LncRNA SNHG5在冠状动脉粥样硬化性心脏病患者外周血中的表达及临床意义

目的探讨长链非编码RNA SNHG5(lncRNA SNHG5)在冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary atherosclerotic heart disease,CAHD)患者外周血中的表达及临床意义。方法收集受试者的临床资料,通过逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)测定对照组(n=82)和CAHD组(n=78)受试者外周血中lncRNA SNHG5的表达,通过单多因素Logistic回归分析法探究影响CAHD的独立危险因素,通过受试者工作特征(ROC)曲线分析lncRNA SNHG5在CAHD中的诊断价值。结果与对照组相比,CAHD组受试者外周血中lncRNA SNHG5的表达水平显著降低(P<0.05);lncRNA SNHG5在心功能Ⅰ级-Ⅳ级CAHD患者外周血中的表达水平逐渐降低各级间差异P<0.05,隔级间差异P<0.01。高血压、高血脂及lncRNA SNHG5表达水平为CAHD的独立危险因素。lncRNA SNHG5诊断CAHD的ROC曲线下面积为0.872,灵敏度为78.2%,特异度为97.60%。结论lncRNA SNHG5可能是潜在的诊断CAHD的生物标志物。

血清lncRNA SNHG5与老年结直肠癌患者临床病理的关系及其诊断价值

目的分析血清长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因(lncRNA SNHG)5与老年结直肠癌患者临床病理的关系及其诊断价值。方法结直肠癌患者74例作为结直肠癌组,另选取同时期30例结直肠息肉患者作为息肉对照组,30例同时期健康志愿者作为健康对照组。采用实时荧光定量PCR检测血清lncRNA SNHG5的相对表达量,采用全自动电化学发光免疫分析仪检测血清癌胚抗原(CEA)及糖类抗原(CA)199的水平。结果结直肠癌组的血清lncRNA SNHG5、CEA、CA199水平明显高于息肉对照组和健康对照组(P<0.05)。经分析,结直肠癌患者血清lncRNA SNHG5与性别、年龄均不相关(P>0.05),与肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移及分化程度有关(P<0.05)。经Pearson线性相关分析显示,结直肠癌患者血清lncRNA SNHG5与CEA、CA199均呈正相关(P<0.05)。经接收者工作特征曲线(ROC)分析显示,血清lncRNA SNHG5、CEA、CA199诊断结直肠癌的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.784、0.763、0.746,而三指标联合检测可以在一定程度上提高诊断价值,AUC为0.876。结论老年结直肠癌患者的血清lncRNA SNHG5表达异常升高,且其表达水平与不良临床病理特征有关,血清lncRNA SNHG5与CEA、CA199联合检测对结直肠癌有较高的诊断价值。

LncRNA SNHG5靶向miR-421调控胶质母细胞瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的机制

目的探讨SNHG5靶向miR-421调控多形性胶质母细胞瘤(GBM)发生与发展的分子机制。方法收集31例GBM肿瘤与32例正常脑组织标本,实时荧光定量PCR法检测标本中SNHG5与miR-421的表达水平;通过慢病毒或质粒转染U87细胞上调或下调SNHG5的表达水平,采用实时荧光定量PCR检测转染后U87细胞中miR-421的表达水平,分析GBM中miR-421与SNHG5表达的相关性。双荧光素报告基因实验验证SNHG5对miR-421的靶向关系。利用SNHG5与miR-421两者均低表达的质粒转染U87细胞进行拯救实验,通过CCK-8、Transwell、流式细胞学分析及裸鼠体内实验验证SNHG5通过靶向miR-421调控GBM细胞增殖、侵袭及凋亡。结果上调U87细胞中SNHG5表达后miR-421的表达水平显著下降,下调U87细胞中SNHG5表达后miR-421表达水平明显升高(P<0.05),两者表达呈显著负相关。双荧光素酶报告基因实验结果提示SNHG5可靶向结合miR-421。拯救实验结果表明,相比si-SNHG5+miR-421-inhibitor组,si-SNHG5+control-inhibitor组的U87细胞增殖、侵袭及抗凋亡能力均显著下降,且BAX与p21蛋白表达水平升高,CyclinD1与Bcl-2蛋白表达显著下降(P<0.05)。结论SNHG5可通过靶向miR-421并影响CyclinD1、p21、BAX、Bcl-2蛋白表达进而促进GBM细胞的增殖、侵袭及抗凋亡行为。miR-421在GBM中呈低表达与SNHG5表达水平升高有关。

lncRNA SNHG5在缺氧诱导肝细胞癌细胞侵袭及迁移中的作用

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)SNHG5在缺氧诱导肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞侵袭及迁移中的作用。方法:收集2017年1月至2018年6月西安交通大学第一附属医院手术切除的20例HCC患者的癌与癌旁组织标本,以及人HCC细胞系HepG2、MHCC-97L、MHCC-97H、Huh7和永生化人肝细胞LO2。利用生物信息学方法分析缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)与SNHG5的结合位点,将pCMV-HIF-1α、shRNA-SNHG5(sh-SNHG5)质粒转染进HCC细胞,用qPCR法检测HCC组织和缺氧条件下HCC细胞中SNHG5的表达水平,用Western botting检测HCC细胞中HIF-1α蛋白的表达水平,用Transwell小室法检测沉默SNHG5后常氧和缺氧条件下对HCC细胞侵袭及迁移能力的影响。结果:分别与癌旁组织和LO2细胞比较,HCC组织和各细胞系中SNHG5表达水平显著上调(均P<0.01)。缺氧可上调HCC细胞中SNHG5的表达水平,其机制可能与缺氧活化HIF-1α与SNHG5启动子结合从而促进其转录有关;缺氧能够增强HepG2和MHCC-97L细胞的侵袭及迁移能力(均P<0.01),沉默SNHG5表达能够显著抑制缺氧条件下HepG2和MHCC-97L细胞的侵袭及迁移能力(均P<0.01)。结论:SNHG5在HCC组织及细胞系中高表达,并在缺氧诱导的HCC细胞侵袭及迁移中发挥重要作用。

蛇床子素调控LncRNA SNHG5对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响

目的 探讨蛇床子素对高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖、凋亡、炎症反应的影响及其对长链非编码RNA(LncRNA)SNHG5的调控作用。方法 采用高糖诱导的肾小管上皮细胞HK-2建立细胞损伤模型,用不同浓度的蛇床子素处理HK-2细胞;pcDNA、pcDNA-SNHG5转染HK-2细胞后加入30 mmol/L葡萄糖处理细胞;si-NC、si-SNHG5分别转染HK-2细胞后加入100 nmol/L蛇床子素与30 mmol/L葡萄糖的处理细胞;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SNHG5的表达量;采用CCK-8法、流式细胞术分别检测细胞活力、凋亡率;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6的水平。结果 蛇床子素处理高糖诱导的HK-2细胞后可明显提高SNHG5的表达水平,明显增强细胞活力,而明显降低凋亡率、TNF-α、IL-6的水平(P<0.05);高糖诱导的HK-2细胞中转染pcDNA-SNHG5后细胞活力明显升高,而凋亡率、TNF-α、IL-6水平明显降低(P<0.05);转染si-SNHG5与蛇床子素联合处理高糖诱导的HK-2细胞后细胞活力明显降低,而凋亡率、TNF-α、IL-6水平明显升高(P<0.05)。结论 蛇床子素可通过促进SNHG5的表达增强细胞增殖能力而抑制细胞凋亡及炎症反应从而减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤。

lncRNA HCP5靶向miR-409-3p对皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨lncRNA HCP5靶向mlR-409-3p对皮肤鳞状细胞癌(CSCC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:采用qRT-PCR法检测CSCC细胞(SCC13、A431、HSC-5)中HCP5和miR-409-3p的表达情况,筛选用于实验的CSCC细胞。将抑制HCP5表达的质粒si-HCP5及其对照(si-NC)、过表达miR-409-3p的miR-409-3p模拟物及其对照(miR-NC)、抑制HCP5和miR-409-3p的si-HCP5+anti-miR-409-3p及其对照(si-HCP5+anti-miR-NC)分别转染SCC13细胞。采用CCK-8法和Transwell实验检测SCC13细胞增殖、迁移、侵袭能力,Western blot法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9蛋白表达水平。通过双荧光素酶报告基因实验验证HCP5和miR-409-3p的靶向关系。结果:SCC13细胞中HCP5表达最高,miR-409-3p表达最低(P<0.05)。抑制HCP5表达后SCC13细胞增殖能力降低,细胞迁移数和侵袭数减少,CycIinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平降低(P<0.05)。过表达miR-409-3p后SCC13细胞增殖能力降低,细胞迁移数和侵袭数减少,CycinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示lncRNA HCP5和miR-409-3p存在靶向关系。抑制miR-409-3p表达可减弱HCP5低表达对SCC13细胞增殖以及迁移、侵袭能力的影响(P<0.05)。结论:抑制HCP5可通过靶向促进miR-409-3p表达来抑制CSCC细胞增殖、迁移和侵袭。

灰树花多糖通过LncRNA HULC/miR-186-5p轴调控胆囊癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:分析灰树花多糖(Grifola frondose polysaccharide,GFP)对胆囊癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法:将对数期GBC-SD细胞随机分组:对照组、GFP组(0.5、1、2µg/mL GFP)、shNC组、shHULC组、miR-NC组、miR-186-5p mimics组、GFP+pcDNA组、GFP+pcDNA-HULC组。CCK-8法检测细胞抑制率;Transwell小室法检测GBC-SD细胞迁移和侵袭;Western Blot印迹检测Cyclin D1、P21、MMP-2、MM-9蛋白水平;qRT-PCR检测LncRNA HULC和miR-186-5p的水平;Starbase在线软件预测HULC与miR-186-5p的结合位点,双荧光素酶报告实验检测LncRNA HULC和miR-186-5p的靶向关系。裸鼠移植瘤实验检测GFP对GBC-SD细胞移植瘤体内生长的影响。结果:0.25~8µg/mL GFP对胆囊癌GBC-SD细胞具有一定的抑制作用;与对照组比较,0.5、1、2µg/mL的GFP(极)显著(P<0.05,P<0.01)抑制GBC-SD细胞迁移和侵袭,(极)显著降低Cyclin D1、MMP-2和MM-9水平(P<0.05,P<0.01),(极)显著(P<0.05,P<0.01)增加P21水平,极显著(P<0.01)下调LncRNA HULC,上调miR-186-5p的表达(P<0.05,P<0.01);Starbase在线软件预测HULC与miR-186-5p存在结合位点,与miR-NC组比较,miR-186-5p mimics组HULC-WT的荧光素酶活性极显著降低(P<0.01),而HULC-MUT荧光素酶活性无统计学差异(P>0.05);与shNC组比较,shHULC组HULC相对表达水平极显著(P<0.01)降低,miR-186-5p相对表达水平极显著(P<0.01)增加,细胞存活率、迁移数目、侵袭数目极显著(P<0.01)降低,Cylin D1、MMP-2和MM-9水平极显著下调(P<0.01);与GFP+pcDNA组比较,GFP+pcDN-HULC组抑制率显著降低(P<0.05),迁移数目、侵袭数目极显著增加(P<0.01),Cylin D1、MMP-2和MM-9水平显著上调(P<0.05);与GFP+pcDNA给药组比较,GFP+pcDN-HULC给药组瘤体体积、质量极显著增加(P<0.01),miR-186-5p水平极显著下调(P<0.01)。结论:GFP可抑制胆囊癌细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制与调控LncRNA HULC/miR-186-5p有关。

滋金补水膏对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的治疗作用及对lncRNAPVT1、miR-30b-5p表达的影响

【目的】探讨滋金补水膏对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠的治疗作用及机制。【方法】将96只大鼠随机分为正常组,模型组,滋金补水膏低、中、高剂量组,盐酸氨溴索组、滋金补水膏高剂量+pcDNA组,滋金补水膏高剂量+pcDNA-人浆细胞瘤转化迁移基因1(PVT1)组,每组12只。除正常组外,其他各组大鼠采用气道滴注脂多糖(LPS)联合烟雾暴露法构建COPD模型。建模成功后,进行给药干预。给药结束后,采用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测大鼠血清中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;流式细胞术检测大鼠外周血中辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)水平,苏木素-伊红(HE)染色法观察肺组织病理变化,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测血清和肺组织中长链非编码RNA(lncRNA)PVT1、miR-30b-5p表达,Western Blot法检测肺组织中维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)、叉头框蛋白P3(Foxp3)蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA PVT1与miR-30b-5p的关系。【结果】与正常组比较,模型组肺泡间隔变大,支气管周围有大量炎症细胞浸润,Treg细胞比例、miR-30b-5p表达水平、Foxp3蛋白表达水平降低,IL-6、TNF-α水平,Th17细胞比例、Th17/Treg比值,lncRNA PVT1表达水平,RORγt蛋白表达水平升高(均P<0.05);与模型组比较,滋金补水膏低、中、高剂量组及盐酸氨溴索组大鼠肺组织病理损伤减轻、Treg细胞比例、miR-30b-5p表达水平、Foxp3蛋白表达水平升高,IL-6、TNF-α水平,Th17细胞比例,Th17/Treg比值,lncRNA PVT1表达水平,RORγt蛋白表达水平降低(均P<0.05)。lncRNA PVT1靶向调控miR-30b-5p表达。【结论】滋金补水膏可能通过调节lncRNA PVT1/miR-30b-5p轴促进Th17/Treg细胞平衡来抑制COPD大鼠炎症反应。

LncRNA SNHG5调控miR-23a-3p影响恶性黑色素瘤细胞增殖和凋亡的作用机制

目的探讨长链非编码RNA SNHG5(LncRNA SNHG5)对恶性黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养人黑色素瘤细胞株A375、G361、M14、WM115与人类皮肤黑色素细胞(NHEM)。实验将A375细胞随机分为NC组、si-con组、si-SNHG5组、si-SNHG5+anti-miR-con组、si-SNHG5+anti-miR-23a-3p组。采用qRT-PCR法检测细胞SNHG5与miR-23a-3p表达。MTT法与Annexin V/PI染色法检测转染后各组A375细胞增殖活性及凋亡率。采用双荧光素酶报告实验证实SNHG5的靶作用位点。Western blotting法检测Bcl-2、Bax及AKT信号通路相关蛋白表达。结果与NHEM相比,不同黑色素瘤细胞中SNHG5表达水平显著上调(P<0.05),而miR-23a-3p表达水平显著下调(P<0.05);沉默SNHG5表达可显著抑制黑色素瘤A375细胞增殖并促进细胞凋亡;双荧光素酶报告实验证实miR-23a-3p是SNHG5的直接靶点;干扰miR-23a-3p可部分逆转沉默SNHG5对A375细胞的抑制作用;沉默SNHG5表达可促进Bax表达,抑制Bcl-2与p-AKT表达,但沉默miR-23a-3p后Bcl-2与p-AKT表达上调,而Bax表达下调。结论沉默SNHG5通过调控miR-23a-3p表达进而抑制黑色素瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡。

LncRNA NORAD通过miR-513b-5p/GREM1轴调节颅内动脉瘤血管平滑肌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的作用机制

目的:探讨长链非编码RNA DNA损伤诱导的非编码RNA(LncRNA NORAD)通过miR-513b-5p/GREM1轴调节颅内动脉瘤血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、迁移、侵袭和凋亡的机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测人颅内动脉瘤组织和正常组织中LncRNA NORAD、miR-513b-5p及GREM1表达。体外分离培养人VSMC,随机分为对照组、LncRNA NORAD siRNA组、miR-513b-5p mimics组、共转染(LncRNA NORAD siRNA+miR-513b-5p inhibitor)组、共转染阴性对照(LncRNA NORAD siRNA阴性对照+miR-513b-5p inhibitor阴性对照)组,分组转染后,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞LncRNA NORAD、miR-513b-5p及GREM1 mRNA表达;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和免疫荧光染色检测各组细胞增殖情况;采用Hoechst 33342染色和免疫荧光染色检测各组细胞凋亡情况;采用细胞划痕实验和Transwell实验检测各组细胞迁移、侵袭情况;采用免疫印记实验检测各组细胞上皮间充质转化(EMT)标志蛋白神经钙黏素(N-cadherin)、E-钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达;采用双荧光素酶报告实验分析VSMC中LncRNA NORAD对miR-513b-5p、miR-513b-5p对GREM1的靶向调控。结果:与正常组织比较,颅内动脉瘤组织LncRNA NORAD、GREM1 mRNA表达明显升高(P<0.05),miR-513b-5p表达明显降低(P<0.05)。与对照组比较,LncRNA NORAD siRNA组、miR-513b-5p mimics组细胞GREM1 mRNA表达、增殖率、Ki67阳性率、迁移率、侵袭数及N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低(P<0.05),miR-513b-5p表达、凋亡率及Bax/Bcl-2、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);共转染阴性对照组各指标差异无统计学意义(P>0.05)。与LncRNA NORAD siRNA组比较,共转染组细胞GREM1 mRNA表达、增殖率、Ki67阳性率、迁移率、侵袭数及N-cadherin、Vimentin蛋白表达升高(P<0.05),miR-513b-5p表达、凋亡率及Bax/Bcl-2、E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05)。结论:敲低LncRNA NORAD可通过上调miR-513b-5p表达而降低GREM1表达,从而抑制VSMC增殖与侵袭迁移,并促使其凋亡。

LncRNA SNHG8在胎盘植入的表达及其对滋养细胞侵袭及迁移的影响

目的 探讨lncRNA SNHG8在胎盘植入(placenta accreta,PA)中的表达及对滋养细胞侵袭迁移的影响。方法 采用q RT-PCR检测PA组及对照组各30例胎盘组织中lncRNA SNHG8的表达,同时与30例PA患者产前超声评分做相关性分析。采用Transwell和划痕实验检测干扰lncRNA SNHG8后对人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/SVneo cells)侵袭和迁移的影响,同时,Western blot检测MMP-2和MMP-9的表达情况;StarBase软件预测lncRNA SNHG8下游靶点,并在两组胎盘组织中检测其表达;双荧光素酶报告实验检测lncRNA SNHG8与miR-542-3p的靶向关系。结果 与对照组比较,lncRNA SNHG8在胎盘植入组胎盘组织中表达上调(P <0.05),并与产前超声评分呈正相关。干扰lncRNA SNHG8后抑制了滋养细胞的侵袭迁移(P <0.05),MMP-2及MMP-9蛋白表达也明显下降(P <0.05)。生物学预测miR-542-3p存在与lncRNA SNHG8的结合位点,miR-542-3p在PA胎盘组织中表达下调(P <0.05),双荧光素酶报告实验证实lncRNA SNHG8能靶向调控miR-542-3p。共转染si-SNHG8与miR-542-3p inhibitor后,与si-SNHG8+inhibitor-NC相比,滋养细胞侵袭迁移能力增强(P <0.05)。结论 lncRNA SNHG8在PA胎盘组织中高表达并与其严重程度相关,lncRNA SNHG8通过调节miR-542-3p水平促进滋养细胞侵袭迁移行为学功能,提示lncRNA SNHG8在PA滋养细胞的侵袭迁移中发挥重要作用,有望成为临床诊断生物标记物和治疗靶点。

慢阻肺患者外周血单个核细胞lncRNA SNHG5的表达与炎症因子水平相关性研究

目的探讨慢阻肺(COPD)患者外周血单个核细胞lncRNA SNHG5的表达与炎症因子水平相关性.方法选取COPD稳定期患者80例,急性加重期患者80例,健康志愿者80名为对照组.分离外周血单个核细胞,RT-PCR检测lncRNA SNHG5、核苷酸结合寡聚化结构域1(NOD1)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)的mRNA表达;Western blot检测NOD1、NLRP3的蛋白表达;酶联免疫吸附法检测血清C反应蛋白、肿瘤坏死因子α、白细胞介素-6(IL-6)表达水平.结果COPD急性加重期组lncRNA SNHG5的表达水平明显低于COPD稳定期组和对照组,COPD稳定期组明显低于对照组(P<0.05).COPD急性加重期组NOD1、NLRP3的mRNA和蛋白表达水平明显高于COPD稳定期组和对照组,COPD稳定期组明显高于对照组(P<0.05).COPD急性加重期组血清C反应蛋白、肿瘤坏死因子α、IL-6水平明显高于COPD稳定期组和对照组,COPD稳定期组明显高于对照组(P<0.05).Pearson相关性分析显示:COPD患者外周血单核细胞中lncRNA SNHG5表达与血清C反应蛋白、肿瘤坏死因子α、IL-6呈负相关关系(r=-0.719、-0.734、-0.760,均P<0.001).COPD患者外周血单核细胞中NOD1、NLRP3表达与血清C反应蛋白、肿瘤坏死因子α、IL-6呈正相关关系(r=0.736、0.750、0.728,均P<0.001;r=0.765、0.792、0.780,均P<0.001).结论慢阻肺患者外周血单核细胞中lncRNA SNHG5、NOD1、NLRP3可能通过调控炎症因子C反应蛋白、肿瘤坏死因子α、IL-6的表达参与COPD病情的发生与进展,其结果可用于临床诊断和预后评估.

非小细胞肺癌患者外周血中lncRNA SNHG5的表达及诊断意义

目的探讨血清lncRNA SNHG5在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达情况及其诊断价值。方法收集我院60例行手术治疗的NSCLC患者和60例健康体检者的血清样本,使用RT-qPCR法检测血清中SNHG5的表达水平。分析血清SNHG5水平与NSCLC患者临床病理参数和传统血清学指标的关系;利用ROC曲线分析SNHG5对NSCLC的早期诊断价值。结果健康体检者、肺良性结节患者和NSCLC患者血清SNHG5表达水平分别为(2.03±0.63)和(1.61±0.57),差异有统计学意义(P=0.002)。血清SNHG5表达与肿瘤大小具有相关性(P=0.036),但与年龄、性别、吸烟史和TNM无相关性(均P>0.05)。与健康体检者比较,Ⅰ期NSCLC患者血清SNHG5表达下降(P <0.001);但Ⅱ期和Ⅲ期的NSCLC患者血清SNHG5表达与健康体检者比较差异无统计学意义(均P> 0.05)。血清SNHG5水平与NSE和CA125无相关性,而与CEA(P=0.028)和CA199(P <0.001)有相关性。ROC曲线结果表明,血清SNHG5早期诊断NSCLC的AUC为0.735(0.647~0.812),敏感性和特异性为68.33%和76.67%。结论 SNHG5在NSCLC患者血清中表达下降,有望成为早期诊断NSCLC的新型分子标志物。

lncRNA SNHG6在鳞状食管癌组织中的表达及其临床意义

目的 探究lncRNA SNHG6在鳞状食管癌组织中的表达及其临床意义。方法 将符合标准的96例鳞状食管癌患者纳入本研究。分析TCGA数据库中SNHG6在正常食管组织及癌组织中的表达差异。采用qPCR法检测SNHG6在ESCC癌组织及癌旁组织中的mRNA表达水平。并分析SNHG6表达与ESCC患者临床特征的相关性。结果SNHG6在ESCC组织中的表达水平明显高于正常食管组织(t=12.59,P<0.0001)。96例ESCC组织中SNHG6 mRNA表达水平显著高于癌旁组织(t=17.93,P<0.0001)。ESCC组织中SNHG6表达水平与患者性别、年龄、吸烟史和家族肿瘤史无关(P均>0.05),与TNM分期(χ^(2)=12.834,P<0.0001)、分化程度(χ^(2)=15.886,P<0.0001)和饮酒史(χ^(2)=4.051,P=0.044)有关。结论 SNHG6在ESCC组织中呈高水平表达,其高表达与ESCC患者TNM分期、分化程度和饮酒史密切相关,可作为分子标志物为早期诊断和预后判断提供基础。

沉默lncRNA MCF2L-AS1通过miR-138-5p/AnxA2轴抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探究lncRNA MCF2L-AS1对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响与机制。方法:qRT-PCR检测正常人乳腺上皮细胞系MCF-10A、乳腺癌细胞系(MDA-MB-415、MCF7、SKBR3、MDA-MB-231)中lncRNA MCF2L-AS1、miR-138-5p水平;将si-NC、si-MCF2L-AS1、si-MCF2L-AS1+inhibitor NC、si-MCF2L-AS1+miR-138-5p inhibitor分别转染至MDA-MB-415细胞并命名为si-NC组、si-MCF2L-AS1组、si-MCF2L-AS1+inhibitor NC组、si-MCF2L-AS1+miR-138-5p inhibitor组,未做任何处理的MDA-MB-415细胞记为NC组。qRT-PCR检测MDA-MB-415细胞中lncRNA MCF2L-AS1、miR-138-5p表达;MTT法检测MDA-MB-415细胞增殖情况;流式细胞术检测MDA-MB-415细胞凋亡率;Transwell检测MDA-MB-415细胞侵袭、迁移数量;Western blot检测MDA-MB-415细胞E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、AnxA2蛋白水平;双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA MCF2L-AS1、miR-138-5p、AnxA2的关系;小鼠异种移植实验检测肿瘤生长。结果:与MCF-10A细胞相比,MDA-MB-415、MCF7、SKBR3、MDA-MB-231细胞中lncRNA MCF2L-AS1、AnxA2水平显著上调(P<0.05),miR-138-5p表达显著下调(P<0.05)。与NC组、si-NC组相比,si-MCF2L-AS1组MDA-MB-415细胞OD 560 nm值、迁移、侵袭细胞数量、lncRNA MCF2L-AS1表达、N-cadherin、Vimentin蛋白水平、小鼠肿瘤体积、肿瘤质量显著下降(P<0.05),MDA-MB-415细胞凋亡率、miR-138-5p表达、E-cadherin蛋白水平显著升高(P<0.05);而抑制miR-138-5p表达减弱了沉默lncRNA MCF2L-AS1抑制MDA-MB-415细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤生长的效果;lncRNA MCF2L-AS1负向调控miR-138-5p/AnxA2轴。结论:沉默lncRNA MCF2L-AS1可能通过上调miR-138-5p来下调AnxA2的表达,进而抑制乳腺癌MDA-MB-415细胞增殖、迁移和侵袭。

lncRNA SNHG6对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞损伤的影响

目的:探讨lncRNA SNHG6对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(hRMECs)损伤的影响及其可能的作用机制。方法:采用高糖诱导hRMECs建立细胞损伤模型。高糖(HG)组将hRMECs培养在浓度为25 mmol/L D-葡萄糖的DMEM培养基24 h;正常(NG)组将hRMECs培养在浓度为5.5 mmol/L D-葡萄糖的DMEM培养基;按照实验设计分别将si-NC、si-SNHG6、si-SNHG6和anti-miR-NC、si-SNHG6和anti-miR-186-5p转染至hRMECs,随后25 mmol/L D-葡萄糖孵育24 h,分别记为HG+si-NC组、HG+si-SNHG6组、HG+si-SNHG6+anti-miR-NC组、HG+si-SNHG6+anti-miR-186-5p组。qRT-PCR法检测lncRNA SNHG6、miR-186-5p的表达量;双荧光素酶报告实验检测lncRNA SNHG6与miR-186-5p的靶向关系;MTT法与流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;ELISA法检测IL-1β、TNF-α、IL-8、IL-10的水平;采用试剂盒检测SOD的活性和MDA的水平;Western blot检测cleaved-caspase3、Bax、Bcl-2蛋白表达量。结果:HG组与NG组比较lncRNA SNHG6表达升高,miR-186-5p表达降低(均P<0.05);lncRNA SNHG6可靶向结合miR-186-5p。转染si-SNHG6后细胞增殖抑制率、凋亡率、cleaved-caspase3、Bax蛋白水平,IL-1β、TNF-α、IL-8含量以及MDA活性降低(P<0.05),而Bcl-2蛋白、IL-10含量以及SOD的活性升高(P<0.05)。共转染si-SNHG6和anti-miR-186-5p后,细胞增殖抑制率、凋亡率、cleaved-caspase3、Bax、IL-1β、TNF-α、IL-8以及MDA升高(P<0.05),而Bcl-2蛋白、IL-10和SOD降低(P<0.05)。结论:干扰lncRNA SNHG6表达可通过促进miR-186-5p表达而抑制高糖诱导的hRMECs凋亡、炎症反应及氧化应激。

lncRNA SNHG18在膀胱癌组织中的表达及其对细胞恶性生物学行为的影响

目的研究长链非编码RNA SNHG18基因在膀胱癌组织膀胱癌细胞系中的表达情况及其对细胞恶性生物学行为的影响。方法选取2021年8月至2022年10月行手术治疗的膀胱癌患者42例,应用RT-qPCR检测SNHG18基因在42例膀胱癌组织及3株膀胱癌细胞(5637、T24、SW780)中的表达情况;构建过表达载体pcDNA3.1-SNHG18与敲低载体SNHG18分别转染膀胱癌细胞,应用细胞增殖实验、细胞克隆形成实验、划痕实验、Transwell小室侵袭实验来观察膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化。结果SNHG18在膀胱癌组织及细胞中的表达低于正常的膀胱上皮组织和膀胱上皮细胞,差异有统计学意义(P<0.05);SNHG18的表达量与性别、年龄、有无吸烟、有无高血压、有无糖尿病、有无淋巴结和远处转移及临床分期间无相关性(P>0.05);过表达SNHG18可抑制膀胱癌细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05);敲低SNHG18可增强膀胱癌细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05)。结论SNHG18在膀胱癌组织中表达量降低,与临床参数无关,与膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭能力有关。

lncRNA SNHG7通过miR-122-5p/CCND1轴调节胃癌细胞的增殖、凋亡及肿瘤免疫逃逸

目的探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因(lncRNA SNHG)7通过miR-122-5p/细胞周期蛋白(CCN)D1轴对胃癌细胞的增殖、凋亡及肿瘤免疫逃逸的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测体外培养的人胃癌细胞株NCI-N87、SNU-1、MKN-45和人胃癌组织源细胞、人胃黏膜上皮细胞中lncRNA SNHG7、miR-122-5p与CCND1表达。体外培养的人胃癌细胞MKN-45,随机分为对照组、lncRNA SNHG7 siRNA(si-lncRNA SNHG7)组、lncRNA SNHG7 siRNA阴性对照(si-NC)组、lncRNA SNHG7 siRNA(si-lncRNA SNHG7)+miR-122-5p inhibitor组,分组转染后,检测各组MKN-45细胞增殖、凋亡、活化CD8+T细胞杀伤率、miR-122-5p及CCND1、细胞增殖核抗原(PCNA)、凋亡蛋白〔B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3〕表达,并检测lncRNA SNHG7对MKN-45细胞miR-122-5p的靶向调节作用。结果与胃黏膜上皮细胞相比,胃癌组织源和MKN-45、SNU-1、NCI-N87细胞lncRNA SNHG7、CCND1 mRNA表达明显升高,miR-122-5p表达明显降低(P<0.05)。与对照组相比,si-lncRNA SNHG7组细胞活力、EdU阳性率、细胞CCND1、PCNA蛋白表达明显降低,凋亡率、活化CD8+T细胞对各组MKN-45细胞的杀伤率、miR-122-5p及Bax、caspase-3蛋白表达明显升高(均P<0.05);si-NC组细胞各指标均无显著差异(P>0.05);lncRNA SNHG7 siRNA和miR-122-5p inhibitor联合可逆转lncRNA SNHG7 siRNA对细胞各指标的作用。lncRNA SNHG7可靶向下调MKN-45细胞miR-122-5p表达。结论下调lncRNA SNHG7可通过上调miR-122-5p而降低CCND1表达,进而抑制胃癌细胞增殖,促进其凋亡,并减轻其免疫逃逸。

反复不明原因自然流产孕妇外周血单核细胞中lncRNASNHG5、KLF4表达及临床意义

目的:探讨反复不明原因自然流产(URSA)孕妇外周血单核细胞中长链非编码RNA(lncRNA)SNHG5、KLF4表达水平及临床意义。方法:选取2018年4月-2019年12月本院收治的URSA孕妇40例为流产组,正常妊娠要求人工流产孕妇40例为早孕组,健康非孕妇女40例为非孕组。测定外周血单核细胞中lncRNA SNHG5、KLF4表达水平,血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素4(IL-4)、IL-12水平。采用多因素logistic回归模型分析URSA发生相关因素。结果:非孕组、早孕组、流产组外周血单核细胞中lncRNA SNHG5 mRNA、KLF4 mRNA和蛋白表达,血清TNF-α、IL-4、IL-12水平均依次升高(均P<0.05)。外周血单核细胞中lncRNA SNHG5 mRNA、KLF4 mRNA和蛋白表达与血清TNF-α、IL-4、IL-12均呈正相关(均P<0.05)。异常高水平lncRNA SNHG5 mRNA、KLF4 mRNA和蛋白均为URSA发生的相关因素(P<0.05)。结论:URSA孕妇外周血单核细胞中lncRNA SNHG5、KLF4表达水平异常升高,且是URSA发生的影响因素。

黄芪糖蛋白干扰lncRNA GAS5/miR-21/TLR4信号轴抑制细胞焦亡改善佐剂性关节炎大鼠心肌损伤

目的基于长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5/微小RNA 21/Toll样受体4(lncRNA GAS5/miR-21/TLR4)信号轴探究黄芪糖蛋白(HQGP)对佐剂性关节炎(AA)大鼠心肌损伤的作用及机制。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、甲氨蝶呤(MTX)组、HQGP组,每组6只。复制AA模型,第19天开始给药,连续4周。检测各组AA大鼠足趾肿胀度、关节炎指数(AI),HE染色观察大鼠心肌组织病理变化,透射电镜观察心肌组织超微结构的变化及焦亡小体情况,ELISA检测血清白细胞介素6(IL-6)、IL-18、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测心肌组织LDH释放量,实时荧光定量PCR检测心肌组织核因子κB p65(NF-κB p65)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、含pyrin结构域核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDMD)的mRNA以及lncRNA GAS5/miR-21/TLR4信号轴分子的表达,Western blot法检测心肌组织TLR4、NF-κB p65、caspase-1、NLRP3和GSDMD蛋白水平。结果与正常对照组相比,模型组大鼠足趾肿胀度、AI显著升高;大鼠心肌纤维溶解、断裂,肌节结构模糊,心肌纤维排列紊乱,组织间有炎性细胞浸润,线粒体嵴明显断裂稀疏,焦亡小体数量增加;血清促炎细胞因子IL-6、IL-18、IL-1β和TNF-α表达显著升高;心肌组织中GAS5表达显著降低,miR-21表达显著升高,LDH释放量、TLR4、NF-κB p65、caspase-1、NLRP3、GSDMD的mRNA和蛋白表达水平显著升高。与模型组比较,HQGP组大鼠足趾肿胀度、AI和心肌组织病理状态明显改善;血清IL-6、IL-18、IL-1β和TNF-α表达显著降低;心肌组织中GAS5表达显著升高,miR-21表达显著降低,LDH释放量、TLR4、NF-κB p65、caspase-1、NLRP3的mRNA和蛋白表达水平显著降低,GSDMD的mRNA表达降低且蛋白水平显著降低。结论HQGP通过上调lncRNA GAS5抑制miR-21/TLR4信号传导,抑制细胞焦亡,减少促炎细胞因子表达,改善AA大鼠心肌损伤。