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香蕉枯萎病菌SNF1基因的克隆及生物信息学分析 被引量:2
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作者 刘一贤 周端咏 +2 位作者 毛超 汪军 黄俊生 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第21期160-164,共5页
为了解SNF1基因在香蕉枯萎病菌致病过程中的作用以及FOC1和FOC4两个生理小种之间的致病力差异关系,采用了PCR、RT-PCR的方法扩增了2个生理小种的SNF1基因,测序并采用生物信息学软件对相似序列进行搜索、比对,并对该基因编码的预测蛋白... 为了解SNF1基因在香蕉枯萎病菌致病过程中的作用以及FOC1和FOC4两个生理小种之间的致病力差异关系,采用了PCR、RT-PCR的方法扩增了2个生理小种的SNF1基因,测序并采用生物信息学软件对相似序列进行搜索、比对,并对该基因编码的预测蛋白进行氨基酸序列比对和分析。研究结果显示,2个生理小种的SNF1基因的ORF分别为2 136、2 130 bp,二者相差6个碱基,同源性为99.5%。FOC1和FOC4的SNF1基因分别编码711、709个氨基酸,相差两个氨基酸,为丝氨酸(FOC1)和谷氨酰胺(FOC1)。生物信息学软件预测结果表明该蛋白N端不存在信号肽,但具有两个相同的功能结构域位点,分子量约为79 ku,pI为6.80。 展开更多
关键词 香蕉枯萎病菌 生理小种 snf1基因 细胞壁降解酶 致病性
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不同碳、氮源质量浓度对高山被孢霉脂质积累及SNF1复合体转录调控的影响研究 被引量:4
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作者 常璐璐 唐鑫 +3 位作者 张灏 陈永泉 陈海琴 陈卫 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期113-118,140,共7页
高山被孢霉(M.alpina)是一株具有较强脂质合成能力的产油微生物,其脂质积累受培养基中碳、氮源调控。探究了不同葡萄糖和酒石酸铵质量浓度对M.alpina生长及脂质积累的影响,并进一步研究不同碳、氮源质量浓度下M.alpina SNF1复合体各亚... 高山被孢霉(M.alpina)是一株具有较强脂质合成能力的产油微生物,其脂质积累受培养基中碳、氮源调控。探究了不同葡萄糖和酒石酸铵质量浓度对M.alpina生长及脂质积累的影响,并进一步研究不同碳、氮源质量浓度下M.alpina SNF1复合体各亚基的转录水平。结果表明:初始酒石酸铵质量浓度一定时,M.alpina脂肪酸含量随碳氮比(C/N)的增加而提高,C/N为24.6时其脂肪酸含量比C/N为4.6时提高42.6%,初始葡萄糖质量浓度一定时,氮源限制下(C/N=76.7)M.alpina脂肪酸产率达到2.6 g/L,是氮源存在时的1.5~3.2倍,与葡萄糖相比氮源水平对M.alpina脂质积累影响更为显著。氮源一定时高葡萄糖质量浓度(C/N=24.6)下SNF1复合体各亚基转录水平比对照组提高13.9~20.5倍;而氮限制导致的高C/N同样可促进其转录水平的提高。高C/N和氮限制均属于营养失衡信号,说明M.alpina SNF1转录水平的变化是其对胞外营养水平的响应方式,并与脂质积累水平具有相关性。 展开更多
关键词 高山被孢霉 snf1复合体 脂质积累 营养信号 转录调控
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玉米大斑病菌StSNF1的基因组定位、蛋白质结构预测及表达分析 被引量:1
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作者 何世道 杨瑞秀 +4 位作者 刘博 苑德鹏 姚远 孙艳秋 高增贵 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期85-90,共6页
为了明确StSNF1在玉米大斑病菌基因组中的位置,解析该基因编码蛋白的结构特征,探究该基因在侵染寄主的不同时期、分生孢子萌发侵染过程中以及不同碳源培养下的表达情况。结果表明,该基因ID号为008026214,全长3 046 bp,位于scaffold_17... 为了明确StSNF1在玉米大斑病菌基因组中的位置,解析该基因编码蛋白的结构特征,探究该基因在侵染寄主的不同时期、分生孢子萌发侵染过程中以及不同碳源培养下的表达情况。结果表明,该基因ID号为008026214,全长3 046 bp,位于scaffold_17负链的97 793-100 838位置。StSNF1与玉米圆斑病菌SNF1同源关系较近,由877个氨基酸残基编码而成。StSNF1蛋白具有氮端的蛋白激酶结构域、氮端的碳代谢产物去阻遏蛋白激酶结构域和碳端的激酶相关结构域。在蛋白激酶结构域内,具有ATP结合位点和丝氨酸/苏氨酸活性位点。Real-time PCR结果表明,StSNF1在侵染后期高表达,72 h表达量最高;StSNF1在分生孢子萌发24 h时(即侵入丝形成时期)表达量最高;StSNF1在蔗糖为单一碳源的培养基中表达量最高,果胶培养基次之。综上所述,StSNF1与侵染寄主和碳源利用密切相关,在侵染后期发挥作用,利用寄主细胞内的非发酵型碳源进行次级侵染。 展开更多
关键词 玉米大斑病菌 snf1 蛋白激酶 表达分析
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LC-MS分析CmSnf1基因过表达对蛹虫草代谢组的影响
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作者 王晓军 周湘 +4 位作者 李乐 李芳盛 荣丹 邹根 汪滢 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1744-1754,共11页
Sucrose-nonfermenting 1(SNF1)蛋白激酶调节大量基因的转录,改变代谢酶的活性,并控制各种营养反应性细胞发育过程。本研究通过LC-MS非靶向代谢组学技术比较蛹虫草Cordyceps militaris野生型菌株Cm01和CmSnf1基因过表达菌株菌丝体的化... Sucrose-nonfermenting 1(SNF1)蛋白激酶调节大量基因的转录,改变代谢酶的活性,并控制各种营养反应性细胞发育过程。本研究通过LC-MS非靶向代谢组学技术比较蛹虫草Cordyceps militaris野生型菌株Cm01和CmSnf1基因过表达菌株菌丝体的化学成分,从整体代谢物水平阐明CmSnf1基因过表达对蛹虫草代谢产物积累的影响。研究表明:CmSnf1基因过表达后,在LC-MS正负离子模式下检测出547种差异代谢物,同野生型菌株相比,220种产物上调和327种下调。尤其显著的是黄酮类物质2-香叶基-3,4,2′,4′-四羟基二氢查耳酮上调了140.55倍,甘油磷脂代谢中的磷脂酰丝氨酸(PS)下调了47.53倍。差异代谢产物参与甘油脂代谢、氨基酸生物合成和降解、半乳糖代谢、丙酮酸和酮类化合物代谢等多种途径。CmSnf1过表达菌株与野生型相比在酮类化合物代谢上具有优势,推测CmSnf1基因在蛹虫草药用功效中发挥着重要的作用。 展开更多
关键词 snf1 蛹虫草 Cmsnf1基因过表达 代谢组学
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敲除REG1同时过表达SNF1基因对工业面包酵母不加糖面团发酵的影响 被引量:2
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作者 林雪 张翠英 +3 位作者 柏晓雯 徐佳 刘小二 肖冬光 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2016年第8期83-89,共7页
研究了蛋白磷酸酶PP1调节亚基编码基因REG1缺失同时蛋白激酶基因SNF1过表达对工业面包酵母麦芽糖代谢和不加糖面团发酵的影响。比较分析REG1缺失同时SNF1过表达转化子BYKPS-R和亲本菌株BY14α、REG1缺失突变株BYK-R的MAL基因m RNA水平... 研究了蛋白磷酸酶PP1调节亚基编码基因REG1缺失同时蛋白激酶基因SNF1过表达对工业面包酵母麦芽糖代谢和不加糖面团发酵的影响。比较分析REG1缺失同时SNF1过表达转化子BYKPS-R和亲本菌株BY14α、REG1缺失突变株BYK-R的MAL基因m RNA水平、麦芽糖酶和麦芽糖通透酶活力、麦芽糖代谢水平、不加糖面团发酵力,以及基本生长性能,结果表明,敲除REG1同时过表达SNF1能够显著提高麦芽糖代谢相关基因转录和酶活力,有效减弱葡萄糖阻遏,从而使面包酵母的麦芽糖消耗速率(葡萄糖被完全消耗完之前)较BY14α和BYK-R分别提高了18.59%和4.40%,不加糖面团发酵力分别提高了12.51%和3.22%。在REG1基因缺失的基础上,过表达SNF1可以进一步提高面包酵母的麦芽糖代谢和不加糖面团发酵水平,同时不影响面包酵母菌株生长性能,因此转化子BYKPS-R具备潜在的工业应用价值,同时该研究为快速发酵面包酵母菌株的选育奠定基础。 展开更多
关键词 面包酵母 snf1 REG1 不加糖面团 发酵 麦芽糖代谢
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敲除SNF1基因提高酿酒酵母乙醇生物合成的研究 被引量:2
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作者 雷娟娟 王艳尊 +6 位作者 江贤章 高媛媛 李欣 蓝灿华 陈由强 吴松刚 黄建忠 《药物生物技术》 CAS CSCD 2009年第2期103-107,共5页
SNF1基因编码的Snf1p对起始受葡萄糖阻遏基因的转录是必需的。通过重叠延伸PCR和两步PCR法合成了两端各带有352bp和345bp与SNF1序列上下游同源的基因敲除组件。将该敲除组件转化至酿酒酵母YS2,获得被loxP-kan-loxP序列组件替换而产生kan... SNF1基因编码的Snf1p对起始受葡萄糖阻遏基因的转录是必需的。通过重叠延伸PCR和两步PCR法合成了两端各带有352bp和345bp与SNF1序列上下游同源的基因敲除组件。将该敲除组件转化至酿酒酵母YS2,获得被loxP-kan-loxP序列组件替换而产生kanr的阳性克隆子。然后将质粒pSH65转入阳性克隆子并诱导表达Cre酶切除kan基因,进而通过传代丢失质粒pSH65后得到SNF1单倍体缺陷型菌株。重复转化敲除组件实现另一条等位基因的敲除,得到SNF1双倍体缺陷型菌株YS2-△snf1::loxp-kan-loxp。厌氧发酵试验表明该突变株的乙醇产量较出发菌株YS2提高了8.74%。残糖量试验表明在培养基中葡萄糖消耗殆尽后,突变株相对于出发菌株而言并没有利用乙醇作为碳源,乙醇产量保持稳定未有下降。敲除SNF1基因是提高酿酒酵母生物合成乙醇的一条有效途径。 展开更多
关键词 酿酒酵母 snf1基因 基因敲除 乙醇
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敲除MIG1和SNF1基因对酿酒酵母共利用葡萄糖和木糖的影响 被引量:8
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作者 蔡艳青 齐显尼 +3 位作者 齐奇 蔺玉萍 王正祥 王钦宏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期54-67,共14页
Mig1和Snf1是酿酒酵母葡萄糖阻遏效应的两个关键调控因子。为了提高酿酒酵母工程菌同时利用葡萄糖和木糖的能力,分别对MIG1和SNF1基因进行了单敲除和双敲除,并通过摇瓶发酵实验和RNA-Seq转录组分析,初步揭示了Mig1和Snf1可能影响葡萄糖... Mig1和Snf1是酿酒酵母葡萄糖阻遏效应的两个关键调控因子。为了提高酿酒酵母工程菌同时利用葡萄糖和木糖的能力,分别对MIG1和SNF1基因进行了单敲除和双敲除,并通过摇瓶发酵实验和RNA-Seq转录组分析,初步揭示了Mig1和Snf1可能影响葡萄糖和木糖共利用表达差异基因的层级调控机制。研究结果表明,MIG1单敲除对混合糖的共利用影响不大;SNF1单敲除会加快混合糖中木糖的利用而且葡萄糖和木糖可以被同时利用,这可能归因于SNF1单敲除会解除对一些氮分解代谢阻遏基因表达的抑制,从而促进了细胞对氮源营养的利用;进一步敲除MIG1,会解除更多氮分解代谢阻遏基因表达的抑制,以及一些碳中心代谢途径基因表达上调。虽然MIG1和SNF1双敲除菌株利用葡萄糖加快而利用木糖变慢,但是葡萄糖和木糖可以被同时利用,进而加快乙醇的积累。综上所述,MIG1和SNF1的敲除导致氮分解阻遏基因表达上调,有助于促进葡萄糖和木糖的共利用;解析Mig1和Snf1对氮分解阻遏基因的层级调控作用,为进一步提高葡萄糖和木糖的共利用提供新的靶点。 展开更多
关键词 酿酒酵母 葡萄糖阻遏 MIG1 snf1 RNA-SEQ 氮分解代谢阻遏
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酿酒酵母Snf1/AMPK蛋白激酶通过调节细胞壁合成相关基因的表达影响细胞壁完整性 被引量:4
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作者 张萍 赵强 +3 位作者 魏东盛 杨娇 朱项阳 朱旭东 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1132-1140,共9页
【目的】初步探讨酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中Snf1/AMPK蛋白激酶影响细胞壁完整性的机制。【方法】通过同源重组交换的方法,构建酿酒酵母Snf1/AMPK蛋白激酶催化亚基的敲除菌株snf1Δ,并通过基因回补对敲除菌株表型进行验证。... 【目的】初步探讨酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中Snf1/AMPK蛋白激酶影响细胞壁完整性的机制。【方法】通过同源重组交换的方法,构建酿酒酵母Snf1/AMPK蛋白激酶催化亚基的敲除菌株snf1Δ,并通过基因回补对敲除菌株表型进行验证。在含有刚果红(Congo red)和荧光增白剂(Calcofluor white)的平板上检测snf1Δ菌株细胞壁的完整性,通过q RT-PCR的方法检测snf1Δ菌株中已知的细胞壁合成相关基因的表达情况。【结果】SNF1基因敲除影响细胞壁的完整性,并影响酿酒酵母对热激应答的反应。进一步研究发现,SNF1突变菌株中β-1,3-葡聚糖合成相关基因与β-1,6-葡聚糖合成相关基因的表达量均明显降低。【结论】结果显示酿酒酵母Snf1蛋白激酶影响细胞壁的完整性,此影响发生在转录水平上,即通过调节细胞壁合成相关基因的转录来实现,揭示了Snf1蛋白的一个新角色。 展开更多
关键词 酿酒酵母 snf1/AMPK蛋白激酶 细胞壁合成 Β-葡聚糖
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人类致病菌新型隐球酵母Snf1/AMPK蛋白激酶调节细胞壁的完整性(英文) 被引量:2
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作者 杨娇 李东 +1 位作者 潘皎 朱旭东 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期740-746,共7页
【目的】Snf1/AMPK在真核生物中是重要的且高度保守的一类蛋白激酶。在新型隐球酵母中,SNF1基因在调节致病因子的生物合成和细胞毒力方面具有重要作用。本文进一步报道了该基因在维持细胞壁完整方面的新功能,这一功能在其他微生物中未... 【目的】Snf1/AMPK在真核生物中是重要的且高度保守的一类蛋白激酶。在新型隐球酵母中,SNF1基因在调节致病因子的生物合成和细胞毒力方面具有重要作用。本文进一步报道了该基因在维持细胞壁完整方面的新功能,这一功能在其他微生物中未见报道。【方法】利用荧光增白剂染料(Calcofluor white dye)染色,荧光显微观察细胞分离、胞壁完整性;利用恒定流速和压力水流冲击菌落,测定细胞黏附琼脂表面能力;在含有十二烷基硫酸钠(Sodium dodecyl sulfate,SDS),刚果红(Congo red)染料和增白剂(FluorescentBrightener 28)的培养基上观察突变株的生长情况,以验证细胞壁完整性。【结果】SNF1基因突变菌株对细胞壁抑制剂SDS等敏感,表明细胞壁完整性的损坏;在葡萄糖固体培养基上表现为细胞与琼脂间的黏附力丧失;在热击压力下,该菌株不能正常生长,而这种生长缺陷能够被渗透平衡抑制。【结论】新型隐球酵母SNF1基因对于维持细胞壁完整性是非常重要的,并且影响细胞与琼脂间黏附作用以及细胞对抗热的能力。 展开更多
关键词 snf1/AMPK 细胞壁完整性 十二烷基硫酸钠(Sodium dodecyl sulfate SDS)
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SNF1A转基因果蝇的构建 被引量:1
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作者 徐天宏 任婧 +1 位作者 徐荣 邓可京 《复旦学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期98-102,共5页
将质粒GH12596中的果蝇SNF1AcDNA用PCR方法扩增,并与pEGFP N2质粒中的荧光蛋白GFP编码序列连接入果蝇转基因载体pUAST上,构建了UAS SNF1A GFP质粒.转入果蝇细胞内,利用mini white标记基因筛选,得到3个独立的转基因果蝇品系.将这些转基... 将质粒GH12596中的果蝇SNF1AcDNA用PCR方法扩增,并与pEGFP N2质粒中的荧光蛋白GFP编码序列连接入果蝇转基因载体pUAST上,构建了UAS SNF1A GFP质粒.转入果蝇细胞内,利用mini white标记基因筛选,得到3个独立的转基因果蝇品系.将这些转基因果蝇品系分别定位平衡,并用单果蝇PCR方法加以佐证.然后将转基因品系分别与eyGAL4,actin GAL4,pGMR GAL4等3个GAL4果蝇品系交配,在荧光显微镜下检测到该基因在果蝇中的表达.从而确认了用显微注射技术能够得到稳定的转基因果蝇模型,为开展用果蝇GAL4 UAS系统大规模研究基因功能奠定了基础. 展开更多
关键词 snf1A基因 显微注射 转基因果绳 GAL4品系 基因表达 基因功能
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山茶炭疽菌CcSnf1基因参与调控山茶炭疽菌的生长发育和致病力 被引量:1
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作者 徐小文 王义勋 +1 位作者 张子一 沈蜜 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期927-939,共13页
油茶炭疽病是油茶上的重要病害,山茶炭疽菌(Colletotrichum camelliae)是该病害的优势病原菌。本研究以山茶炭疽菌中丝氨酸/苏氨酸类蛋白激酶SNF1蛋白复合体的核心组分CcSnf1为研究对象,研究其在山茶炭疽菌的营养生长、产孢量、孢子萌... 油茶炭疽病是油茶上的重要病害,山茶炭疽菌(Colletotrichum camelliae)是该病害的优势病原菌。本研究以山茶炭疽菌中丝氨酸/苏氨酸类蛋白激酶SNF1蛋白复合体的核心组分CcSnf1为研究对象,研究其在山茶炭疽菌的营养生长、产孢量、孢子萌发、附着胞形成、对环境胁迫因子的响应、对不同碳源的利用、致病力等方面的生物学功能,为油茶炭疽病的防控提供理论依据。研究结果表明,山茶炭疽菌CcSnf1基因编码的蛋白为719个氨基酸,含有一个蛋白激酶催化结构域、一个泛素相关结构域和一个腺苷酸感应器结构域。CcSnf1是果生炭疽菌CfSnf1和胶孢炭疽菌CgSnf1的高度同源物。该基因的敲除体菌丝生长减慢,分生孢子产量显著降低,对不同碳源、细胞壁完整性因子和渗透压胁迫因子有不同程度的敏感性。侵染早期阶段的孢子萌发率和附着胞形成率显著受影响,随后CcSnf1的敲除体对油茶果实和叶片的致病力明显减弱。本研究表明CcSnf1在山茶炭疽菌的菌丝生长、产孢、胁迫因子响应、对特定碳源的利用和致病力具有重要的作用。 展开更多
关键词 油茶 山茶炭疽菌 snf1 致病力
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黄瓜全基因组SnRK2基因的鉴定和序列特征分析 被引量:7
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作者 李利斌 曹齐卫 +1 位作者 张允楠 孙小镭 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期800-807,共8页
植物SnRK2基因在逆境应答和ABA信号转导及生长发育过程中具有重要功能。但是有关黄瓜(cucumis satovus L.)SnRK2全基因组水平的研究鲜见报道。本文利用生物信息学的方法从黄瓜基因组中鉴定出9个SnRK2基因,并对这些基因的染色体分布、内... 植物SnRK2基因在逆境应答和ABA信号转导及生长发育过程中具有重要功能。但是有关黄瓜(cucumis satovus L.)SnRK2全基因组水平的研究鲜见报道。本文利用生物信息学的方法从黄瓜基因组中鉴定出9个SnRK2基因,并对这些基因的染色体分布、内含子-外显子结构、系统进化、顺式调控元件等进行了系统分析。结果显示,黄瓜的SnRK2基因不均匀地的分布在基因组中,它们的外显子多数为9,编码区序列长度在909-1140bp之间。它们在遗传上分为3个不同的类群,预测编码的蛋白都具有激酶的典型结构。而且,在SnRK2基因上游调控序列中都含有多个不同激素和逆境应答顺式元件,预示它们在逆境应答和激素信号转导过程中具有一定功能。本文为进一步研究黄瓜SnRK2基因在逆境和激素应答中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 黄瓜 蔗糖非发酵因子1相关蛋白激酶2 基因组分布 遗传进化 序列特征分析
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Dissecting the genetic basis of maize deep-sowing tolerance by combining association mapping and gene expression analysis
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作者 YANG Yue MA Yu-ting +12 位作者 LIU Yang-yang Demar LYLE LI Dong-dong WANG Ping-xi XU Jia-liang ZHEN Si-han LU Jia-wen PENG Yun-ling CUI Yu FU Jun-jie DU Wan-li ZHANG Hong-wei WANG Jian-hua 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2022年第5期1266-1277,共12页
Deep-sowing is an important method for avoiding drought stress in crop species,including maize.Identifying candidate genes is the groundwork for investigating the molecular mechanism underlying maize deep-sowing toler... Deep-sowing is an important method for avoiding drought stress in crop species,including maize.Identifying candidate genes is the groundwork for investigating the molecular mechanism underlying maize deep-sowing tolerance.This study evaluated four traits(mesocotyl length at 10 and 20 cm planting depths and seedling emergence rate on days 6 and 12)related to deep-sowing tolerance using a large maize population containing 386 inbred lines genotyped with 0.5 million high-quality single nucleotide polymorphisms(SNPs).The genomewide association study detected that 273 SNPs were in linkage disequilibrium(LD)with the genetic basis of maize deep-sowing tolerance.The RNA-sequencing analysis identified 1944 and 2098 differentially expressed genes(DEGs)in two comparisons,which shared 281 DEGs.By comparing the genomic locations of the 273 SNPs with those of the 281 DEGs,we identified seven candidate genes,of which GRMZM2G119769 encoded a sucrose non-fermenting 1 kinase interactor-like protein.GRMZM2G119769 was selected as the candidate gene because its homologs in other plants were related to organ length,auxin,or light response.Candidate gene association mapping revealed that natural variations in GRMZM2G119769 were related to phenotypic variations in maize mesocotyl length.Gene expression of GRMZM2G119769 was higher in deep-sowing tolerant inbred lines.These results suggest that GRMZM2G119769 is the most likely candidate gene.This study provides information on the deep-sowing tolerance of maize germplasms and identifies candidate genes,which would be useful for further research on maize deep-sowing tolerance. 展开更多
关键词 MAIZE mesocotyl length association mapping differentially expressed gene snf1 kinase interactor-like protein
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小麦翻译控制肿瘤蛋白TCTP与蔗糖非酵解型蛋白激酶SnRK1的相互作用 被引量:3
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作者 麻楠 乔金柱 +6 位作者 汤文倩 孙天杰 刘娜 陈琰 路兴通 韩胜芳 王冬梅 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1686-1697,共12页
翻译控制肿瘤蛋白(Translationally controlled tumor protein, TCTP)广泛存在于真核细胞中,参与调节细胞分裂、植物生长发育,并介导植物抵御病原物侵染。蔗糖非酵解型蛋白激酶(SNF1-related protein kinase, SnRK1)在酵母、动物和植物... 翻译控制肿瘤蛋白(Translationally controlled tumor protein, TCTP)广泛存在于真核细胞中,参与调节细胞分裂、植物生长发育,并介导植物抵御病原物侵染。蔗糖非酵解型蛋白激酶(SNF1-related protein kinase, SnRK1)在酵母、动物和植物中非常保守,并参与包括糖代谢和抵抗非生物和生物胁迫在内的一系列生理过程。本实验室前期工作证明TaTCTP响应叶锈菌侵染并参与诱发寄主产生防卫反应。为了深入探讨TaTCTP在叶锈菌侵染小麦诱发的防卫反应中发挥的作用,采用串联亲和纯化(TAP)与质谱(MS)联用技术,鉴定出SnRK1可能为TaTCTP潜在互作蛋白。文中对TCTP和SnRK1的相互作用进行了研究。酵母双杂交结果表明,同时携带TCTP和SnRK1的酵母可以在SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade(SD/-LWHA,四缺)培养基上生长,说明TCTP与SnRK1在酵母双杂交系统中可以发生相互作用;通过双分子荧光互补实验,发现TCTP与SnRK1发生相互作用的荧光信号分布在细胞质中;进一步用Co-IP实验证明TCTP和SnRK1可以发生相互作用。本研究为深入研究TaTCTP在小麦与叶锈菌互作过程中的作用机制奠定了重要基础,对进一步完善小麦抵御叶锈菌侵染的分子机理具有重要意义。 展开更多
关键词 翻译控制肿瘤蛋白 蔗糖非酵解型蛋白激酶 酵母双杂交 双分子荧光互补 免疫共沉淀
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