猪瘟病毒E2蛋白抗原多肽与T4噬菌体SOC蛋白的融合表达

利用 DNA重组技术将猪瘟病毒 (clascical swine fever virus,CSFV) E2蛋白主要抗原编码区基因 (m E2 )与 T4噬菌体 SOC基因融合 ,插入 T4噬菌体表达质粒 ,构建成 T4噬菌体 SOC位点表达 m E2的表达载体 p1Sm E2。将其转化至 BL2 1 (DE3 )菌 ,取经 IPTG诱导后表达的目的蛋白 SDC- m E2进行 SOS- PAGE、薄层凝胶扫描分析、Western blot及 EL ISA等方法检测。结果表明 ,表达的 SOC- m E2蛋白相对分子质量约 2 5 70 0 ,表达量占菌体总蛋白量的 36 .7%,并具有与 CSFV特异性抗体反应的活性。

SOCS蛋白的多重作用:SOCS1和SOCS3在动脉粥样硬化中的差异表达

目的明确动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)进展中,细胞因子信号抑制物(SOCS)表达水平的变化及SOCS表达与胆固醇水平之间的关系。方法使用载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠,分别以高脂与正常饮食喂养,在不同年龄段检测其主动脉斑块中SOCS1和SOCS3的蛋白及mRNA表达水平;还采集18例无冠心病男性的外周静脉血,提取外周血单核细胞(PBMC)检测其SOCS1和SOCS3的mRNA表达水平。结果在ApoE^(-/-)小鼠中,SOCS1的表达先升高后下降,但高脂饮食组表达峰值前移;SOCS3的表达随喂养时间的增加而增加,该趋势在喂养高脂饮食组中更为明显;SOCS1/CD68和SOCS3/CD68的表达与高脂饮食持续时间增加呈相反的趋势;在高脂饮食喂养的ApoE^(-/-)小鼠中,白细胞介素-6(IL-6)在主动脉中的表达也随着喂养时间的延长而增加;在无冠心病人群的PBMC中,血浆总胆固醇水平与SOCS3 mRNA表达水平呈正相关(r=0.433,P=0.012)。结论 SOCS1和SOCS3在AS中呈差异化表达,SOCS3与IL-6可能促进AS的发生与发展。

新发现的SOCS蛋白家族:揭示了创伤和营养不良时代谢异常的机理

细胞因子信号传递抑制体（SOCS）是一组新近才被认识的蛋白，它们经细胞因子诱导而释放，再反馈抑制细胞因子在细胞内的信号传递。以往的工作显示：内毒素能显著提高SOCS在大鼠肝脏中的表达，这又同内毒素引起的生长激素的拮抗密切相关。目的探明SOCS基因在营养不良（饥饿）状态下在不同组织中的反应。方法雄性S-D大鼠（～200g）分别受饥饿1、2、3天，另一组在饥饿3天后重新进食3天。用Northemblotting检测肝脏和肌肉中的mRNA水平，其中所用的cDNA探针为Joslin研究中心所克隆。结果在一天禁食后，鼠肝脏中的SOCS-3mRNA出现了进行性的增高，至禁食3天其值高于原来的一倍，而SOCS-2mRNA却在同时下降了75％。重新进食3天后，SOCS－2和SOCS-3重新恢复到正常水平。细胞内信号传递蛋白STAT1、STAT3、STAT5a和STAT5b均无酪氨酸磷酸化反应，MAP激酶中的ERK1、ERK2、P3S、JUNK1，JUNK2均无激活表现。在肌肉中，3天的禁食使SOCS-2mRNA有类似上述的75％的下降，而SOCS-3mRNA却无任何改变。结果提示，营养不良能以不同的方式调节SOCS－2和SOCS-3，这种调节是组织特异性的，SOCSmRNA的变化看来并非由于各种STAT的磷酸化和MAP激酶的激活而造成。结论在饥饿状态下。

猪锚蛋白重复序列和SOCS盒蛋白基因4与生长因子受体结合蛋白基因10的克隆及印迹状态分析

本试验采用单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)直接测序法检测猪锚蛋白重复序列和SOCS盒蛋白基因4(ankyrin repeat and SOCS box containing protein 4,Asb4)与生长因子受体结合蛋白基因10(growth factor recep-tor-bound protein 10,Grb10)在不同组织器官中的印迹状态。首先,克隆得到了1350bp的Asb4基因cDNA序列及1811bp的Grb10基因cDNA序列,然后进行了SNP直接测序法检测。结果发现,Asb4在1月龄仔猪所有检测组织器官中均为双等位基因表达,而Grb10在1月龄仔猪的舌、肾脏、胃、小肠和脑中为父源等位基因表达,在其他组织器官中为双等位基因表达。实时定量PCR结果表明,Grb10在10种组织器官中的表达量存在显著性差异(P<0.05),其中在肺脏组织中的表达量最高,在小肠和脑中表达量最低。上述结果表明,Grb10可能是猪父源表达的印迹基因,而Asb4则属于猪非印迹基因。

圣世散对先兆流产模型小鼠细胞因子信号转导抑制因子蛋白表达的影响

目的探讨圣世散对先兆流产模型小鼠母胎界面细胞因子信号转导抑制因子(SOCS)1、SOCS2、SOCS3蛋白表达的影响。方法采用雌性CBA/J小鼠与雄性BALB/c小鼠交配建立正常妊娠模型,雌性CBA/J小鼠与雄性DBA/2小鼠交配建立先兆流产模型,将先兆流产模型随机分为模型对照组,圣世散低、中、高剂量组,连续给药14d后处死取材,应用Western blot方法检测小鼠胎盘蜕膜组织SOCS1、SOCS2以及SOCS3蛋白的表达水平。结果 SOCS1、SOCS2、SOCS3在各组小鼠胎盘蜕膜组织中均有表达,SOCS1、SOCS3蛋白在小鼠胎盘蜕膜组织中的表达各组间差异有统计学意义(P均<0.05),SOCS2蛋白表达在各组间差异无统计学意义(P>0.05)。与正常妊娠组相比,先兆流产模型对照组SOCS1蛋白表达升高(P<0.05),先兆流产模型对照组及圣世散低剂量组SOCS3蛋白表达降低(P<0.05)。与先兆流产模型对照组相比,圣世散低剂量组小鼠SOCS1、圣世散低和中剂量组小鼠SOCS3蛋白表达差异均无统计学意义(P均>0.05),圣世散中、高剂量组可降低SOCS1蛋白表达,圣世散高剂量组可升高SOCS3蛋白表达(P<0.05),圣世散高剂量组与正常妊娠组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论圣世散高剂量组可通过影响SOCS的蛋白表达,调节妊娠母体免疫耐受,从而维持正常妊娠。

SOCS2真核表达载体的构建及在3T3-L1前体脂肪细胞中的表达

细胞因子信号抑制蛋白(SOCS)是细胞因子信号通路的重要负调控因子。构建SOCS2真核表达载体并转染3T3-L1前体脂肪细胞,为研究SOCS2对不同细胞因子调控脂代谢奠定基础。取小鼠皮下脂肪提总RNA进行RT-PCR,克隆获得pMDl8-SOCS2质粒载体,双酶切目的基因,并克隆至质粒载体pcDNA3.1,成功构建了重组质粒载体pcDNA3.1-SOCS2;重组质粒瞬时转染3T3-L1前体脂肪细胞系,以未转染和空载体转染作为对照,RT-PCR和Western blotting检测重组质粒转染组SOCS2核酸和蛋白表达,表达水平均显著高于对照组,为进一步研究SOCS2基因对不同细胞因子调控脂肪代谢提供基础。

肝胚瘤细胞株HepG_2中HBx蛋白对SOCS3表达的影响及其机制

目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)对肝胚瘤细胞株HepG2表达信号抑制因子3(SOCS3)的影响及其机制。方法将表达HBx蛋白的重组质粒FL1-145HBx转染HepG2细胞,以不同浓度的SRC抑制剂PP2处理转染细胞,运用Western blot和RT-PCR技术分析HBx、SOCS3 mRNA和蛋白的表达情况,并以免疫细胞化学分析转染细胞中p-SRC的表达水平。结果重组质粒FL1-145HBx转染HepG2细胞后,转染细胞HBx能够表达HBx蛋白,并且细胞中SOCS3 mRNA和蛋白表达水平随着HBx蛋白的表达而显著增加(P<0.05),同时p-SRC蛋白的表达增强;而SRC抑制剂PP2处理转染细胞后,随着p-SRC蛋白表达的减少SOCS3蛋白表达逐渐下降。结论在肝胚瘤细胞株HepG2中,HBx蛋白很可能通过促进SRC蛋白的磷酸化而诱导SOCS3蛋白的表达。

细胞因子信号阻抑蛋白SOCS家族

大量实验研究和临床观察资料证明，SOCS蛋白与细胞信号转导和多种重要疾病的发生发展有着密切的关系。同时随着对JAK／STAT通路和单个SOCS蛋白功能研究的深入，SOCS蛋白在辐射导致细胞周期阻滞信号传导以及与细胞DNA损伤和修复机制相关作用机理将成为未来的研究方向之一。近年来随着重离子治癌临床应用的展开，重离子对细胞辐射损伤和修复信号转导可能与SOCS蛋白相关的研究对于重离子的安全应用提供了理论和实验依据。

泛素系统在免疫信号转导过程中的作用研究进展

泛素(Ubiquitin)系统是目前已知最重要且有高度选择性的蛋白质降解体系。近来许多研究发现该系统在免疫信号转导过程中发挥重要的调控功能。泛素系统可以通过识别某些酪氨酸磷酸化标记的免疫细胞膜受体使其降解,从而终止免疫信号转导。另外,在免疫系统重要转录因子NF-κB活化的不同阶段也有泛素系统参与。通过作用于免疫信号转导过程的上述环节,泛素系统调控免疫应答及炎症反应,本文拟就有关内容作一综述。

miR-155在器官移植排斥反应中的作用研究进展

排斥反应一直是器官移植研究领域中难以彻底攻克的难题。排斥反应的机制研究对提高移植效果以及移植物的存活率十分重要。机体的固有免疫应答和特异性免疫应答协同参与了移植排斥反应,造成移植物损伤。近年来许多研究者对微小核糖核酸(miR)调控排斥反应的机制进行了深入研究,其中miR-155被广泛认为是参与免疫调节的关键因子,其表达水平和功能状态可能与排斥反应的发生密切相关,因而有可能成为克服机体排斥反应的新靶点。本文就miR-155对固有免疫和特异性免疫应答中关键免疫细胞的调控相关研究进行综述,为新型免疫抑制药开发和排斥反应治疗提供新思路。

SOCS家族蛋白在病毒感染中发挥的作用

SOCS(Suppressor of cytokine signaling),是一种细胞因子信号通路抑制蛋白,目前认为该蛋白家族可以调节LIF(Leukemia inhibitory factor)、G-CSF(Granulocyte colony-stimulating factor)、IL-6(Interleukin-6)、IL-10(Interleukin-10)、IFN-λ(interferon-λ)等30多种细胞因子,而这些因子是机体抵抗入侵的外来病原体的主要免疫防御反应。病毒在感染宿主的过程中通过劫持宿主中的SOCS蛋白,从而对细胞中的JAK/STAT、NF-κB等与抗病毒因子调控相关的信号通路以及对T细胞的分化的调控调节病毒感染。近年来,大量的文献证实SOCS蛋白的变化与病毒感染的程度以及愈后的器官损伤具有紧密的联系,使得SOCS蛋白作为抗病毒靶点的研究尤为重要。本文主要讨论SOCS蛋白通过调控JAK-STAT、NF-κB等信号通路,在病毒感染过程中发挥的作用和作用机制。

雷竹SOC1蛋白原核表达及纯化

为了获得有活性的雷竹Pv SOC1蛋白（Phyllostachys violascens SUPPERSSOR OF CO OVEREXPRESSION 1）,并进一步讨论其结构形态,通过原核表达方法得到Pv SOC1的可溶性重组蛋白,以p ET-GST作为表达载体,大肠杆菌E.coli Rosetta作为宿主菌株,超表达全长和IKC结构域的雷竹Pv SOC1蛋白。发现在37℃条件下,菌液浓度D（600）值达到0.4-0.6时进行诱导,控制IPTG终浓度为0.4 mmol/L,诱导目的蛋白表达5 h,可以获得可溶的IKC结构域GST融合蛋白。采用TEV（tobacco etch virus protease）酶切技术、配合GST亲和层析柱及分子层析色谱柱,去除标签蛋白并纯化目的蛋白。所获得的高纯度IKC结构域Pv SOC1蛋白经过对比分析发现其以八聚体形式存在。

版纳微型猪近交系ASB17基因克隆及睾丸组织特异表达研究

ASB17基因与睾丸形成和精子发生密切相关。为研究ASB17基因在猪睾丸功能及精子发生过程中的作用,本研究从GenBank下载猪及近缘物种ASB17序列作为参考序列,设计特异引物从版纳微型猪近交系(BMI)睾丸组织中扩增ASB17基因完全编码序列及部分侧翼序列,对ASB17翻译的蛋白质序列进行多种功能生物信息学分析并构建多物种系统进化树,最后用实时荧光定量PCR技术检测BMI 15个重要组织的ASB17 mRNA转录表达水平。结果表明,扩增得到BMI ASB17编码区序列长888bp,编码295个氨基酸。功能生物信息学分析表明ASB17存在2个保守结构域ANK和SOCS_box,无跨膜螺旋结构,无N端信号肽序列,二级结构以α螺旋为主,N末端和C末端均亲水,有4类功能活性位点,位于细胞质的概率70.6%。系统进化分析表明,ASB17基因在进化中高度保守,且与牛、羊的亲缘关系最近,符合物种的系统分类学。多组织相对荧光定量表达分析表明ASB17基因在睾丸中特异高表达,在心、肝等其他14个组织中不表达。研究结果为探索BMI ASB17基因在睾丸形成和精子发生过程中的作用及功能奠定基础。

ASB3基因功能缺失突变和表达下调促进结直肠癌细胞的生长和转移

背景与目的锚蛋白重复序列和SOCS盒蛋白3(ankyrin repeat and SOCS box protein 3, ASB3)是ASB家族成员,包含锚蛋白重复序列和SOCS盒结构域。以往研究表明,它介导肿瘤坏死因子受体2的泛素化和降解,并可能参与炎症反应。然而它对肿瘤发生的作用尚不清楚。本研究旨在探讨ASB3对结直肠癌(colorectal cancer, CRC)的生长与转移的影响。方法使用新一代测序或Sanger测序法检测结直肠癌标本或细胞系中的ASB3突变,并用实时定量PCR、蛋白免疫印迹、免疫组化或免疫荧光法来测定基因的表达。通过MTT和集落形成实验检测细胞的增殖,用流式细胞仪检测细胞周期分布,并用Transwell和划痕实验检测细胞迁移和侵袭。应用裸鼠实验来检测肿瘤细胞的成瘤性和肝转移。结果在结直肠癌病例中ASB3基因经常发生突变(5.3%)和下调(70.4%)。沉默内源性ABS3的表达在体外可促进结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,在体内可促进成瘤和肝转移。相反,过表达野生型ASB3可抑制肿瘤的生长和转移,而过表达ASB3突变体不具有这种抑制效应。进一步分析表明,ASB3通过上调β?catenin、E?cadherin和下调转录因子8、N?cadherin和vimentin阻止上皮?间充质转换来抑制结直肠癌转移。结论在结直肠癌中常存在ASB3基因突变或表达下调,在结直肠癌的发生和进展中起到重要作用。

下调细胞因子信号转导抑制分子3与哮喘的研究进展

细胞因子信号转导抑制分子（SOCS）3蛋白是SOCS蛋白家族中的一员。SOCS蛋白反馈调节细胞因子反应，从而调控免疫平衡。许多研究显示SOCS3蛋白在过敏性哮喘患者中过度表达，其通过影响辅助T淋巴细胞（Th）的分化和嗜酸粒细胞的气道浸润在哮喘的发病过程中起着重要作用。现就下调SOCS3蛋白在调节哮喘免疫平衡中的机制综述如下。

制何首乌中大黄素对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型中JAK2/STAT3通路的影响

目的：探讨制何首乌中大黄素抗动脉粥样硬化的作用机制并对两面神激酶2（JAK2）/信号转导及转录激活因子3（STAT3）信号通路及相关因子细胞因子信号传导抑制蛋白3（SOCS3）的影响。方法：雄性Apo E基因敲除（Apo E-/-）小鼠80只,随机均分为8组,分别为大黄素高、中、低剂量组、模型组、阳性药组、阴性组、正常组和大黄素中剂量＋AG490组（DA组）。除正常组,余7组用高脂饲料饲养,并皮下注射脂多糖,9周后停注。第10周开始小鼠给药,6周后处死。酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定JAK2,p-JAK2,STAT3,p-STAT3及SOCS3的含量,苏木素-伊红（HE）染色检测胸主动脉病理变化,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）法检测肝脏JAK2,STAT3,SOCS3 mRNA的表达。结果：与模型组比较,大黄素高、中剂量组SOCS3含量显著增加,p-JAK2,p-STAT3含量显著减少（P〈0.01）,低剂量组SOCS3含量明显增加（P〈0.05）;JAK2,STAT3无变化;各指标DA组效果不如中剂量组且两组间存在明显差异（P〈0.01）,但STAT3相对表达量中剂量组与DA组有差异（P〈0.05）;各组SOCS3 mRNA表达明显增加,JAK2,STAT3 mRNA表达明显降低（P〈0.05,P〈0.01）。HE染色切片镜下观察,大黄素高、中剂量能有效延缓动脉粥样硬化斑块形成,而低剂量的效果不明显。结论：大黄素能明显作用于Apo E-/-小鼠动脉粥样硬化病变的发生发展,该作用机制可能与其抑制JAK2/STAT3信号通路有关。