具有转录激活作用,这种作用是如何实现的仍未知。因此,Snail家族基因在调控动物脂肪生成和肌肉发育过程中的协同作用、脂肪生成和脂肪水解过程的动态调控及其转录激活作用的发挥是今后研究的方向,为解析Snail家族基因在肉质性状形成过程中的遗传调控机理奠定基础。

秦川牛Snail2基因扩增、序列特征及表达特性分析

试验旨在扩增秦川牛Snail2基因,构建Snail2基因在其各组织不同发育阶段及脂肪细胞不同分化时期的时空表达规律,为进一步研究Snail2基因在牛脂肪沉积中的功能及调控作用奠定基础。以秦川牛为研究对象,经PCR扩增得到Snail2基因CDS区序列,运用生物信息学软件对其功能结构进行预测,同时采用实时荧光定量PCR检测Snail2基因在新生牛和成年牛各组织及脂肪细胞成脂分化过程中的时空表达谱。结果显示,秦川牛Snail2基因编码序列全长为952 bp。不同物种系统进化树结果表明,牛Snail2蛋白在家牛、水牛、山羊、绵羊中高度保守。磷酸化位点分析发现,存在41个潜在磷酸化位点,其中周期蛋白依赖性激酶1(cyclin dependent kinase 1,CDK1)、CDK5、CKⅡ、CKⅠ等多个细胞周期相关激酶参与了Snail2蛋白的磷酸化修饰。蛋白结构域预测发现,牛、人和鼠等8个物种中有8个相似Motif。Snail2蛋白二级结构主要由不规则卷曲构成,二、三级结构预测结果一致。Snail2基因启动子区序列分析发现1个CpG岛及E2F、C/EBPα(CCAAT/enhancer binding proteins alpha)、AP2和Sp1等与脂肪生成相关的转录因子结合位点。实时荧光定量PCR结果显示,Snail2基因在牛脂肪组织中呈现较高表达水平,且随着脂肪细胞成脂分化和牛生长发育过程均呈现上升趋势,表明Snail2基因在牛脂肪沉积过程中发挥重要作用。研究结果为进一步揭示Snail2基因通过影响脂肪细胞增殖和分化进而影响肉牛脂肪沉积作用机制奠定基础。

Snail1对牛脂肪细胞增殖分化影响及作用机制的研究

旨在探究Snail 1基因对于牛脂肪细胞增殖分化的影响及其潜在的作用分子机制。本研究利用腺病毒在秦川牛脂肪细胞中过表达Snail 1基因并设置试验组和对照组各3个生物学重复,采用流式细胞术、CCK-8、EdU染色、油红O染色、甘油三酯测定、qRT-PCR和蛋白质印迹等试验方法探究Snail 1对牛脂肪细胞增殖和分化的影响;进一步通过RNA-Seq、双荧光素酶报告试验筛选其作用信号通路及靶基因。结果表明,过表达Snail 1抑制了细胞增殖(CCK-8)且减少了处于S复制期阳性细胞比例(EdU,P<0.05)。结合流式细胞术试验,结果表明Snail 1上调导致了细胞周期G1/S期阻滞。进一步的实时荧光定量PCR和蛋白质印迹结果表明,Snail 1抑制了细胞周期蛋白基因CCNB1、CCND 2的表达(P<0.05)。对诱导分化第6天牛脂肪细胞进行油红O染色和甘油三酯检测,结果表明Snail 1抑制了牛脂肪细胞的成脂分化和甘油三酯的生成。qRT-PCR分析表明,过表达Snail 1抑制了PPARγ(P=0.06)、FABP4(P<0.05)、LPL(P<0.05)基因表达,而PIK 3R3基因表达水平显著上调(P<0.01);蛋白质印迹结果表明,Snail 1表达显著抑制了FABP4蛋白表达。进一步通过RNA-Seq测序分析发现,Snail 1过表达引起的差异基因主要富集在PPAR、ECM受体互作、PI3K-AKT、MAPK、尼古丁成瘾及胰岛素分泌等信号通路。基于FIMO靶基因筛选联合RNA-Seq数据分析及荧光素酶试验等证实,转录因子Snail1可能通过靶向Wnt信号通路的拮抗剂SFRP2影响牛脂肪细胞的分化过程。Snail 1基因抑制牛脂肪细胞的增殖和分化过程,且可能通过“Snail1/SFRP2-Wnt/β-catenin-GSK3β”正反馈环参与了牛脂肪细胞分化调控过程。

转录因子Snail、Slug在人宫颈癌上皮-间质转化中的作用

目的探讨调控因子Snail、Slug对E-钙黏蛋白的调控和参与人宫颈癌细胞转移侵袭的机制。方法对20例正常宫颈组织标本及85例宫颈鳞癌标本制成石蜡包埋切片,采用免疫组织化学染色方法检测Slug基因和间质标志物波形蛋白(Vimentin)的表达;采用免疫荧光化学染色检测转录因子Snail蛋白和上皮标志物E-cadherin的表达。结果在宫颈鳞癌组织中Slug蛋白和Vimentin的阳性表达率明显高于正常宫颈组织(P<0.05),随着临床分期增高,其阳性表达率有升高趋势,但未达到统计学差异(P>0.05)。随着组织分化级别下降和肿瘤淋巴结转移,其阳性表达率明显上升(P<0.05);Snail蛋白在鳞癌组织中荧光强度高于正常宫颈组织,浸润癌组织高于宫颈CIN组织(P<0.05),随着组织分化级别下降和肿瘤淋巴结转移,其荧光强度明显增强,但差异亦无统计学意义(P>0.05);E-cadherin在正常宫颈组织中荧光强度高于肿瘤组织,宫颈CIN组织高于浸润癌组织(P<0.05),随着组织分化级别下降和肿瘤淋巴结转移,其荧光强度明显减弱(P<0.05)。结论人宫颈组织上皮-间质转化在宫颈癌侵袭进展中可能发挥重要的作用,同时Snail、Slug信号通路可能参与了宫颈癌的侵袭转移过程。

Snail1基因表达在妊娠期糖尿病大鼠氧化应激及肝脏损伤的作用机制

目的:探讨Snail1基因表达在妊娠期糖尿病大鼠氧化应激及肝脏损伤的作用机制。方法:健康成年C57BL/6雌性大鼠32只作为研究对象。采用高脂喂养联合小剂量链脲佐菌素注射的方式构建妊娠期糖尿病大鼠模型。将所有大鼠分为正常妊娠组,正常妊娠+Snail1过表达组,妊娠期糖尿病组,妊娠期糖尿病+Snail1过表达组。采用qRT-PCR检测大鼠Snail1的m RNA表达水平,并检测大鼠妊娠期体重、氧化应激指标、炎症指标和肝功能指标。结果:与正常妊娠组相比,正常妊娠+Snail1过表达组、妊娠期糖尿病组、妊娠期糖尿病+Snail1过表达组的孕鼠体重、胎鼠体重、胎盘重量、Snail1 m RNA,明显更高(P<0.05),且妊娠期糖尿病+Snail1过表达组孕鼠体重、胎鼠体重、胎盘重量、Snail1 m RNA均显著高于正常妊娠+Snail1过表达组和妊娠期糖尿病组(P<0.05);与正常妊娠组相比,正常妊娠+Snail1过表达组、妊娠期糖尿病组、妊娠期糖尿病+Snail1过表达组的FBG、FINS、HOMA-IR明显更高(P<0.05),且妊娠期糖尿病+Snail1过表达组FBG、FINS、HOMA-IR均显著高于正常妊娠+Snail1过表达组和妊娠期糖尿病组(P<0.05);与正常妊娠组相比,正常妊娠+Snail1过表达组、妊娠期糖尿病组、妊娠期糖尿病+Snail1过表达组的ROS、GSH-Px、MDA明显更高(P<0.05),且妊娠期糖尿病+Snail1过表达组ROS、GSH-Px、MDA均显著高于正常妊娠+Snail1过表达组和妊娠期糖尿病组(P<0.05);与正常妊娠组相比,正常妊娠+Snail1过表达组、妊娠期糖尿病组、妊娠期糖尿病+Snail1过表达组的TNF-α、IL-1β、IL-18明显更高(P<0.05),且妊娠期糖尿病+Snail1过表达组TNF-α、IL-1β、IL-18均显著高于正常妊娠+Snail1过表达组和妊娠期糖尿病组(P<0.05);与正常妊娠组相比,正常妊娠+Snail1过表达组、妊娠期糖尿病组、妊娠期糖尿病+Snail1过表达组的GPT、GOT、ALP明显更高(P<0.05),且妊娠期糖尿病+Snail1过表达组GPT、GOT、ALP均显著高于正常妊娠+Snail1过表达组和妊娠期糖尿病组(P<0.05)。结论:妊娠期糖尿病大鼠Snail1基因的表达上调可加重糖脂代谢紊乱,并激活下游氧化应激和炎症反应,进而加重大鼠肝脏损伤。

EMT经p38-MAPK调节乳腺癌MCF-7细胞P-gp介导的多药耐药

目的:探讨乳腺癌细胞中上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)与P-糖蛋白(P-glucoprotein,P-gp)介导的多药耐药(multidrug resistance,MDR)的关系及其可能的机制。方法:将携Snail基因的真核表达载体pcDNA-Snail转染人乳腺癌细胞MCF-7,用多柔比星(doxorubicin,DOX)诱导各组细胞耐药。免疫细胞荧光检测上皮标志物E-钙黏素(E-cadherin)、间质标志物波形蛋白(vimentin)以及P-gp的表达,MTT检测耐药细胞的增殖,RT-PCR检测Snail、MDR1、p38-MAPK mRNA的表达。结果:细胞免疫荧光显示,转染pcDNA-Snail载体后,MCF-7细胞发生EMT,E-cadherin表达显著降低,vimentin表达显著升高;P-gp在发生EMT的MCF-7细胞中表达显著升高。经DOX诱导,MCF-7/Snail细胞的耐药能力较MCF-7/DOX细胞显著增强(P<0.05)。RT-PCR显示,MCF-7细胞发生EMT后,p38-MAPK表达显著升高(P<0.05),MDR1表达较亲本细胞明显升高(P<0.01)。结论:MCF-7细胞发生EMT后,可能通过p38-MAPK引发P-gp介导的MDR。