背景:溶质载体家族1成员5(solute carrier family 1 member 5,SLC1A5)在多种疾病中发挥了潜在作用,但确切作用机制尚不清楚。构建稳定的SLC1A5过表达和敲低细胞模型可为深入研究SLC1A5在疾病中的确切作用机制以及发现潜在治疗靶点提供...背景:溶质载体家族1成员5(solute carrier family 1 member 5,SLC1A5)在多种疾病中发挥了潜在作用,但确切作用机制尚不清楚。构建稳定的SLC1A5过表达和敲低细胞模型可为深入研究SLC1A5在疾病中的确切作用机制以及发现潜在治疗靶点提供有力的实验工具。目的:构建小鼠SLC1A5过表达和敲低的慢病毒载体,以建立稳定转染的RAW264.7细胞株,为深入探讨SLC1A5在炎症中的作用提供实验基础。方法:根据SLC1A5基因序列设计合成引物并使用聚合酶链反应扩增该基因片段。将目的基因定向接入经Age I/Nhe I酶切的载体质粒GV492中构建重组慢病毒质粒,对阳性克隆进一步筛选后测序比对结果;pHelper1.0质粒载体、pHelper2.0质粒载体、目的质粒载体与293T细胞共同培养并转染,获得慢病毒原液进行包装和滴度测定;在此基础上,通过体外培养RAW264.7细胞,确定嘌呤霉素工作质量浓度;不同滴度的慢病毒分别与RAW264.7细胞共同培养,根据荧光强度确定转染效率;用嘌呤霉素挑选出稳定转染细胞,实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹方法检测稳定转染细胞株的SLC1A5基因和蛋白表达水平。结果与结论:(1)测序序列与目的序列一致提示重组慢病毒载体构建成功;(2)过表达SLC1A5慢病毒的滴度为1×10~9 TU/mL,敲低SLC1A5慢病毒的滴度为3×10~9 TU/mL;(3)确定RAW264.7细胞嘌呤霉素工作质量浓度为3μg/mL;(4)过表达/敲低SLC1A5慢病毒转染RAW264.7细胞的最佳条件皆为HiTransG P转染增强液且感染复数值等于50;(5)过表达SLC1A5稳转细胞株中SLC1A5基因和蛋白的表达量明显上调,而敲低SLC1A5稳转细胞株中SLC1A5基因和蛋白的表达量显著下调。结果表明,成功构建了小鼠SLC1A5过表达和敲低的慢病毒载体并获得稳定转染的RAW264.7细胞株。展开更多
目的基于“真实世界”研究2 L复方聚乙二醇电解质溶液(PEG)在结肠镜检查前肠道准备时的应用效果。方法选取2022年11月至2023年4月在我院消化内镜中心使用2 L PEG方案进行肠道准备的4268例患者,根据波士顿肠道准备量表(BBPS)对总体、各...目的基于“真实世界”研究2 L复方聚乙二醇电解质溶液(PEG)在结肠镜检查前肠道准备时的应用效果。方法选取2022年11月至2023年4月在我院消化内镜中心使用2 L PEG方案进行肠道准备的4268例患者,根据波士顿肠道准备量表(BBPS)对总体、各段结肠的清洗结果进行评分,按照是否合格分为合格组(n=3802)和不合格组(n=466)。比较两组的危险因素、依从性及患者感受等。结果在使用PEG进行肠道准备的4268例检查者中,3802例合格(合格率89.1%),466例不合格(不合格率10.9%)。BBPS总评分为(6.60±1.10)分,右侧结肠评分为(2.05±0.48)分,横结肠评分为(2.45±0.55)分,左侧结肠为(2.10±0.45)分。息肉总体检出率为51.6%(2203/4268)。进行多因素Logistic回归方程分析,结果显示,男性、胃肠道外科手术史、糖尿病史、每周排便<3次均为导致结肠镜检查前肠道准备不合格的危险因素(均OR>1,P<0.05)。结论2 L PEG方案能够基本满足中国人结肠镜检查肠道准备的需求,对于男性、胃肠道外科手术史、糖尿病史、每周排便<3次的检查者需要进行更严格的肠道准备方式。展开更多
文摘目的基于“真实世界”研究2 L复方聚乙二醇电解质溶液(PEG)在结肠镜检查前肠道准备时的应用效果。方法选取2022年11月至2023年4月在我院消化内镜中心使用2 L PEG方案进行肠道准备的4268例患者,根据波士顿肠道准备量表(BBPS)对总体、各段结肠的清洗结果进行评分,按照是否合格分为合格组(n=3802)和不合格组(n=466)。比较两组的危险因素、依从性及患者感受等。结果在使用PEG进行肠道准备的4268例检查者中,3802例合格(合格率89.1%),466例不合格(不合格率10.9%)。BBPS总评分为(6.60±1.10)分,右侧结肠评分为(2.05±0.48)分,横结肠评分为(2.45±0.55)分,左侧结肠为(2.10±0.45)分。息肉总体检出率为51.6%(2203/4268)。进行多因素Logistic回归方程分析,结果显示,男性、胃肠道外科手术史、糖尿病史、每周排便<3次均为导致结肠镜检查前肠道准备不合格的危险因素(均OR>1,P<0.05)。结论2 L PEG方案能够基本满足中国人结肠镜检查肠道准备的需求,对于男性、胃肠道外科手术史、糖尿病史、每周排便<3次的检查者需要进行更严格的肠道准备方式。