白杨素通过调控SNHG9/miR-184对IL-1β诱导的软骨细胞损伤的保护作用

目的 探讨白杨素对白细胞介素(IL)-1β诱导的软骨细胞损伤的影响及可能机制。方法 体外培养人软骨细胞,不同浓度(20、40、60μg/L)的白杨素与10 ng/ml的IL-1β共同干预软骨细胞24 h后,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹法检测细胞中裂解的半胱氨酸蛋白水解酶(Cleaved-caspase)3蛋白表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中IL-8、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,RT-聚合酶链反应(qPCR)检测细胞中小核仁RNA宿主基因(SNHG)9和miR-184表达。转染SNHG9过表达载体或小干扰RNA至软骨细胞后,用10 ng/ml的IL-1β干预24 h或60μg/L白杨素与10 ng/ml IL-1β共同干预24 h,上述相同方法检测细胞增殖、凋亡、Cleaved-caspase3蛋白表达及细胞培养上清中IL-8、IL-6、TNF-α水平。双荧光素酶报告基因实验验证SNHG9和miR-184靶向关系。结果 20、40、60μg/L的白杨素显著提高了IL-1β诱导的软骨细胞光密度(OD)值(P<0.05),显著降低了细胞凋亡率及Cleaved-caspase3蛋白表达量(P<0.05),同时显著降低了软骨细胞培养上清中IL-8、IL-6、TNF-α表达量(P<0.05),且呈浓度依赖性。上调SNHG9显著提高了IL-1β诱导的软骨细胞OD值(P<0.05),显著降低了细胞凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白表达量及细胞培养上清中IL-8、IL-6、TNF-α表达量(P<0.05),而下调SNHG9与上调SNHG9的作用相反。SNHG9靶向负调控miR-184。白杨素促进IL-1β诱导的软骨细胞中SNHG9的表达,而抑制了miR-184的表达。下调SNHG9逆转白杨素对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及炎症因子表达的抑制作用。结论 白杨素可抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡和炎性因子表达,其可能通过调控SNHG9/miR-184轴发挥作用。

LncRNA SNHG9在正常机采血小板储存中表达变化及意义

目的探讨正常机采血小板储存过程中伴随储存时间延长长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因9(SNHG9)的表达变化及意义。方法收集符合临床血小板输注治疗标准的正常机采血小板32份,保存于专用(22±2)℃恒温振荡保存箱内,在不同储存时间(1、3、5、7、9 d)通过外观、血小板计数、红细胞残留量计数、白细胞残余量计数、pH值及细菌培养检测血小板质量;用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SNHG9在同一机采血小板样本不同储存时间的表达量,分析其对血小板储存损伤(PSL)的影响及意义。结果在第1、3、5、7、9天SNHG9表达量伴随储存时间延长逐渐增高,数据总体存在统计学差异(H=93.073,P<0.001),差异有统计学意义(P<0.05)。进一步对不同天数之间SNHG9表达量进行两两多重比较,第1天与第3天校正后的P值是0.144,差异无统计学意义(P>0.05);第1天和第5天,第1天和第7天,第1天和第9天校正后的P值均小于0.001,差异有统计学意义(P<0.05);第3天和第5天(P=0.031),第3天和第7天,第3天和第9天(P<0.001)校正后差异有统计学意义。结论用于临床治疗的正常机采血小板伴随储存时间延长,第5、7、9天样本中SNHG9表达量比第1天明显增高,SNHG9对血小板储存条件敏感,有可能成为PSL潜在的生物学标记物。

LncRNA SNHG9敲除对胶质瘤细胞增殖影响及其作用机制的生物信息学探讨

目的利用CRISPR-Cas9结合流式单细胞分选构建lncRNA SNHG9基因敲除的U251细胞株,检测基因敲除对细胞增殖能力的影响。利用生物信息学分析探讨SNHG9基因发挥功能的可能机制。方法在SNHG9基因上、下游分别设计一个Cas9作用靶点,将两对单链向导RNA的引物模板退火连接px330-EGFP载体,构建成功的目的质粒共转染U251细胞后,通过流式单细胞分选在96孔板中培养,通过PCR扩增和测序验证筛选得到SNHG9敲除成功的单克隆细胞株并扩大培养。RTCA方法检测SNHG9敲除后细胞增殖能力的改变。利用在线工具分析lncRNA SNHG9的表达情况,查找共表达基因并进行富集分析。结果构建成功用于SNHG9敲除的质粒。培养共存活了8个克隆,且得到1株SNHG9成功敲除的细胞株。敲除细胞的增殖能力明显降低(P<0.05)。分析显示SNHG9在胶质母细胞瘤(GBM)组织中高表达,富集分析显示共表达基因主要与线粒体的功能相关。结论成功建立了SNHG9敲除的克隆细胞株且能抑制U251细胞的增殖,生物信息学分析显示SNHG9可能参与线粒体的功能调控。

LncRNA SNHG9在肿瘤中的研究进展

长链非编码RNA是一类分子大小超过200个核苷酸缺乏明显的开放阅读框架不能编码蛋白质的新型转录物。随着基因组学技术的发展,越来越多的研究发现LncRNA在人类癌症中可以作为一个重要的启动肿瘤或者抑制肿瘤的信号,进而导致肿瘤的发生。小核仁RNA宿主基因9(SNHG9)是一种膜脂相关的且在肿瘤组织中有较高表达丰度的LncRNA,已被证明能通过多种信号通路轴来调控多种肿瘤(如非小细胞肺癌、肝细胞癌、甲状腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、胰腺癌、前列腺癌以及胶质母细胞瘤等)的发生、发展和转移。本文主要就LncRNA SNHG9在肿瘤中的的研究现状进行阐述。LncRNA SNHG9可以作为治疗肿瘤的一个有效的靶点,有望成为相关肿瘤的潜在的生物标志物,来监测肿瘤患者的病情进展。

长链非编码RNA SNHG9在不同肿瘤中的最新研究进展

长链非编码RNA(Inc RNA)是一类不具有蛋白编码阅读框、不能被翻译成特定蛋白发挥作用的RNA分子。研究发现,lncRNA具有恒定的组织特异性,并且在不同肿瘤的恶性生物学特征中发挥着重要作用。随着研究的不断深入,小核仁RNA管家基因9(RNA SNHG9)已被证实能够通过不同的作用机制在诸如非小细胞肺癌、胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌以及前列腺癌中发挥作用,或者作为良好的生物标志物为相关肿瘤的临床诊疗提供可靠依据,因此具有很高的研究价值和前景。该文对国内外SNHG9在不同肿瘤中的最新研究现状进行综述。