SMSC-EXO来源lncRNA-SNHG14对OA大鼠软骨细胞损伤及炎性痛的调节作用和机制研究

目的:探讨滑膜间充质干细胞(SMSC)外泌体(EXO)来源的长链非编码RNA(lncRNA)SNHG14(SMSC-EXO-SNHG14)对骨关节炎(OA)中软骨细胞损伤及炎性疼痛缓解的作用和机制。方法:通过分离过表达SNHG14的SMSC的EXO,获得SMSC-EXO-SNHG14。使用SMSC-EXO-SNHG14治疗OA软骨细胞和OA大鼠。用IL-1β处理大鼠软骨细胞以建立OA的体外模型,通过CCK-8和transwell测定评估软骨细胞增殖、迁移能力。注射碘乙酸钠建立大鼠OA模型。造模6周后采集大鼠膝关节标本和背根神经节(DRG)进行组织学分析。在模型建立前和模型建立后1、2、4和6周评估机械缩爪阈值(PWT)和热缩爪潜伏期(PWL),并通过Western blotting和ELISA检测软骨降解和炎症相关标志物的表达。结果:体外SMSC-EXO-SNHG14可被软骨细胞内吞。SMSC-EXO-SNHG14处理显著减弱了IL-1β对软骨细胞增殖和迁移的抑制作用(P<0.05),IL-1β诱导的COL2A1下调和MMP13的上调(P<0.05)。SMSC-EXO-SNHG14治疗显著上调OA大鼠软骨组织中的COL2A1蛋白和下调MMP13蛋白(P<0.05)。在第2、4和6周,与未处理的OA大鼠相比,SMSC-EXO-SNHG14处理的OA大鼠的PWL显著改善(P<0.05)。此外,SMSC-EXO-SNHG14治疗显著减轻了OA大鼠DRG组织中降钙素基因相关肽(CGRP)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的上调(P<0.05)。结论:SMSC-EXO-SNHG14可有效促进OA大鼠的软骨修复,以及减轻膝关节炎症和疼痛。

lncRNA SNHG14通过miR-181c-5p/SOX6信号轴调控缺血性脑卒中神经元细胞凋亡

目的通过IS体外模型探究lncRNA SNHG14在神经元细胞凋亡中的作用机制。方法通过氧葡萄糖剥夺(OGD)诱导的神经元细胞损伤来模拟IS。实时荧光定量聚合酶链反应检测SNHG14、miR-181c-5p、SOX6基因表达,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Caspase-3检测试剂盒测定Caspase-3活性,RNA免疫沉淀实验和萤光素酶报告分析实验验证miR-181c-5p与SNHG14、SOX6的相互作用。结果sh-SNHG14组SNHG14 mRNA相对表达量低于sh-NC组(P<0.05),OGD+sh-SNHG14组SNHG14 mRNA相对表达量低于OGD+sh-NC组低(P<0.05)。OGD+sh-SNHG14组细胞活性率较OGD+sh-NC组高(P<0.05)。OGD+sh-SNHG14组细胞凋亡率、Caspase-3相对表达量较OGD+sh-NC组低(P<0.05)。miR-NC组miR-181c-5p相对表达量较miR-181c-5p mimics组低(P<0.05),inhibitor NC组较miR-181c-5p inhibitor组高(P<0.05)。SNHG14-WT+miR-181c-5p mimics组萤光素酶相对活性较SNHG14-WT+miR-NC组低(P<0.05),SNHG14-WT+miR-181c-5p inhibitor组较SNHG14-WT+inhibitor NC组高(P<0.05)。SOX6-WT+miR-181c-5p mimics组萤光素酶相对活性较SOX6-WT+miR-NC组低(P<0.05),SOX6-WT+miR-181c-5p inhibitor组较SOX6-WT+inhibitor NC组高(P<0.05)。miR-NC组SOX6 mRNA相对表达量较miR-181c-5p mimics组高(P<0.05),miR-181c-5p inhibitor组较inhibitor NC组高(P<0.05)。对照组细胞活性率较OGD+sh-SNHG14组高(P<0.05),OGD+sh-SNHG14+miR-181c-5p inhibitor组较OGD组高(P<0.05)。OGD+sh-SNHG14+miR-181c-5p inhibitor组细胞凋亡率较OGD+sh-SNHG14组高(P<0.05)。OGD+sh-SNHG14+miR-181c-5p inhibitor组Caspase-3相对表达量较OGD+sh-SNHG14组高(P<0.05)。结论SNHG14可调节IS模型中神经元细胞凋亡,作用机制可能是通过靶向miR-181c-5p/SOX6信号通路实现的。

木犀草苷抑制SNHG14表达改善SW1353骨关节炎细胞模型的实验研究

目的:观察木犀草苷(Cy)对骨关节炎细胞模型的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法:使用0.1%二甲基亚砜(DMSO)及不同浓度的Cy(0、10、20、30、40、50μmol/mL)处理SW1353细胞,采用CCK-8检测其细胞毒性,确定刺激浓度。将SW1353细胞分为正常对照组、白细胞介素-1β(IL-1β)组、Cy低剂量组、Cy高剂量组。正常对照组SW1353细胞不进行任何处理;IL-1β组SW1353细胞采用10 ng/mL IL-1β处理24 h;Cy低剂量组SW1353细胞采用10 ng/mL IL-1β+10μmol/mL Cy处理24 h;Cy高剂量组SW1353细胞采用10 ng/mL IL-1β+20μmol/mL Cy处理24 h。采用RT-qPCR法检测基质金属蛋白酶-13(MMP-13)mRNA、白细胞介素-6(IL-6)mRNA、Ⅱ型胶原(COL2a1)mRNA、蛋白聚糖(ACAN)mRNA及长链非编码RNA(lncRNA)SNHG14 mRNA的表达水平;采用Western blotting检测MMP-13及细胞外基质COL2a1、ACAN蛋白表达。结果:CCK-8结果表明Cy(10、20μmol/mL)对SW1353细胞活性没有明显的抑制作用。IL-1β组MMP-13 mRNA、IL-6 mRNA相对表达量高于正常对照组,ACAN mRNA、COL2a1 mRNA相对表达量低于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);Cy低、高剂量组MMP-13 mRNA、IL-6 mRNA相对表达量低于IL-1β组,ACAN mRNA、COL2a1 mRNA相对表达量高于IL-1β组,差异均有统计学意义(P<0.05)。IL-1β组lncRNA SNHG14 mRNA相对表达量高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01);Cy低、高剂量组lncRNA SNHG14 mRNA相对表达量低于IL-1β组,差异均有统计学意义(P<0.01)。IL-1β组MMP-13蛋白相对表达量高于正常对照组,ACAN、COL2a1蛋白相对表达量低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Cy低、高剂量组MMP-13蛋白相对表达量低于IL-1β组,ACAN、COL2a1蛋白相对表达量高于IL-1β组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:Cy能改善IL-1β诱导的SW1353骨关节炎细胞模型,可能机制为抑制SNHG14表达。

SNHG14调控miR-181b对H2O2诱导的人脑微血管内皮细胞氧化应激和凋亡的影响

目的小核仁RNA宿主基因(SNHG)14对H_(2)O_(2)诱导的人脑微血管内皮细胞氧化应激和凋亡的影响及作用机制。方法体外培养人脑微血管内皮细胞BB19,100μmol/L H_(2)O_(2)诱导分别作用于转染SNHG14小干扰RNA、miR-181b模拟物及共转染SNHG14小干扰RNA与miR-181b抑制剂的BB19细胞后,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中SNHG14和miR-181b mRNA表达,CCK-8和流式细胞仪分别检测细胞增殖、凋亡,Western印迹检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达,试剂盒检测细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)水平。双荧光素酶报告实验验证SNHG14与miR-181b调控关系。结果干扰SNHG14表达或过表达miR-181b后,H_(2)O_(2)诱导的BB19细胞增殖活性、Bcl-2表达及SOD和CAT活性明显升高,细胞凋亡率、Bax表达和MDA水平明显降低(P<0.05)。SNHG14靶向负调控miR-181b表达。而与仅干扰SNHG14表达的细胞比较,同时干扰miR-181b和SNHG14表达的BB19细胞经H_(2)O_(2)诱导后增殖活性、Bcl-2表达及SOD和CAT活性明显降低,细胞凋亡率、Bax表达和MDA水平明显升高(P<0.05)。结论干扰SNHG14表达可能靶向负调控miR-181b抑制H_(2)O_(2)诱导的人脑微血管内皮细胞凋亡和氧化应激。

lncRNA SNHG14通过靶向miR-433-3p调控甲状腺癌SW579细胞的恶性生物学行为

目的:探讨lncRNA SNHG14对甲状腺癌SW579细胞恶性生物学行为的影响及其分子机制。方法:收集2017年10月至2018年12月青海省人民医院收治的20例甲状腺癌患者的癌组织及癌旁组织标本,用qPCR检测甲状腺癌组织和对应癌旁组织中SNHG14与miR-433-3p的表达;根据转染物的不同,将SW579细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-SNHG14组(转染si-SNHG14)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-433-3p mimic组(转染miR-433-3p mimic)、si-SNHG14+anti-miR-NC组(共转染si-SNHG14与anti-miR-NC)和si-SNHG14+anti-miR-433-3p组(共转染si-SNHG14与anti-miR-433-3p)。MTT法、FCM、Transwell实验分别检测转染后SW579细胞的增殖能力、细胞周期、细胞凋亡率、迁移及侵袭能力的改变;利用双荧光素酶报告基因实验检测SNHG14是否可结合miR-433-3p,qPCR法检测SNHG14与miR-433-3p之间的相互调控关系。结果:SNHG14在甲状腺癌组织中的表达高于癌旁组织(P<0.05),而miR-433-3p的表达水平低于癌旁组织(P<0.05)。抑制SNHG14的表达或过表达miR-433-3p可使SW579细胞增殖能力降低(P<0.05)、迁移与侵袭细胞数减少(均P<0.05)、细胞凋亡率升高(P<0.05)、G1期细胞比例升高(P<0.05)且S期细胞比例降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证明SNHG14可结合miR-433-3p,抑制SNHG14的表达可提高SW579细胞中miR-433-3p水平(均P<0.05)。同时抑制miR-433-3p和SNHG14的表达可部分逆转后者对SW579细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用(均P<0.05)。结论:甲状腺癌组织中lncRNA SNHG14呈高表达、miR-433-3p呈低表达,lncRNA SNHG14可通过靶向结合miR-433-3p促进甲状腺癌SW579细胞的增殖、迁移、侵袭而抑制细胞凋亡。

lncRNA SNHG14靶向miR-149-5p调控MIA诱导的骨关节炎模型细胞损伤

目的探讨长链非编码RNA SNHG14(lncRNA SNHG14)对碘乙酸钠(MIA)诱导的大鼠软骨细胞损伤的影响及分子机制。方法4μmol/L MIA诱导软骨细胞损伤模型,将其分为对照组、MIA组、MIA+si-NC组、MIA+si-SNHG14组、MIA+miR-NC组、MIA+miR-149-5p组、MIA+si-SNHG14+anti-miR-NC组、MIA+si-SNHG14+anti-miR-149-5p组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测lncRNA SNHG14和miR-149-5p的表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达;比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)水平;双荧光素酶报告实验检测lncRNA SNHG14和miR-149-5p的靶向关系。结果与对照组相比,经MIA诱导的软骨细胞损伤中,lncRNA SNHG14表达水平升高,miR-149-5p表达水平降低(P<0.05),细胞凋亡率升高,Bcl-2表达水平与SOD和CAT活性降低,Bax和MDA表达水平升高(P<0.05)。抑制lncRNA SNHG14和过表达miR-149-5p均降低细胞凋亡率,提高Bcl-2表达水平与SOD和CAT活性,降低Bax和MDA表达水平(P<0.05)。lncRNA SNHG14靶向调控miR-149-5p表达,且下调miR-149-5p能逆转抑制lncRNA SNHG14表达对细胞凋亡及氧化应激反应的影响(P<0.05)。结论抑制lncRNA SNHG14通过靶向上调miR-149-5p减轻MIA诱导的软骨细胞损伤。

长链非编码RNA SNHG14通过靶向miR-144-3p调控胃癌细胞增殖和凋亡的体外实验研究

背景长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA,LncRNA)与胃癌发生发展密切相关,LncRNA SNHG14在肿瘤发生过程中发挥癌基因作用,但其在胃癌中的作用机制尚未阐明.starBase预测显示miR-144-3p可能是SNHG14的靶基因,但SNHG14是否可通过调控miR-144-3p的表达而参与胃癌发生过程尚未可知.目的探讨LncRNA SNHG14是否可通过靶向miR-144-3p调控胃癌细胞增殖与凋亡.方法实时荧光定量聚合酶链反应检测人胃黏膜上皮正常细胞与胃癌细胞中SNHG14与miR-144-3p的表达情况.体外培养人胃癌MGC-803细胞,随机分为5组:空白(NC)组、阴性对照(si-con)组、SNHG14小干扰RNA(si-SNHG14)组、SNHG14小干扰RNA+miR-144-3p阴性对照(si-SNHG14+anti-miR-con)组、SNHG14小干扰RNA+miR-144-3p特异性寡核苷酸抑制剂(si-SNHG14+anti-miR-144-3p)组.甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测各组细胞的增殖情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;双荧光素酶报告系统验证SNHG14与miR-144-3p的靶向调节关系.蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中细胞周期蛋白1(cyclinD1)、B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、p21、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、磷脂酰肌醇激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路相关蛋白表达.结果SNHG14在胃癌细胞中的表达水平显著高于胃黏膜上皮正常细胞(P<0.05),而miR-144-3p的表达水平显著降低(P<0.05);与NC组、si-con组比较,si-SNHG14组MGC-803细胞OD值显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著增高(P<0.05),cyclinD1、Bcl-2、PI3K的磷酸化(p-PI3K)、AKT的磷酸化(p-AKT)蛋白表达显著降低(P<0.05),p21、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.05);双荧光素酶报告基因显示SNHG14可靶向结合miR-144-3p,并可负向调控miR-144-3p的表达与活性;干扰miR-144-3p可部分逆转沉默SNHG14对胃癌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT信号通路的作用.结论SNHG14能够通过靶向结合并下调miR-144-3p的表达促进胃癌细胞增殖,抑制细胞凋亡,其可能通过激活PI3K/AKT信号通路而发挥作用.

SNHG14在Alzheimer’s病患者血清中表达及其与神经细胞自噬相关性研究

目的检测SNHG14在Alzheimer’s病(AD)患者血清中的表达水平及在小鼠神经元细胞系HT-22细胞中敲低SNHG14后对细胞自噬相关基因表达的影响。方法取50例AD患者(AD组)血清和50例正常对照者(正常对照组)血清的总RNA,并逆转录为cDNA,实时荧光定量PCR检测其中SNHG14的相对表达水平,并分析其与患者临床参数之间的相关性;在小鼠神经元细胞系HT-22细胞中敲低SNHG14后,检测细胞中自噬相关蛋白5(ATG5)表达情况。结果AD组血清中SNHG14的表达水平[(45.33±7.04)×10-4]明显低于正常对照组[(74.07±9.63)×10-4],差异具有统计学意义(t=2.410,P=0.0178)。AD组血清中SNHG14表达水平与患者年龄(P=0.370)、吸烟(P=0.276)、性别(P=0.778)均无明显相关性。神经元细胞HT-22中敲低SNHG14后细胞自噬相关基因ATG5表达较正常对照组明显下降,差异具有统计学意义(t=3.049,P=0.038)。结论SNHG14在AD患者血清中的表达下调,其参与病发病可能的机制为调节神经元细胞自噬。

LncRNA SNHG14/miR⁃148a⁃3p/PODXL轴在瘢痕疙瘩形成过程中的分子机制

目的探讨LncRNA SNHG14/miR⁃148a⁃3p/PODXL轴在瘢痕疙瘩形成过程中的分子机制。方法qRT⁃PCR法与Western blot法分别检测正常皮肤组织、瘢痕疙瘩组织中SNHG14、miR⁃148a⁃3p、PODXL的表达量;Pearson法分析瘢痕疙瘩组织中SNHG14与miR⁃148a⁃3p的相关性,以及miR⁃148a⁃3p与PODXL的相关性;体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞,si⁃NC、si⁃SNHG14分别转染入瘢痕疙瘩成纤维细胞;MTT实验、平板克隆形成实验、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭;双荧光素酶报告基因实验检测SNHG14与miR⁃148a⁃3p的靶向关系,以及miR⁃148a⁃3p与PODXL的靶向关系;Western blot法检测ProcollagenⅠ、α⁃SMA、Col1蛋白表达量。结果与正常皮肤组织比较,瘢痕疙瘩组织中SNHG14与PODXL的表达量升高(P<0.05),miR⁃148a⁃3p的表达量降低(P<0.05);SNHG14与miR⁃148a⁃3p呈负相关(r=-0.8031,P<0.001),miR⁃148a⁃3p与PODXL呈负相关(r=-0.8559,P<0.001),SNHG14与PODXL呈正相关(r=0.7241,P<0.001);转染si⁃SNHG14可明显降低PODXL的表达量,促进miR⁃148a⁃3p的表达,并可降低细胞活力、克隆形成、迁移及侵袭能力,ProcollagenⅠ、α⁃SMA、Col1蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);SNHG14可靶向调控miR⁃148a⁃3p,miR⁃148a⁃3p可靶向调控PODXL。结论干扰SNHG14表达可通过调控miR⁃148a⁃3p/PODXL轴而抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭及胶原蛋白合成。

长链非编码RNA SNHG14可能通过促进胃癌细胞增殖和转移影响胃癌的进展

目的:研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)SNHG14在胃癌(gastric cancer,GC)进展中的作用。方法:应用RT-qPCR检测SNHG14在68对胃癌组织和癌旁组织、3个胃癌细胞系(MGC-803、BGC-823、SGC-7901)和人类正常胃上皮细胞株GES-1中的表达量。分析胃癌组织及胃癌细胞株内的SNHG14表达水平与临床病理特征的相关性。使用siRNA沉默SNHG14后观察胃癌细胞株的功能。CCK-8增殖实验评估SNHG14对胃癌细胞增殖的影响,Transwell实验检测胃癌细胞迁移和侵袭能力。结果:胃癌细胞株和胃癌组织中SNHG14的表达量与正常对照相比显著上调。相关分析显示SNHG14的表达量与胃癌组织的TNM分期(P <0.05)、分化程度(P <0.001)、肿瘤大小(P <0.01)及浸润深度(P <0.05)等有显著相关性。通过siRNA沉默SNHG14的表达后,能够显著抑制胃癌细胞的增殖(P <0.01)、迁移(P <0.01)和侵袭(P <0.05)能力。结论:SNHG14可能起到促癌作用,通过促进胃癌细胞的增殖和转移来影响胃癌的进展。SNHG14在治疗和诊断胃癌中具有潜在价值,有可能成为诊断胃癌的新型生物标志物或胃癌生物治疗的候选靶点。

LncRNA SNHG14调控miR-142-5p对寡聚态Aβ诱导的鼠源神经细胞系PC12损伤的影响

目的探讨lncRNA SNHG14靶向miR-142-5p对寡聚态Aβ诱导的鼠源神经细胞系PC12损伤的影响。方法将PC12细胞分为对照组、模型组、模型+si-NC组、模型+si-SNHG14组、模型+miR-NC组、模型+miR-142-5p组、模型+si-SNHG14+anti-miR-NC组、模型+si-SNHG14+anti-miR-142-5p组。RT-qPCR检测SNHG14和miR-142-5p水平。CCK-8和流式细胞术测量细胞增殖抑制率和凋亡率。ELISA检测培养液中TNF-α、IL-6和IL-10水平。双荧素酶报告实验确定SNHG14和miR-142-5p的靶向关系。结果AD患者血浆中SNHG14呈高表达(P<0.05),miR-142-5p呈低表达(P<0.05)。与对照组比较,模型组细胞SNHG14水平、增殖抑制率、凋亡率显著升高(P<0.05),miR-142-5p水平显著降低(P<0.05),培养液中TNF-α和IL-6水平显著升高(P<0.05),IL-10水平显著降低(P<0.05)。与model+si-NC组比较,model+si-SNHG14组细胞增殖抑制率、凋亡率显著降低(P<0.05),培养液中TNF-α和IL-6水平显著降低(P<0.05),IL-10水平显著升高(P<0.05)。与model+miR-NC组比较,model+miR-142-5p组细胞增殖抑制率、凋亡率显著降低(P<0.05),培养液中TNF-α和IL-6水平显著降低(P<0.05),IL-10水平显著升高(P<0.05)。miR-142-5p是SNHG14的直接靶点。与model+si-SNHG14+anti-miR-NC组比较,model+si-SNHG14+anti-miR-142-5p组细胞增殖抑制率、凋亡率显著升高(P<0.05),培养液中TNF-α和IL-6水平显著升高(P<0.05),IL-10水平显著降低(P<0.05)。结论沉默SNHG14通过靶向促进miR-142-5p表达能够减轻寡聚态Aβ诱导的神经细胞损伤。

LncRNA SNHG14通过调控miR-372-3p对OGD/R诱导的星形胶质细胞增殖、凋亡和炎性反应的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA) SNHG14通过调控miR-372-3p对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的星形胶质细胞增殖、凋亡和炎性反应的影响。方法 体外分离大鼠星形胶质细胞并建立OGD/R损伤细胞模型,分为Control组、OGD/R组、OGD/R+si-NC组、OGD/R+si-SNHG14组、OGD/R+miR-NC组、OGD/R+miR-372-3p组、OGD/R+si-SNHG14+anti-miR-NC组和OGD/R+si-SNHG14+anti-miR-372-3p组。qRT-PCR检测SNHG14和miR-372-3p的表达量;MTT检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白表达;ELISA检测TNF-α、IL-1β的表达;双荧光素酶报告实验验证SNHG14和miR-372-3p的关系。结果 与Control组比较,OGD/R组SNHG14表达量、细胞凋亡率、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-10显著升高(P<0.05),miR-372-3p表达量、细胞活力、Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。与OGD/R+si-NC组比较,OGD/R+si-SNHG14组的内细胞凋亡率、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-10显著降低(P<0.05);细胞活力、Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05)。与OGD/R+miR-NC组比较,OGD/R+miR-372-3p组内细胞活力、Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-10显著降低(P<0.05)。与OGD/R+si-SNHG14+anti-miR-NC组比较,OGD/R+si-SNHG14+anti-miR-372-3p组内细胞活力、Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-10显著升高(P<0.05)。结论 敲低SNHG14通过上调miR-372-3p对OGD/R诱导的星形胶质细胞损伤具有一定的保护作用。

lncRNA SNHG14在甲状腺乳头状癌组织中的表 达及对其癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:观察长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)核内小RNA宿主基因14(small nucleolar RNA host gene 14,SNHG14)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)组织中的表达情况及对PTC细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:选取2019年10月至2020年01月期间于我院甲状腺外科行手术切除的37例患者的PTC组织及配对癌旁组织,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测SNHG14在PTC组织和癌旁组织中的表达,并分析其与临床病理特征的相关性,同时检测SNHG14在PTC细胞TPC-1及人正常甲状腺滤泡上皮细胞Nthy-ori3-1中的表达。采用si-RNA技术下调PTC细胞TPC-1中SNHG14的表达,通过细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)、细胞划痕实验和Transwell实验研究SNHG14在TPC-1细胞中的生物学功能。结果:SNHG14在PTC组织中的表达高于癌旁组织(P<0.05),并与淋巴结转移、病灶数有关(P均<0.05),而与年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期无关(P均>0.05),同时,SNHG14在TPC-1细胞中的表达高于Nthy-ori3-1细胞(P<0.05)。下调SNHG14后,相较于空白对照组、阴性对照组,si-SNHG14组细胞的增殖、迁移和侵袭能力均降低(P均<0.05)。结论:SNHG14可能参与PTC的发生发展,有望成为PTC患者新的诊断标记物及治疗靶点。

SNHG14在恶性肿瘤中的表达及作用研究进展

长链非编码RNA是控制肿瘤发生的各种生物过程的中枢调节因子,长链非编码RNA核内小RNA宿主基因14(SNHG14)作为一种重要肿瘤相关因子,在肿瘤发生发展中起重要作用。SNHG14在肺癌、胰腺癌、结直肠癌、卵巢癌、膀胱癌、乳腺癌、胃癌和宫颈癌等多种恶性肿瘤中的表达上调,并与肿瘤分期、淋巴结转移和肿瘤大小有关;同时,SNHG14可通过调节miRNA和蛋白质水平,促进细胞增殖、迁移、侵袭和抑制细胞凋亡。因此,SNHG14可以作为恶性肿瘤的生物标志物和治疗靶点。

LncRNA SNHG14通过靶向miR-16-5p对高糖诱导的小鼠肾脏足细胞损伤的影响

目的探讨LncRNA小核仁RNA宿主基因(SNHG)14对高糖(HG)诱导的小鼠肾脏足细胞MPC5损伤的影响及其作用机制。方法体外培养MPC5细胞,分别转染SNHG14小干扰RNA、miR-16-5p模拟物或共转染SNHG14小干扰RNA与miR-16-5p抑制剂后,用30 mmol/L D-葡萄糖的培养基干预24 h,然后qRT-PCR检测细胞中SNHG14和miR-16-5p水平,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western印迹检测细胞中nephrin、podocin、synaptopodin、酶切含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-3、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。双荧光素酶报告基因实验验证SNHG14与miR-16-5p靶向关系。结果MPC5细胞经HG处理后,细胞中SNHG14水平显著升高(P<0.05),而miR-16-5p水平显著降低(P<0.05)。SNHG14在MPC5细胞中靶向结合并负调控miR-16-5p表达。抑制SNHG14或过表达miR-16-5p的MPC5细胞经HG处理后,细胞中synaptopodin、nephrin、podocin和Bcl-2蛋白的表达量均显著升高(P<0.05),而细胞凋亡率和细胞中Bax、酶切caspase-3蛋白的表达量均显著降低(P<0.05)。抑制miR-16-5p逆转了抑制SNHG14对HG诱导的MPC5细胞损伤的影响(P<0.05)。结论抑制SNHG14表达可降低HG诱导的小鼠肾脏足细胞MPC5损伤,其作用机制与靶向上调miR-16-5p表达有关。

长链非编码RNA SNHG14/miR-211对宫颈癌细胞的增殖、侵袭能力的影响

目的:探讨长链非编码(Long chain non-coding,Lnc)RNA SNHG14/微小RNA(microRNA,mi R)-211对宫颈癌细胞的增殖、侵袭能力的影响。方法:宫颈癌细胞株Si Ha设三组:空白组(不进行转染)、对照组(转染mi R-NC)与mi R-211组(转染mi R-211mimic),噻唑蓝[3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT]检测细胞增殖活性,Transwell检测细胞侵袭及转移,实时荧光定量核酸扩增检测系统(Real-time Quantitative PCR, qPCR)检测LncRNA SNHG14与mi R-211mRNA水平,Westem印迹法检测黏蛋白4(mucin 4, MUC4)蛋白水平。结果:转染后24 h与48 h,mi R-211组的细胞增殖、侵袭、转移指数与LncRNA SNHG14与MUC4蛋白相对表达水平低于空白组和对照组(P<0.05),mi R-211 m RNA表达水平高于空白组(P<0.05),空白组与对照组对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:过表达mi R-211可抑制LncRNA SNHG14的表达,也能抑制MUC4表达,从而能抑制宫颈癌细胞的增殖、侵袭及转移。

外泌体来源长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因14对食管癌5-氟尿嘧啶耐药的影响

目的探讨食管癌5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药细胞外泌体来源的长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因14(SNHG14)在食管癌耐药中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测郑州大学第一附属医院30例食管癌患者和30例健康对照血浆中lncRNA SNHG14的表达。浓度梯度法构建食管癌5-Fu耐药细胞3组EC9706/5-Fu和3组KYSE150/5-Fu,分离并收集各组食管癌细胞外泌体,RT-qPCR检测SNHG14的表达。分别将3组食管癌细胞EC9706和KYSE150与耐药细胞来源外泌体共培养,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测5-Fu作用下细胞活性。敲低3组EC9706/5-Fu细胞中的SNHG14后分离外泌体,通过CCK-8、Transwell、Tunnel实验检测该外泌体对EC9706细胞药物敏感度、迁移和凋亡的影响。采用t检验或单因素方差分析(One-Way ANOVA)进行统计分析。结果食管癌患者血浆中lncRNA SNHG14的表达高于健康对照组(3.30±0.20比1.33±0.09,t=49.910,P<0.001),耐药食管癌细胞(EC9706/5-Fu和KYSE150/5-Fu)外泌体中lncRNA SNHG14的表达高于对照食管癌细胞(2.55±0.42比0.99±0.06,t=6.347;1.70±0.07比0.99±0.11,t=9.191,P<0.05)。在5-Fu作用下,EC9706/5-Fu-exo和KYSE150/5-Fu-exo组的细胞活性分别高于EC9706-exo和KYSE150-exo组[(165.23±5.97)%比(103.90±10.99)%,t=8.494;(139.35±3.82)%比(99.99±5.67)%,t=9.953,P<0.05]。EC9706/5-Fu-exo-si-SNHG14组细胞凋亡高于EC9706/5-Fu-exo组[(9.03±0.63)%比(5.53±0.73)%,F=40.290];细胞侵袭低于EC9706/5-Fu-exo组[(117.92±15.54)%比(339.52±27.43)%,F=152.000];5-Fu作用下细胞活性低于EC9706/5-Fu-exo组[(134.69±6.01)%比(160.38±4.69)%,F=64.090];细胞中JAK和p-STAT3的蛋白表达低于EC9706/5-Fu-exo组(0.86±0.07比1.87±0.10,F=363.100;0.96±0.08比1.83±0.06,F=388.700),差异有统计学意义(P<0.001)。结论食管癌耐药细胞外泌体来源lncRNA SNHG14能够通过激活JAK/STAT3通路提高食管癌对5-Fu的药物耐受。