miRNA-155靶向SOCS5对无乳链球菌诱导罗非鱼脑星形胶质细胞炎症的影响

【目的】探究尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)微小RNA-155(miR-155)和SOCS5(Suppressor of cytokine signaling 5)的靶向关系,并研究其对无乳链球菌诱导的尼罗罗非鱼脑星形胶质细胞炎症反应的影响。【方法】通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测感染无乳链球菌后尼罗罗非鱼脑星形胶质细胞中miR-155、SOCS5及炎症因子表达变化规律,生物信息学方法预测miR-155与SOCS5的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验进行靶基因验证,qRT-PCR方法分析过表达和敲降miR-155对SOCS5基因表达的影响和miR-155对SOCS5的调控机制。【结果】无乳链球菌诱导尼罗罗非鱼脑星形胶质细胞中miR-155表达量极显著上升(P<0.001),4 h达到最高值。SOCS5表达量极显著上升(P<0.01),6 h达到最高值。促炎症因子IL-1β、TNF-α表达显著升高(P<0.0001),抑炎症因子IL-10、TGF-β表达显著下调(P<0.05)。构建尼罗罗非鱼SOCS53′UTR野生型和突变型荧光素酶报告载体。双荧光素酶实验结果表明miR-155极显著抑制(P<0.0001)SOCS5野生型质粒表达。突变靶位点后,miR-155对SOCS5的抑制作用极显著降低(P<0.0001),抑制效果减弱53.7%。过表达miR-155能显著抑制(P<0.001)SOCS5表达,而抑制miR-155后SOCS5表达显著上升(P<0.05)。转染miR-155抑制物6 h和12 h后,miR-155表达量显著下调(P<0.01),12 h表达量最低,而SOCS5表达量显著上调(P<0.05),在12 h达到最高值。【结论】miR-155通过靶向负调控SOCS5的表达参与无乳链球菌诱导的尼罗罗非鱼脑星形胶质细胞炎症反应,通过下调SOCS5表达影响炎症变化。

SOCS5基因多态性与哮喘患儿治疗效果及肺功能的关系研究

目的分析细胞因子信号传导抑制因子5(SOCS5)基因多态性与哮喘患儿治疗效果及肺功能的关系。方法选取2021年3月至2022年3月就诊于该院的80例哮喘患儿作为哮喘组,另选取同期在该院行健康体检的80例健康儿童作为健康组。采用单核苷酸多态性(SNP)基因分型检测试剂盒测定SOCS5基因3个不同位点的基因多态性。哮喘组接受沙美特罗替卡松干粉剂治疗,对比不同疗效患儿携带的SOCS5基因型及等位基因分布频率、不同SOCS5基因型患儿治疗前后肺功能的差异。结果哮喘组SOCS5基因rs6737848位点携带C等位基因、CC基因频率高于健康组,差异均有统计学意义(P<0.05);哮喘组、健康组SOCS5基因rs41379147位点、rs3768721位点携带等位基因与基因型分布比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。根据治疗结果,哮喘组患者被分为疗效良好组(52例)和疗效不良组(28例)。疗效不良组SOCS5基因rs6737848位点携带C等位基因、CC基因型频率高于疗效良好组,差异均有统计学意义(P<0.05);疗效不良组、疗效良好组SOCS5基因rs41379147位点、rs3768721位点等位基因与基因型分布比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。Logistic回归分析发现,SOCS5基因rs6737848位点携带CC基因型是哮喘发病和疗效不良的危险因素(P<0.05);3个月后,哮喘组SOCS5基因rs6737848位点携带GG基因型的患儿治疗的FEV1、FEV1/FVC、PEF水平高于CG基因型,CG基因型患儿FEV1、FEV1/FVC、PEF水平高于CC基因型,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论SOCS5基因rs6737848位点多态性与哮喘发生、疗效及肺功能密切相关,其中携带CC基因型可增加哮喘发生风险、降低疗效。

lncRNA MEG3通过miR-9-5p/SOCS5轴对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨lncRNA母源性印记基因3(maternal imprinting gene 3,MEG3)通过miR-9-5p/SOCS5轴对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的调控作用。方法:收集2017年1月至2019年6月重庆市中医院手术切除的20例宫颈癌患者的癌及癌旁组织标本;利用脂质体转染技术分别将pcDNA3.1-MEG3、si-MEG3、miR-9-5p mimics、miR-9-5p inhibitor及其对照质粒等转染进宫颈癌HeLa和SiHa细胞,构建过表达和沉默细胞模型。用qPCR检测宫颈癌组织及细胞模型中MEG3、miR-9-5p和SOCS5表达水平,用CCK-8法、Transwell小室法检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力,用细胞免疫荧光实验检测细胞中E-cadherin和vimentin表达水平。通过在线生物信息学TargetScan数据库预测靶基因,用双荧光素酶报告基因实验验证miR-9-5p分别与MEG3和SOCS5的靶向关系。结果:分别与癌旁组织和宫颈上皮HcerEpic细胞比较,宫颈癌组织和细胞系中MEG3和SOCS5表达显著下调、miR-9-5p表达显著上调(均P<0.01)。TargetScan数据库分析和双荧光素酶报告基因实验证实miR-9-5p与MEG3或SOCS5存在靶向关系。MEG3和SOCS5显著抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移与侵袭能力(均P<0.01),miR-9-5p显著提高细胞的增殖、迁移与侵袭能力(均P<0.01)。MEG3和SOCS5促进E-cadherin表达、抑制vimentin表达;miR-9-5p抑制E-cadherin表达、促进vimentin表达(P<0.05或P<0.01)。结论:lncRNA MEG3通过miR-9-5p/SOCS5分子轴调控宫颈癌细胞的增殖、迁移、侵袭与EMT进程。

miR-222-3p靶向SOCS5促进宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的明确miR-222-3p对宫颈癌细胞的生物学影响。方法采用qRT-PCR检测宫颈癌患者血清和宫颈癌细胞系miR-222-3p的表达水平,通过CCK-8检测miR-222-3p对宫颈癌细胞增殖能力的影响;进一步采用划痕实验和Transwell实验明确miR-222-3p对宫颈癌细胞迁移和侵袭能力的影响;利用在线数据库预测miR-22-3p的潜在靶点,并验证其对宫颈癌细胞恶性表型的影响。结果miR-222-3p在宫颈癌患者血清和宫颈癌细胞系SiHa中表达上调,miR-31-5p促进Siha细胞增殖、迁移和侵袭能力。荧光素酶报告基因实验证实SOCS5是miR-222-3p的直接靶点,SOCS5过表达质粒会部分抑制miR-222-3p对SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭。结论上调表达的miR-222-3p通过抑制SOCS5增强宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,可能参与宫颈癌的发病。

牛SOCS5基因5′调控区多态性研究

【目的】筛选SOCS5基因启动子区多态位点(SNP),并研究其对启动子功能元件的影响。【方法】选择贵州地方优良品种务川黑牛和中国荷斯坦奶牛两种生长性能差异明显的品种构建DNA池,直接测序后用DNASTAR软件进行序列拼接和校正,BLAST分析SOCS5基因多态性,然后用生物信息学软件预测序列核心启动子区和CpG岛,分析SNP位点对转录因子结合位点影响。【结果】牛SOCS5基因5'调控区和第1外显子区存在3个SNP位点,分别为:C-577T、T-43C和C+61T,其中C+61T与SNP数据库中的rs110977810信息相符,C-577T和T-43C为新发现SNP位点。生物信息学软件预测得到SOCS5基因核心启动子区和CpG岛,SNP位点导致附近大量转录因子结合位点消失和新位点产生;SNP位点对转录因子结合位点有显著影响,但对核心启动子范围和起始位点无明显影响,不在甲基化水平上影响SOCS5基因表达水平。【结论】牛SOCS5基因5'调控区存在3个对启动子功能元件有较大影响的SNP位点。

脐环穴针刺法对慢性湿疹血虚风燥证患者SCOS3-JAK1/SATA5信号通路表达的影响

目的:探讨细胞因子信号转导抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)介导的蛋白酪氨酸激酶1(janus protein kinase 1,JAK1)/信号转导与转录激活子5(signal transducer and activator of transcription 5,STAT5)炎症通路表达对慢性湿疹血虚风燥证患者的影响及壮医脐环穴针刺法对其的干预作用。方法:选择62例慢性湿疹血虚风燥证患者,随机分为对照组和观察组各31例,实际完成对照组30例,观察组28例,并选取26名健康体检者作为正常组。对照组给予复方甘草酸苷片口服和糠酸莫米松乳膏外涂治疗,观察组采用壮医脐环穴针刺法治疗,疗程为4周。观察两组临床疗效,湿疹面积及严重度指数评分(eczema area and severity index,EASI),视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS),外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中SOCS3、JAK1、磷酸化蛋白酪氨酸激酶1、STAT5、磷酸化信号转导与转录激活子5(pSTAT5)蛋白表达,血清白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)水平。结果:观察组临床总有效率[85.71%(24/28)]优于对照组[60.00%(18/30)](P<0.05)。治疗后,两组EASI、VAS评分较治疗前均降低(P<0.05),且观察组降低降程大于对照组(P<0.05)。两组治疗前PBMC中SOCS3、JAK1、pJAK1、STAT5、pSTAT5蛋白表达量均高于正常组(P<0.05);治疗后两组SOCS3蛋白表达量均较治疗前升高,JAK1、pJAK1、STAT5、pSTAT5蛋白表达量降低(P<0.05),观察组改善程度优于对照组(P<0.05)。两组治疗前血清IL-4、IL-6、IL-10水平均高于正常组(P<0.05),治疗后两组上述指标均较治疗前降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05)。结论:壮医脐环穴针刺法能改善慢性湿疹血虚风燥证患者的临床症状,提高临床疗效,其机理与调控细胞内SOCS3-JAK1/SATA5信号通路表达,抑制患者的炎症反应有关。

细胞因子信号抑制因子在支气管哮喘T_H1／T_H2细胞失衡中的作用

目的探讨细胞因子信号抑制因子(SOCS)在支气管哮喘(简称哮喘)患儿TH细胞亚群(TH1/TH2)功能失衡中的作用,以及转录因子T-bet和GATA3与TH1／TH2反应的关系。方法观察20例哮喘患儿及相同数量同龄对照,采用流式细胞术(FCM)检测哮喘患者外周血CD4+T淋巴细胞浆中自细胞介素4(IL-4)和γ干扰素(INF-γ)的表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和荧光定量聚合酶链反应(real time PER)测定淋巴细胞SOCS3、SOCX5、T-bet、GATA3 mRNA表达水平。结果急性发作期哮喘息儿TH1细胞比例显著下降,TH2细胞显著增高(P<0．01);哮喘患儿淋巴细胞SOCS3、GATA3 mRNA表达水平显著高于正常同龄对照(P<0．01),SOCX5、T-bet mRNA表达显著下降(P<0．01)。结论SOCS3、SOCS5、T-bet和GATA3表达异常与哮喘患儿TH1／TH2失衡有关,其中SOC33和SOCS5表达异常可能是重要的因素之一。