变性高压液相色谱法分析肺癌患者痰标本Rb2/p130、p53基因突变

目的 探讨变性高压液相色谱 (DHPLC)法分析肺癌患者痰标本Rb2 /p130和 p5 3突变及其作为分子诊断标记的可行性。方法 DHPLC法分析 4 7例患者痰标本 [35例肺癌 (男 2 2例 ,女13例 ,年龄 16～ 81岁 ;其中腺癌 17例 ,鳞癌 12例 ,小细胞癌 4例 ,肺泡癌 1例 ,腺鳞癌 1例 ) ,12例对照 (男 7例 ,女 5例 ,年龄 38～ 6 8岁 ;其中结核 1例 ,肺炎 1例 ,支气管扩张症 2例 ,肺泡蛋白沉积症 1例 ,结节病 1例 ,多发性软骨炎 1例 ,慢性阻塞性肺疾病 5例 ) ]Rb2 / p130基因Exon19～ 2 2和 p5 3基因Exon 5～ 9突变。结果 肺癌患者Rb2 /p130突变检出率为 2 2 86 % (8/ 35 ) ,p5 3突变检出率为2 8 5 7% (10 / 35 ) ,对照者均未检出 1例 (P =0 0 4 9,P =0 0 4 6 )。作为肺癌诊断分子标记 ,Rb2 / p130特异度 10 0 % ,灵敏度 2 2 86 % ;p5 3特异度 10 0 % ,灵敏度 2 8 5 7% ;联合检测Rb2 / p130和 p5 3特异度10 0 % ,灵敏度 5 1 4 3%。结论 联合分析痰标本Rb2 / p130和p5 3基因突变可提高诊断的灵敏度。

氨基酸、肽和蛋白质的色谱分析及色谱法制备

CA 97(01)3041c J 势垒色谱:蛋白质分离的高压液相色谱法Ruckenstein,E,et al.,Sep.Sci.Technol.,1982,17(6),763—83, 英文CA 97(01)3046h J 运用精氨酸衍生物的亲和方法Ishii,Shinichi,et al.,Methods Enrymol.,1981,80(Proteolytic Enz- ymes,PT.C)842—8。

单核苷酸多态性分析方法

SNP是第三代遗传标记,在法庭科学及其领域中具有重要作用。当前,已建立了许多SNP分析方法,本文介绍变性高压液相色谱法、时间飞行质谱熔解曲线法、熔解温度曲线法、等位基因特异扩增结合熔解曲线法、分子信号和TaqMan等新的SNP分析方法。

供化学分析和毒理学试验的水中有机物的分离

水质化学分析所测得的有机污染物浓度不能提供水样毒性或味觉方面的信息,而毒理学试验虽能提供污染水样潜在危险性的信息,但它不能鉴别毒性效应系由何种化合物所致。所以,将化学测定和毒理学测定两者联系起来才最为理想。为此,就有必要对同一样品既用化学方法,又用毒理学方法进行测定。但已发表的方法皆不能同时满足上述两者的要求,故需提出新方法。这种新方法对水中微量污染物进行分离和浓缩时,必须能满足毒理学测定和化学分析两方面的要求,例如: 1.毒理学试验要求被分离的有机物必须能溶于水溶性的溶剂中。

74例肝豆状核变性患者中ATP7B基因七种新突变的发现

目的分析中国人肝豆状核变性(Wilsondisease,WD)患者ATP7B基因突变的分布特征,建立利用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对Wilson病进行基因诊断的方法,并评价其在临床的应用价值。方法对临床确诊为Wilson病的74例患者及50名健康人抽取外周静脉血提取基因组DNA。以患者和健康人的DNA为模板,分别对ATP7B基因的21个外显子进行PCR扩增。取PCR产物应用DHPLC技术在部分变性条件下检测突变并DNA测序证实突变位点。结果利用DHPLC技术筛查并经测序证实,共发现22种ATP7B基因突变类型,其中7种是新发现的,同时发现11种多态,其中3种是新发现的。第8外显子Arg778Leu突变率最高,其频率为25.0%。其次,2356-2A>G突变频率为3.4%,Arg919Gly突变频率为2.7%,其他外显子突变频率均在1.0%～2.0%之间。结论中国人的WD基因突变具有多样性特点,热点突变是第8外显子Arg778Leu。DHPLC具有高通量、敏感、准确且经济的特点,适合于大样本的筛查且能够发现未知的突变,是一种有临床应用价值的基因诊断技术。

高效液相梯度洗脱法测定灵杞黄斑颗粒中毛蕊花糖苷和丹酚酸B含量

目的建立同时测定灵杞黄斑颗粒中毛蕊花糖苷和丹酚酸B含量的反相高效液相梯度洗脱法。方法采用Agilent Eclipse XDB-C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相:乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)进行梯度洗脱,梯度洗脱程序为进样0～8min,调节流动相A∶B(20∶80,V/V);8～20min,流动相A∶B(30∶70,V/V);20～23min,流动相A∶B(20∶80,V/V);流速:1.0mL·min-1,检测波长:334nm,柱温:30℃,进样量:10μL。结果毛蕊花糖苷和丹酚酸B分别在1.50～14.97mg·L-1和18.92～189.23mg·L-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数分别为0.9998和0.9999,平均加样回收率毛蕊花糖苷为(99.7±s1.1)%,RSD=1.12%,丹酚酸B为(99.5±1.0)%,RSD=1.02%,3批样品中毛蕊花糖苷平均含量均不低于36.9μg·g-1,RSD均不大于1.54%,丹酚酸B平均含量均不低于344μg·g-1,RSD均不大于1.94%。结论该方法简便、快速、准确、灵敏度高、专属性强,可用于灵杞黄斑颗粒剂的质量控制。