过表达长链非编码RNA MT1JP抑制视网膜母细胞瘤SO-RB50细胞的增殖、侵袭和体内移植瘤的生长

目的探讨过表达长链非编码RNA MT1JP抑制视网膜母细胞瘤SO-RB50细胞的增殖、侵袭和体内移植瘤的生长机制。方法体外培养视网膜母细胞瘤SO-RB50细胞,并分为空白对照组(control组)、转染对照组(Vector组)及过表达组(MT1JP组);采用RT-PCR检测各组MT1JP的表达;克隆形成检测各组SO-RB50细胞生长情况;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Transwell检测细胞侵袭情况;Western blot检测Ki67、VEGF蛋白表达情况。小鼠皮下注射SO-RB50细胞,建立移植瘤模型;RT-PCR检测长链的表达;统计裸鼠生存时间,绘制生存曲线;检测小鼠肿瘤重量;免疫组化检测小鼠肿瘤组织中Ki67和VEGF的表达情况。结果与空白对照组比较,转染对照组的MT1JP表达、单位面积细胞侵袭数目、Ki67、VEGF蛋白表达均无显著变化(P>0.05);与转染对照组比较,过表达组MT1JP的表达、细胞凋亡率显著升高(P>0.05),克隆实验细胞形成率、Ki67、VEGF蛋白表达、单位面积细胞侵袭数目显著降低(P<0.05);小鼠体内实验显示:与空白对照组比较,转染对照组小鼠肿瘤质量、生存期、Ki67、VEGF蛋白表达均无显著差异(P>0.05);相比转染对照组,过表达组小鼠MT1JP表达、小鼠生存率显著提高(P<0.05);肿瘤质量、Ki67、VEGF蛋白表达显著降低(均P<0.05)。结论过表达长链非编码RNA MT1JP可以抑制视网膜母细胞瘤SO-RB50细胞的增殖、侵袭,促进SO-RB50细胞的凋亡并抑制体内移植瘤的生长。

视网膜母细胞瘤SO-RB_(50)瘤细胞NOD-SCID鼠皮下异位移植全身转移瘤模型的建立

目的:建立人视网膜母细胞瘤(RB)的严重联合免疫缺陷(severe combined immunodeficent)小鼠(NOD-SCID鼠)皮下移植模型,并探讨RB转移的发生、分布规律.方法:NOD-SCID小鼠皮下接种人视网膜母细胞SO-RB50细胞,定期观察小鼠的行为及肿瘤的形成、生长、转移.采用HE,免疫组织化学染色方法,对皮下肿瘤原发灶及远处转移灶行病理组织学研究.结果:皮下接种小鼠肿瘤生长的潜伏期为12～19d,成瘤为100%,5只鼠有远处转移灶,发生转移的时间在32d后,时间分布不一,肿瘤转移灶主要分布在腹腔和肾旁,小鼠的异种移植瘤和转移灶组织形态上与人类的RB一致,光镜下细胞胞质少、核深染、可见病理性核分裂,为未分化型.结论:NOD-SCID小鼠的荷瘤人视网膜母细胞瘤模型,成瘤率高,成瘤潜伏期短,较高转移率的特点.

视网膜母细胞瘤抗原致敏的树突状细胞疫苗抗SO-RB_(50)细胞系的实验研究

目的 研究视网膜母细胞瘤 (RB)抗原致敏的树突状细胞 (DC)疫苗体外特异性对RB细胞系SO RB50 杀伤作用 ,为进一步研究RB的治疗提供新的思路。方法 以RB细胞的蛋白抗原体外冲击致敏健康人 (正常对照组 )及RB患者 (患者组 )来源的成熟DC ,并将其与自体T细胞混合培养 ,诱导出抗SO RB50 的特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL) ,以Burkitt淋巴瘤Raji细胞作为对照靶细胞 ,采用噻唑蓝 (MTT)分别比较CTL对SO RB50 和Raji细胞的杀伤率及正常对照组与RB患者组来源特异性杀伤率的组间差异性。结果 对SO RB50 与Raji 2种靶细胞 ,正常对照组和RB患者组的CTL细胞毒作用均随着效靶比的增加而增加 ,对SO RB50 细胞的杀伤作用各效靶比均强于相应效靶比的Raji细胞(P <0 .0 1) ;各效靶比正常对照组CTL对SO RB50 细胞的特异性杀伤作用均显著强于RB患者组CTL(P <0 .0 1) ;而各效靶比正常对照组与RB患者组CTL对Raji细胞的非特异性杀伤作用则相近 ,两者比较 ,差异无显著意义 (P >0 .0 5 )。结论 应用RB抗原负载DC可诱导出针对SO RB50 细胞抗原特异性的CTL ,这种方法对RB的治疗可能具有潜在的临床应用价值。

piggyBac转座子调节pPiggyBac-Rb质粒的构建

背景:外源性Rb基因的导入是抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖的有效途径,piggyBac转座子介导的外源基因表达载体高效安全,在基因治疗方面具有广阔的应用前景。目的:探讨piggyBac转座子介导的外源性Rb基因的转染效率及其对视网膜母细胞瘤细胞的抑制作用。方法:采用RT-PCR技术扩增Rb基因编码区Rb cDNA,定向插入到载体pPiggyBac,获得PiggyBac调节的Rb表达质粒pPiggyBac-Rb;通过单独转染或合并pPiggyBac-helper转染人视网膜母细胞瘤细胞SO-RB50。结果与结论:考马斯亮蓝染色证明piggyBac转座子系统的转染效率最高,荧光定量PCR以及免疫荧光实验证明其介导的目的基因Rb与宿主SO-RB50细胞基因组整合效率最高且可在细胞中长期稳定表达,MTT实验证明经其所介导的外源性Rb基因表达对细胞活性影响最为显著。结果提示piggyBac转座子有可能成为视网膜母细胞瘤基因治疗的安全有效载体。

视网膜母细胞瘤SO－RB_（50）瘤细胞体外粘附晶体实验的初步报告

视网膜母细胞瘤ＳＯ－ＲＢ５０瘤细胞体外粘附晶体实验的初步报告李永平易玉珍冯官光郑健梁肿瘤细胞侵袭邻近的正常组织及转移是恶性肿瘤最基本的生物学特性之一，对肿瘤侵袭、转移的研究，多限于肺癌、肝癌、黑色素瘤、横纹肌肉瘤等［１～５］，有关视网膜母细胞瘤（ｒｅ...