九味白术汤对急性溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜免疫屏障及miR-155/SOCS-1轴的影响

目的探讨九味白术汤对溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠黏膜免疫屏障及微小RNA(miR)-155/细胞因子信号转导抑制因子-1(SOCS-1)轴的影响。方法将大鼠随机分为对照组、模型组、药物组、药物+阴性对照组、药物+miR-155过表达组,每组8只,以2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导建立UC模型,给药7 d后,检测疾病活动指数(DAI)评分,HE染色观察结肠黏膜组织形态变化,ELISA法检测结肠黏膜组织TNF-α、IL-23、IL-6、IL-1β水平,RT-qPCR法检测结肠黏膜组织miR-155表达,Western blot法检测结肠黏膜组织SOCS-1、GP130、iNOS、RORγt、STAT3蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠1、2、3、4、5、6、7 d DAI评分升高(P<0.05);与模型组比较,药物组大鼠5、6、7 d DAI评分降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组大鼠结肠黏膜损伤评分,结肠黏膜组织病理学评分,结肠黏膜组织TNF-α、IL-23、IL-6、IL-1β水平,miR-155表达,GP130、iNOS、RORγt、STAT3蛋白表达均升高(P<0.05),SOCS-1蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,药物组、药物+阴性对照组大鼠结肠黏膜损伤评分,结肠黏膜组织病理学评分,结肠黏膜组织TNF-α、IL-23、IL-6、IL-1β水平,miR-155表达,GP130、iNOS、RORγt、STAT3蛋白表达均降低(P<0.05),SOCS-1蛋白表达升高(P<0.05)。结论九味白术汤对UC大鼠肠黏膜免疫屏障具有保护作用,该作用可能与抑制miR-155表达从而促进SOCS-1表达有关。

结直肠癌组织中NF-κB、Notch-1和SOCS-1的表达及临床意义

目的:探讨结直肠癌组织中NF-κB、Notch-1和SOCS-1的表达及临床意义,为临床治疗结直肠癌提供依据。方法:选取55例手术切除的结直肠癌组织标本作为研究组,同时收集癌旁正常大肠黏膜组织标本30例作为对照组,采用免疫组织化学SP法和Western blot检测研究组和对照组中NF-κB、Notch-1和SOCS-1蛋白的表达,分析其与患者病理因素之间的关系。结果:免疫组织化学SP法检测结果:NF-κB蛋白和Notch-1蛋白在结直肠癌组织中阳性表达率均明显高于正常大肠黏膜组织中阳性表达率(P<0. 05),SOCS-1蛋白在正常大肠黏膜组织中的阳性表达率高于结直肠癌组织中的阳性表达率(P<0. 05); Western blot检测结果:NF-κB蛋白和Notch-1蛋白在正常大肠黏膜组织中的表达均低于结直肠癌组织中的表达(P<0. 05),SOCS-1蛋白在正常大肠黏膜组织中的表达高于结直肠癌组织中的蛋白表达(P<0. 05); NF-κB、Notch-1在无淋巴结转移、未浸润浆膜及高中分化的结直肠癌组织中表达明显低于有淋巴结转移、浸润浆膜及低分化的结直肠癌组织的表达,SOCS-1在高中分化结直癌组织的表达明显高于低未分化的结直肠癌中的表达。患者结直肠癌组织中NF-κB与Notch-1表达水平呈正相关性,SOCS-1表达水平与NF-κB、Notch-1呈负相关性。结论:NF-κB、Notch-1和SOCS-1的异常表达与结直肠癌的发生发展有密切联系,其表达参与肿瘤形成、发展、侵袭和转移,可以作为肿瘤预后判断的参考指标。

砷剂诱导骨髓瘤细胞周期改变与SOCS-1基因去甲基化作用的研究

背景与目的:三氧化二砷(As2O3)在治疗多发性骨髓瘤中具有一定价值,有研究认为As2O3的治疗作用可能与诱导细胞内抑癌基因去甲基化作用相关。本研究旨在探讨体外As2O3诱导人骨髓瘤细胞周期改变与细胞内SOCS-1基因去甲基化之间可能存在的关系。方法:采用MTT法观察As2O3对骨髓瘤细胞U266、RPMI8226增殖情况的影响,流式细胞技术检测As2O3对骨髓瘤细胞周期的影响,甲基特异性PCR(MSP)法检测As2O3作用前后骨髓瘤细胞内SOCS-1基因甲基化状态的改变,实时PCR技术定量检测细胞用药前后SOCS-1基因mRNA的表达变化。结果:与对照组细胞相比,人骨髓瘤细胞U266、RPMI8226在较大剂量As2O3(0.5μmol/L、1.0μmol/L、2.0μmol/L)作用72h后,细胞周期分布均发生G0/G1期阻滞,呈现G0/G1期细胞增加,S期细胞减少,细胞周期改变与As2O3剂量呈正相关(P均<0.05),骨髓瘤细胞内SOCS-1基因甲基化程度明显减弱(As2O30.5μmol/L作用72h后)或消失(As2O31.0μmol/L或2.0μmol/L作用72h后),SOCS-1基因在mRNA水平上表达明显增强,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:As2O3具有剂量依赖的诱导骨髓瘤细胞周期改变的作用,该作用可能与As2O3诱导SOCS-1基因去甲基化和SOCS-1基因再表达相关,这可能为进一步阐释As2O3治疗多发性骨髓瘤中的可能机制提供新的思路和方向。

沉默DNMT1基因对骨髓瘤细胞SOCS-1基因甲基化的影响

目的:探讨DNA甲基化转移酶1(DNA methyltransferase,DNMT1)基因沉默对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞内细胞因子信号转导抑制分子1(suppressor of cytokine signaling,SOCS-1)甲基化的影响。方法:应用靶向沉默DNMT1基因的短发卡RNA(RNA-Short hairpin RNA,shRNA)通过脂质体(lipofectamineTM2000)介导转染骨髓瘤细胞RPMI8226,应用RT-PCR和Western blot方法分别检测转染前后DNMT1基因和蛋白表达,应用甲基化特异性PCR检测转染前后骨髓瘤细胞SOCS-1基因甲基化水平的变化。结果:转染后骨髓瘤细胞DNMT1 mRNA表达水平(0.176±0.004)和蛋白表达水平(0.065±0.014)均明显低于阴性对照组(0.956±0.033,0.415±0.027),其差异具有统计学意义(P<0.01)。转染后SOCS-1基因甲基化水平较转染前明显降低。结论:利用shRNA能靶向沉默DNMT1基因的表达,并可以有效逆转SOCS-1基因高甲基化状态。

胰腺癌SOCS-1基因异常甲基化研究

目的:探索人类胰腺癌中SOCS-1基因是否由于异常甲基化而表达抑制;查询此现象在胰腺癌的发生、发展中的意义。方法:采集25例胰腺导管腺癌病人的肿瘤标本及5例对应的正常胰腺组织,运用甲基化特异性PCR反应研究胰腺癌组织中SOCS-1基因CpG岛甲基化状态,同时运用实时定量PCR分析SOCS-1基因的表达。结果:25例胰腺导管腺癌病人中有9例(36%)SOCS-1基因呈CpG岛甲基化,而正常组织则无SOCS-1基因CpG岛甲基化;SOCS-1基因CpG岛甲基化组的SOCS-1基因表达量与无SOCS-1基因CpG岛甲基化组相比,其基因相对表达量明显减少(P<0.05),证明SOCS-1基因CpG岛甲基化可以抑制SOCS-1基因表达。与病人临床病理特征相结合比较,发现SOCS-1基因CpG岛甲基化与年龄、性别、肿瘤体积、肿瘤分化程度及TNM分期等因素无关。结论:在胰腺导管腺癌中存在SOCS-1基因CpG岛甲基化,且由于CpG岛甲基化而促使基因表达抑制。SOCS-1基因CpG岛甲基化在胰腺癌的发生、发展中可能具有一定的作用。

胃癌SOCS-1基因异常甲基化及其意义

目的:探讨SOCS-1基因在胃癌和癌旁组织中的表达及其启动子甲基化状态与胃癌发生、发展和转移等的关系。方法:采集45例胃癌病人的肿瘤标本、18例癌旁胃粘膜组织以及10例正常胃粘膜组织,运用甲基化特异性PCR反应研究胃癌组织中SOCS-1基因CpG岛甲基化状态,同时运用实时定量PCR分析SOCS-1基因的表达。结果:45例胃癌标本中有21例(46.7%)SOCS-1基因呈CpG岛甲基化,癌旁组织中为2例(11.1%),而10例正常胃粘膜组织中则未发现SOCS-1基因CpG岛甲基化;SOCS-1基因CpG岛甲基化组的SOCS-1基因表达量与无SOCS-1基因CpG岛甲基化组相比,其基因相对表达量明显减少(P<0.05),表明SOCS-1基因CpG岛甲基化可抑制SOCS-1基因表达。与病人临床病理特征相结合比较,发现SOCS-1基因CpG岛甲基化与年龄、性别无关,与肿瘤分化程度及TNM分期等因素有关。结论:在胃癌中存在SOCS-1基因CpG岛甲基化,且由于CpG岛甲基化而促使基因表达抑制。SOCS-1基因CpG岛甲基化在胃癌的发生、发展中可能具有一定的意义。

SOCS-1和TNF-α在有机磷中毒致MODS鼠肝脾中表达的研究

目的探讨SOCS-1和TNF-!在急性有机磷农药(AOPP)致多器官功能障碍综合症(MODS)中的发病机制,从而为MODS的防治提供新的策略。方法健康小鼠随机分成敌敌畏组、生理盐水组、正常对照组,分别于染毒后2、6、12、24h取小鼠的肝脾,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定SOCS-1和TNF-!的mRNA表达水平,用SPSS统计软件进行分析。结果AOPP小鼠肝脾SOCS-1和TNF-!的mRNA水平均升高,与对照组比较差异有统计学意义(P均<0.05)。结论AOPP可导致细胞因子TNF-!失调,可能参与了AOPP后SIRS向MODS的发病过程;TNF-!可诱导SOCS-1在肝脾中表达,考虑到SOCS的"负反馈"调控作用,若能抑制炎症反应的失控,则对中毒MODS的治疗将有新的突破。

寻常型银屑病患者外周血单个核细胞SOCS-1、SOCS-3 mRNA的表达

目的:检测细胞因子信号抑制因子SOCS-1、SOCS-3mRNA在寻常型银屑病患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达。方法:从20例银屑病患者及20例健康志愿者外周血中分离PBMC,提取RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测SOCS-1、SOCS-3mRNA的表达。结果:SOCS-1、SOCS-3mRNA在银屑病患者中表达,在正常人中无表达,活动期银屑病患者较静止期患者SOCS-1、SOCS-3mRNA表达增高。结论:SOCS-1、SOCS-3可能在银屑病的Th1免疫反应中发挥作用。

SOCS-1在肝癌中的表达及其与BCL-XL的关系

目的探讨SOCS-1在肝癌中的表达及其对BCL-XL表达的影响。方法采用免疫组织化学SP法检测36例肝细胞癌,8例肝硬化以及4例正常肝组织中SOCS-1和BCL-XL蛋白的表达水平。结果SOCS-1在正常肝组织和肝硬化组织中呈强胞浆表达。66.7%(24/36)的肝细胞癌组织SOCS-1异常低表达与BCL-XL过表达显著相关(P=0.00011)。36例肝癌中20例(55.6%)显示SOCS-1异常低表达伴BCL-XL阳性染色。10例(27.8%)显示SOCS-1正常表达伴BLC-XL阴性染色。结论SOCS-1异常低表达与肝癌的进展和转移有关。其机制可能是通过上调BCL-XL基因的表达,促使肝细胞增殖和恶化转化而实现。

类风湿性关节炎患者血清及关节积液SOCS-1、SOCS-3蛋白的含量检测及意义

目的观察类风湿性关节炎(RA)患者血清及关节液SOCS-1、SOCS-3蛋白含量的变化,探讨其在炎症中的意义。方法 49例类风湿性关节炎患者根据疾病活动性分为活动期组(26例)及缓解期组(23例),采用ELISA法检测其血清及关节液SOCS-1、SOCS-3蛋白含量,并与20例健康体检者(对照组)进行比较。结果与对照组比较,RA患者中活动期组与缓解期组血清SOCS-1、SOCS-3蛋白含量均明显升高(P<0.01),其中活动期组血清SOCS-1、SOCS-3含量表达较缓解组明显升高(P<0.01、P<0.05);活动期组患者关节积液SOCS-1、SOCS-3蛋白表达较缓解期组明显升高(P<0.05);活动期组患者血清SOCS-1、SOCS-3蛋白水平均与血清ESR、CRP、RF呈正相关(P<0.01、P<0.05)。结论 SOCS 1/3可能参与了RA炎症反应的病理过程,且可能与RA病情活动性有关。

SOCS-1 SOCS-3在有机磷中毒鼠肝脾中表达的研究

目的观察有机磷中毒（AOPP）小鼠肝脏、脾脏中SOCS-1、SOCS-3mRNA表达的变化，探讨SOCS-1、SOCS-3在AOPP致多器官功能衰竭（MODS）中的发病机制，从而为MODS的防治提供新的策略。方法健康雄性BALB／c小鼠随机分成敌敌畏中毒组24只，生理盐水对照组6只，正常对照组6只，中毒组于染毒后2、6、12、24h取肝脾，以逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）测定SOCS-1、SOCS-3表达水平，用SPSS统计软件测定之间的变化关系。结果AOPP小鼠肝脾SOCS-1、SOCS-3水平均升高，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。统计分析显示，肝脏中SOCS—1和SOCS-3mRNA明显正相关（r=0．922，P〈0．01），脾脏中SOCS-1和SOCS-3mRNA明显正相关（r=0．957，P〈0．01）。结论AOPP可诱导SOCS-1、SOCS-3在肝脾中表达，不同时间点AOPP中毒小鼠肝脏、脾脏中SOCS-1、SOCS-3mRNA表达升高趋势-致。

RT-PCR方法检测细胞信号传导抑制因子-1(SOCS-1) mRNA在髓性白血病中的表达

为了研究细胞信号传导抑制因子(SOCS-1)在急性和慢性髓性白血病患者外周血中的表达并探讨其临床意义,用RT-PCR的方法检测急性和慢性白血病患者外周血单个核细胞中SOCS-1mRNA的表达,并将其表达与所有患者的病情进行了分析。结果显示在25例急性髓性白血病患者中4例SOCS-1mRNA表达阳性,阳性率16·00%,在25例慢性髓性白血病患者中11例SOCS-1mRNA表达阳性,阳性率44.00%,二者差异有统计学意义。在25例慢性髓性白血病患者中,无进展组(慢性期)12例,阳性2例,而进展组(加速期和急变期)13例,阳性11例,两组间差异有统计学意义。SOCS-1mRNA阳性的CML患者,对干扰素治疗反应差,进入加速期后SOCS-1mRNA多数呈持续阳性表达,病情进行性发展,预后极差。结论急性和慢性髓性白血病患者外周血单个核细胞中均可检测到SOCS-1mRNA的表达,CML患者阳性率高,加速期与急变期表达阳性者显著增多,与干扰素治疗反应及预后密切相关。

E3泛素连接酶Nrdp1和SOCS-1对布鲁氏菌诱导细胞凋亡的影响

为了探讨E3泛素连接酶Nrdp1、SOCS-1基因在布鲁氏菌侵染巨噬细胞过程中对细胞凋亡的影响,构建Nrdp1、SOCS-1基因的干扰和过表达细胞模型(简称为pLL3.7-N1、pLL3.7-S1和pLEX-Nrdp1、pLEX-SOCS-1);羊种布鲁氏菌16M(简称16M)侵染正常细胞RAW264.7及pLL3.7-N1、pLEX-Nrdp1、pLL3.7-S1、pLEX-SOCS-1组细胞,qRT-PCR检测Bax、Bcl-2、TNF-α的mRNA表达量,并通过流式细胞仪术检测细胞凋亡率。结果显示,试验成功构建并筛选出干扰和过表达Nrdp1、SOCS-1效果最好的pLL3.7-N1、pLEX-Nrdp1、pLL3.7-S1、pLEXSOCS-1细胞模型;16M侵染各组细胞,与对照组相比,在不同的时间段pLL3.7-N1、pLL3.7-S1、pLEX-Nrdp1、pLEX-SOCS-1组细胞的Bcl-2和Bax的mRNA表达量差异显著(P<0.05);pLL3.7-S1组细胞的TNF-αmRNA显著降低(P<0.05),而pLEX-SOCS-1组显著升高(P<0.05);pLEX-Nrdp1、pLEX-SOCS-1组细胞凋亡率显著升高(P<0.05),而pLL3.7-S1组显著降低(P<0.05)。研究结果表明,Nrdp1、SOCS-1基因与16M诱导的细胞凋亡密切相关,为16M胞内寄生机制的研究奠定了基础。

慢性房颤患者心房组织中SOCS-1和IL-23水平的动态变化与房颤的关系

近年来,有关炎症与炎症因子在房颤（AF）发病过程中的作用越来越引起人们重视。白细胞介素-23（IL-23）主要是由活化的单核巨噬细胞及树突状细胞分泌的炎症细胞因子,与许多炎症疾病有关,有学者发现它参与了AF的病理过程[1]。

白藜芦醇通过SOCS-1蛋白抑制牙髓卟啉单胞菌脂多糖诱导的氧化应激反应

目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对小鼠成骨细胞MC3T3-E1氧化应激(oxidative stress,OS)损伤的保护作用及作用机制。方法:RES及LPS刺激细胞后,荧光显微镜及流式细胞术检测细胞内活性氧水平;Western免疫印迹法检测细胞内细胞因子信号转导抑制因子(suppressor of cytokine signaling-1,SOCS-1)蛋白表达水平。建立SOCS-1瞬时转染细胞系,利用荧光显微镜及流式细胞术分别观察转染后的细胞内活性氧水平。采用SPSS22.0软件包对数据进行统计学分析。结果:LPS组与空白组相比,细胞内氧化应激程度显著提高,LPS+RES组氧化应激程度显著低于LPS组(P<0.05)。10 mg/L P.e-LPS刺激30 min后,细胞内SOCS-1开始升高。SOCS-1转染后,LPS+RES组细胞内氧化应激程度显著高于未转染细胞内氧化应激水平(P<0.05)。结论:白藜芦醇通过调节SOCS-1蛋白,减轻LPS引起的小鼠成骨细胞氧化应激水平,从而发挥保护作用。

外周血单核细胞SOCS-1表达与MODS患者预后关系的研究

目的了解外周血单核细胞SOCS-1表达与多器官功能障碍综合征(MODS)患者预后的关系及临床意义。方法收集24例MODS患者,并采集其外周静脉血,采用淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离外周血单核细胞(PBMCs),分别以RT-PCR法及Western-blot法检测PBMCs中SOCS-1的基因及蛋白表达,分析其与预后及MODS评分的关系。结果MODS组中死亡患者PBMCs中的SOCS-1 mRNA表达量(0.4938±0.0273)显著低于存活患者(0.5475±0.0289)(P<0.05),SOCS-1蛋白表达量(0.7924±0.0284)显著低于存活患者(0.8406±0.0407)(P<0.05)。MODS患者的PBMCs中的SOCS-1mRNA表达量与MODS评分呈显著的负相关关系(r=-0.723,P<0.01),SOCS-1蛋白表达量与MODS评分呈显著的负相关关系(r=-0.534,P<0.01)。结论在MODS中,SOCS-1的表达可能起到保护组织避免损伤的作用,SOCS-1表达的减少可能提示患者的预后不良。

密码子优化小鼠socs-1基因及其在大肠杆菌中的表达

根据已报道的小鼠socs-1基因序列,依据大肠杆菌密码子偏爱性,设计并采用重叠PCR法合成了全长693bp的socs-1基因,将其克隆到表达载体pET-22b中构建表达载体pET-SOCS1。经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳显示此密码子优化后的基因可在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达。

砷剂诱导多发性骨髓瘤细胞socs-1基因去甲基化作用的研究

本研究探讨三氧化二砷(As2O3)对人多发性骨髓瘤细胞株U266、RPMI8226细胞内socs-1基因甲基化状态的影响。用MTT法观察As2O3对骨髓瘤细胞增殖情况的影响,采用甲基特异性PCR法检测As2O3作用前后骨髓瘤细胞株U266、RPMI8226socs-1基因的甲基化状态,以实时定量PCR技术定量检测细胞株给药前后socs-1基因mRNA的表达变化,流式细胞技术检测As2O3诱导的骨髓瘤细胞的凋亡情况。结果表明:人骨髓瘤细胞株U266、RPMI8226均存在不同程度的socs-1基因CpG岛甲基化,socs-1基因不表达的现象。As2O3作用72小时后socs-1基因甲基化程度明显减弱或消失,socs-1基因在mRNA水平上表达明显增强,与各野生型细胞株相比,差异具有显著性p<0.05),且细胞生长抑制明显,早期、晚期细胞凋亡比率明显升高,并呈现剂量依赖性。结论:As2O3可诱导socs-1基因甲基化状态的改变,使基因表达上调,恢复其活性,这为进一步阐明As2O3诱导骨髓瘤细胞凋亡的可能机制和As2O3治疗多发性骨髓瘤的可能机制提供新的思路和新的研究方向。

阿托伐他汀钙对缺血/再灌注大鼠肾组织SOCS-1及NF-κBp65表达的研究

目的:探讨阿托伐他汀钙对缺血/再灌注大鼠肾组织SOCS-1及NF-κB表达的影响。方法:健康雄性Wist-ar大鼠54只随机分成假手术组(n=18)、模型组(n=18)及干预组(n=18),组内再分为成IR6h、IR24h及IR48h组(每小组6只)。采用夹闭双侧肾动脉的方法制作模型,干预组于术前1周给予阿托伐他汀钙(ATO)10mg·kg-1·d-1灌胃。检测大鼠血清BUN、Scr水平,行HE染色,免疫组化法检测大鼠肾组织SOCS-1及NF-κBp65蛋白表达。结果:(1)模型组中BUN、Scr浓度均于再灌注6h起逐渐升高,24h达高峰,48h回落,但仍维持较高水平;干预组各时间点BUN、Scr水平也显著高于同期假手术组(P<0.01),但低于同期模型组(P<0.01);(2)干预组中IR24h的SOCS-1阳性表达较模型组明显增多(P<0.01),而NF-κBp65阳性表达较模型组明显降低(P<0.01),且病理损伤减轻。结论:阿托伐他汀钙可能通过调节SOCS-1及NF-κBp65的表达,抑制炎症反应,从而对缺血/再灌注肾组织有保护作用。

成人急性髓性白血病SOCS-1基因及其甲基化的研究

目的:通过检测成人急性髓性白血病中SOCS-1基因表达水平及其甲基化水平,研究其在白血病发病中的作用。方法:运用甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR,MSP)方法,对24例急性髓性白血病患者和4株白血病细胞株(Jurkat、Raji、U 937、NALM 17),进行SOCS-1基因甲基化水平的研究;同时运用Real-time PCR法定量分析SOCS-1基因表达水平。以10例健康人为正常对照组。结果:24例成人急性髓性白血病患者中,15例有SOCS-1基因甲基化(62.5%),而正常对照组无SOCS-1基因甲基化(0%),二者有显著差异(P<0.05);SOCS-1基因甲基化组与无SOCS-1基因甲基化组相比较,其SOCS-1基因相对表达量明显减少(P﹤0.05);与患者临床病理特征相结合比较,发现SOCS-1基因的甲基化与患者年龄、性别和病程阶段无相关。4株白血病细胞株中,Jurkat和U 937表现有SOCS-1甲基化(50%),Raji和NALM 17无SOCS-1甲基化,前者SOCS-1基因表达量较后者也明显降低(P<0.05)。结论:SOCS-1基因在成人急性髓性白血病中甲基化水平明显增高,且SOCS-1基因甲基化后表达水平受到抑制,提示SOCS-1基因及其甲基化在急性髓性白血病的发生发展中可能具有一定作用。