SOS反应间接法检测环境诱变剂方法的改进

噬菌体诱导法是检测环境诱变剂的可靠的实用方法,但实验结果由于噬菌斑与菌苔背景之间反光差不明显,使制作的幻灯片效果不佳,我们根据实验菌株生长过程中能分解葡萄糖产酸使指示剂变色的原理,对该方法进行了改进,现介绍如下。

30种常用蔬菜对SOS反应的抑制作用

本文应用SOS显色试验研究了30种常用蔬菜提取物对N-甲基-N′-硝基-N-亚硝胍、苯并[a]芘和紫外线诱发的大肠杆菌SOS反应的抑制作用。结果表明,大部分蔬菜的丙酮提取物具有抑制SOS反应作用,部分蔬菜的水溶性提取物具有抑制SOS反应作用,抑制不同致突变物引起的SOS反应具有专一性。韭黄、大蒜叶、蒜瓣水溶性提取物是典型的SOS反应强抑制物。SOS显色试验结果与Ames试验结果一致。

oxyR基因对氧化物诱导SOS反应及SOD的影响

本研究采用大肠杆菌ＰＱ６６及其ｏｘｙＲ基因缺失突变体ｏＧ４００作为生物指示体，观察到过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）、异丁基过氧化氢（ＢＨＰ）、异丙基苯过氧化氢（ＣＨＰ）诱导ＯＧ４００、ＳＯＳ反应的敏感性明显高于ＰＱ６６，而甲醛（ＦＡ）及联二－Ｎ－甲基吡啶（ＭＶ）诱导的ＳＯＳ反应在两菌种间无差异，同时发现ＭＶ能诱导ＰＱ６６和ＯＧ４００超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的产生，且两菌种之间的诱导水平无差异，而Ｈ２Ｏ２不能诱导ＳＯＤ的产生。结果提示：ｏｘｙＲ基因的功能主要在于拮抗过氧化物引起的氧化损伤，对超氧化物诱导ＳＯＤ产生则无调节作用。

中药对大肠杆菌SOS反应的抑制及其作用机制

用SOS测试方法筛选了60种中药对大肠杆菌SOS反应的抑制作用。结果表明,11种中药可以抑制原噬菌体的诱导释放。其中黄精、党参和枸杞子的抑制作用较强。用SOS显色法进一步证实了这3种中药对SOS反应的抑制作用。这3种中药同时还可抑制羟基脲诱发的酵母细胞的基因转变。经Sephadex G-25分离,薄层层析鉴定,黄精抑制SOS反应的有效成分为分子量不大于3000道尔顿的还原糖。此成分可抑制GW1060(recA441)细胞42℃诱发的SOS反应,而对GW1107(lex A51)细胞SOS网络的基因表达没有影响,从而推断它是recA蛋白酶的抑制剂。

三种咖啡对已知致突变物诱导SOS反应的抑制效应

应用SOS/umu试验研究了MAXWELL速溶咖啡(美国产品)、亚洲咖啡(中国广东产品)和MAXIN咖啡(日本产品)对已知致突变物4-硝基喹啉、AF-2及2-氨基蒽诱导SOS反应的抑制作用。结果表明三种咖啡提取物对4-硝基喹啉和AF-2都具有明显的抑制作用,MAXIN咖啡抑制率为80％以上。

用简化的原噬菌体诱导抑制试验筛检SOS反应抑制物

用简化的原噬菌体诱导抑制试验发现２６种抑制物，其中党参、黄精、生山楂、首乌、麦冬、浙贝母、５－氟尿嘧啶、５－氟脱氧尿苷、二氧化锗、大蒜素对４－硝基喹啉－Ｎ－氧化物、丝裂霉素Ｃ和甲基甲烷磺酸酯诱导的λｃＩ的ＳＯＳ反应有显著的抑制作用。同时，抑制作用在受试物与诱导剂及其相互间存在差异，提示受试物种类或成分及其与诱导剂间关系的复杂性，以及受试物可能以不同作用方式影响诱导过程。

大气颗粒污染物SOS反应诱导力的季节变化及气象因素的影响

本文用ＳＯＳ显色法研究了广州大气总悬浮颗粒（ＴＳＰ）的二氯甲烷（ＤＣＭ）提取物的ＳＯＳ反应诱导力（ＳＯＳＩＰ）。结果表明：不同季度、不同月份的提取物诱导大肠杆菌ＰＱ３７的ＳＯＳ反应能力有明显差异。样品的诱导力与相应月份的气温、气压、风速、以及ＴＳＰ浓度。

颗粒裂解肽G13结构域引发细菌SOS反应

目的利用自发光lux基因作为报告基因,检测颗粒裂解肽G13结构域对SOS启动子控制下的报告基因表达的影响。方法 pBAD-G13工程菌和鼠伤寒沙门菌Sal94混合培养,选取特定时间点测量混合菌液的光吸收值和A600值,通过公式运算,计算其单位细菌产生的平均光吸收值。结果重组G13结构域可诱导报告基因的表达,且诱导表达的水平具时间效应,呈现峰型图,在处理的开始阶段(4min左右)lux基因被强烈诱导表达并且达到峰值,随后lux基因表达水平逐渐平缓下降。结论重组G13结构域引起细菌内SOS操纵子阻遏蛋白LexA蛋白的降解,诱导发生SOS反应。

有机稀土化合物对SOS反应的抑制作用①

本文应用ＳＯＳ显色法研究了三种有机稀土化合物及其相应鳌合剂的抗诱变作用。抗坏血酸稀土、柠檬酸稀土及乙二胺四乙酸稀土浓度分别在０．５～２．５ｍｇ／ｍｌ、１～２Ｏｍｇ／ｍｌ及５～４Ｏｍｇ／ｍｌ时，对已知致癌物亚硝基胍和３，４—苯并芘诱导的ＳＯＳ反应具有抑制作用，且有较好的剂量效应关系。而单纯的螫合剂抗坏血酸抗诱变效果很好，柠檬酸显示微弱的抗诱变性，乙二胺四乙酸二钠则无抗诱变作用。

耻垢分枝杆菌中DNA损伤与SOS反应的实验研究

目的探讨基因毒性物质介导的DNA损伤引起分枝杆菌SOS反应的作用。方法选择耻垢分枝杆菌为分枝杆菌模式细菌,通过紫外线损伤试验检测耻垢分枝杆菌对紫外线的敏感性,通过2倍稀释法测定利福平和氧氟沙星的最小抑菌浓度(MIC)。分别用紫外线和次抑菌浓度(1/2MIC)抗生素处理耻垢分枝杆菌,在不同时间点收集菌液,以看家基因sigA为内参,采用实时定量PCR相对定量方法检测dnaE2、recA和recX等SOS基因表达水平的变化。结果紫外线暴露45s后耻垢分枝杆菌的存活率为50%,利福平和氧氟沙星的MIC分别是32μg/ml和1μg/ml。耻垢分枝杆菌dnaE2和recX等SOS基因表达水平在紫外线下暴露45s后即开始上升,recA的表达水平在紫外线暴露3h后显著上升。耻垢分枝杆菌dnaE2和recX基因表达水平在1/2MIC的利福平作用后1h或在1/2MIC的氧氟沙星作用0h后上升,recA的表达水平在1/2MIC的利福平或氧氟沙星作用3h时显著升高。结论紫外线、抗生素等基因毒性物质可以导致耻垢分枝杆菌DNA损伤及SOS基因表达水平上升。

15种中药蔬菜化学品对SOS反应的抑制作用

用大肠杆菌ＰＱ３７和ＰＱ３５，分别以４－硝基喹啉－Ｎ－氧化物（４ＮＱＯ）和丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）微量持续和／或脉冲诱导模式测定了１５种中药水提物、蔬菜汁和化学品溶液对依ｌｅｘｓｆｉ－ＳＯＳ反应的影响。结果表明，黄精、诃子、首乌、女贞子、浙贝母、带蒂菱殳水提物，韭菜汁以及５－氟尿嘧啶、鞣酸和大蒜素溶液对４ＮＱＯ持续和脉冲诱导的ＳＯＳ反应有线性抑制作用，提示该作用发生在ＰＱ３７菌细胞内和外；其中诃子、女贞子、浙贝母、带蒂菱殳水提物、韭菜汁、５－氟尿嘧啶、鞣酸溶液还能在ＰＱ３５胞内抑制ＭＭＣ诱导的ＳＯＳ反应。灰树花兼有在ＰＱ３７外或ＰＱ３５内抑制４ＮＱＯ或ＭＭＣ诱导的ＳＯＳ反应。而生山楂、白芷、麦冬、５－氟脱氧尿苷仅能在ＰＱ３７外抑制４ＮＱＯ诱导的ＳＯＳ反应。

SOS显色反应检测及其在毒理学中的应用

微生物(细菌)作为检测系统已被广泛应用于检测遗传毒物,其中以Ames试验最著名。近年来,Quillardet等建立了一种新的遗传毒物细菌检测系统——SOS显色反应检测法(SOS Chromotest),受到广泛的重视。

利用SOS显色反应评价长寿老人源乳酸菌对4-NQO基因毒性的抑制作用

详细报道了应用SOS显色反应评价巴马长寿老人源乳杆菌和双歧杆菌抑制基因毒性物质4-硝基喹啉-1-氧化物(4-NQO)的方法。4-NQO(0.1mmol/L)与待测乳酸菌(108～109CFU/ml)37℃共培养180min,6株唾液乳杆菌和2双歧杆菌培养上清液均可抑制4-NQO的基因毒性作用,不同菌株之间在抑制能力上存在菌株差异性。其中以分离自长寿老人粪便的Lactobacillus salivarius subsp.salivarius24DB、2JC、BCHONG和Bifidobacterium animalis subsp.lactis BBMN BBMN1、BBMN2的基因毒性清除率分别为92.91%、88.55%、89.81%、80.86%和83.54%,初步讨论了益生菌对4-NQO的抑制机理。

基于SOS反应及氧化应激反应相关启动子的辐射生物传感器研究

近年来的动物实验结果表明电磁辐射的危害主要是具有神经系统毒性、诱发肿瘤和生殖系统损伤等,广域、隐蔽和累积效应是辐射的特点,除对机体进行直接损伤外,还可导致间接损伤,即通过产生活性氧(ROS)和自由基攻击生物大分子。为了迅速和简便地检测辐射毒性的大小建立了新型的辐射生物传感器,构建了携带SOS反应和氧化应激反应相关的SulA、RecA、Cda和SoxR四种启动子融合经过密码子简并性优化的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)报告因子的工程菌传感器,并对这些生物传感器进行了γ射线辐照处理,筛选出了针对γ射线响应较好的,优选RecA工程菌传感器。利用PCR和Overlap PCR克隆获得了启动子-报告因子融合基因,并插入表达载体PUC19中,转化入宿主大肠杆菌DH5α,通过提取质粒进行双酶切和测序验证后,将构建成功的工程菌传感器首先进行化学毒性试剂刺激,一旦化学试剂刺激结果阳性便进行物理辐射刺激。结果显示,构建成功的4种工程菌传感器均对物理辐射产生应答,且随物理辐射剂量的增加(0~30Gy),绿色荧光强度逐渐增强。运用合成生物学手段,成功建立基于生物损伤修复效应和氧化应激反应的辐射生物传感器,具有制备简便、结果可视性等优点,能满足快速、广范围、在线监测的需求,在细胞毒性物、辐射环境乃至空间射线的损伤能力测定方面具有良好的应用前景。

细菌DNA损伤诱导反应(SOS 反应)在控制细菌耐药性中的作用

细菌耐药性是当前最紧迫的公众健康问题之一,尤其在目前新型抗菌药物研发落后于耐药菌进化速度的情况下,细菌耐药性的发生、传播以及消除的机制,已经成为人们关注的热点。近来研究发现,细菌DNA损伤诱导反应(SOS反应)在细菌进化耐药性的过程中扮演着重要角色。在这里,本文对SOS反应与细菌耐药性的关系、研究进展以及当前存在问题作一阐述。

SOS反应在病原菌中对抗生素耐药形成研究进展

SOS反应是一种DNA修复机制,在细菌对抗菌药物产生耐药性的生物学过程中起着至关重要的作用。SOS反应的激活增加了细菌对抗菌药物的抵抗力。因此,SOS相关通路基因可作为新的抗菌药物的有效靶点。现就SOS反应在细菌耐药性及耐受性机制中的核心作用及其在不同病原菌中的研究进展做以综述,以期为SOS反应相关通路靶点耐药抑制剂的研究奠定基础。

过氧化氢对SOS显色反应的诱导——一种吸烟致癌机制的探讨

本试验用大肠杆菌(Escherichia coli)PQ37为测试系统,测试过氧化氢(H_2O_2)对 SOS 显色反应的诱导作用:并结合不同的分析对照试验推断出:H_2O_2可以进入细胞内与细胞内固有的超氧负离子自由基(O_2^(?)),在细胞内铁离子的存在下,通过 Haber-Weiss 反应,生成氢氧根自由基(OH~·),OH~·最终伤害 DNA.由于卷烟烟雾可在溶液中产生H_2O_2和 O_2^(?),所以上述机制可能是吸烟致癌的一种机制.

HPLC和SOS显色反应检测不同微生物脱除4-NQO基因毒性能力

应用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)和SOS显色反应测定36株益生菌脱除4-硝基喹啉-1-氧化物(4-NQO)基因毒性的能力,同时用HPLC对它们的图谱进行比较分析。研究发现,基因毒性清除率高的菌株有1株植物乳杆菌、5株双歧杆菌、干酪乳杆菌代田株、3株芽孢杆菌、2株酵母菌、7株唾液乳杆菌和一株保加利亚乳杆菌。同属于一个菌属的各个菌株基因毒性清除率之间差异不显著。图谱分析发现,只有唾液乳杆菌才产生P1,即益生菌脱除4-NQO基因毒性具有菌株特异性。研究还发现益生菌转化4-NQO为4-HAQO的能力是决定益生菌脱除4-NQO基因毒性能力大小的关键。

2,5-二氯硝基苯的SOS突变及其分子机制

2,5-二氯硝基苯对S.typhimurium(his^-)有回复突变作用,质粒pKM_(101)和pSK_(1002)能增强其突变效应。它在含umu-lac融合基因的S.typhimurium和E.coli上亦能诱导SOS反应,通过umuC介导以及依lexA和/或recA旁路调节机制可致SOS突变形成。因此,它是一种新的SOS诱变剂。