K-ras、SOS1蛋白阳性表达与结直肠癌患者临床病理特征及预后的关系

目的:观察K-ras、SOS1蛋白阳性表达与结直肠癌患者临床病理特征及预后的关系。方法:回顾性分析2016年9月至2018年1月84例结直肠癌患者的临床资料,观察K-ras、SOS1蛋白表达与结直肠癌临床病理特征、预后的关系。结果:男性患者K-ras蛋白阳性率高于女性;TNMⅢ、Ⅳ期患者K-ras蛋白阳性率高于Ⅰ、Ⅱ期患者;存在区域淋巴结转移患者K-ras蛋白阳性率高于无区域淋巴结转移患者,差异有统计学意义(P<0.05);K-ras、SOS1阳性患者18个月生存率低于K-ras、SOS1阴性患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:K-ras蛋白与结直肠癌病情进展有关,K-ras、SOS1蛋白均为阳性者预后较差。

黄瓜质膜型Na^+/H^+逆向转运蛋白基因(SOS1)的克隆与序列分析

采用RACE(rapid-amplification of cDNA ends)方法从黄瓜Cucumis sativusL.中克隆出质膜Na+/H+逆向转运蛋白基因的cDNA(CsSOS1),该cDNA全长3 638bp,其中开放阅读框为3 435bp,编码1 145个氨基酸。氨基酸同源性分析表明,CsSOS1氨基酸序列与水稻OsSOS1和拟南芥AtSOS1的氨基酸序列同源性较高,分别为64%和58%,而与液泡型的Na+/H+逆向转运蛋白氨基酸序列亲缘关系较远。蛋白质跨膜结构分析表明CsSOS1包含11个完全跨膜片段。激光共聚焦显微镜显示CsSOS1基因的编码区与YFP基因融合后,定位在细胞膜上。酵母功能互补试验结果显示CsSOS1参与Na+与H+的转运,表明该基因转化酵母后可以补充酵母SOS1的缺失。

结直肠癌SOS1、K-ras共表达对预后的影响

目的探讨在人结直肠癌组织中K-ras蛋白和SOS1蛋白的表达情况及其临床意义。方法选取术后病理确诊为结直肠癌的患者156例及相应癌旁> 5 cm结直肠黏膜组织标本45例,免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC) S-P法检测K-ras蛋白和SOS1蛋白的表达,分析K-ras蛋白和SOS1蛋白阳性表达与结直肠癌患者临床病理学及预后的关系。结果 K-ras蛋白在结直肠癌细胞和癌旁肠黏膜细胞胞膜及胞质中表达,在结直肠癌组织中阳性率为78. 8%(123/156),癌旁组织中阳性率为53. 3%(24/45),差异有统计学意义(χ~2=11. 570,P=0. 001)。SOS1蛋白在结直肠癌细胞胞质和癌旁肠黏膜细胞胞质中表达,在结直肠癌组织中阳性率为50. 6%(79/156),在癌旁组织中阳性率为28. 9%(13/45),差异有统计学意义(χ~2=7. 174,P=0. 007)。K-ras蛋白阳性表达与患者性别(χ~2=4. 405,P=0. 036)、淋巴结转移(χ~2=9. 471,P=0. 002)及TNM分期(χ~2=6. 177,P=0. 013)有关,与年龄、肿瘤分化程度、肿瘤部位、浸润深度均无关(P>0. 05),SOS1蛋白阳性表达与结直肠癌临床病理无关(P> 0. 05)。K-ras和SOS1蛋白共表达的结直肠癌患者较K-ras阳性SOS1阴性的4年总生存期(overall survival,OS)短,差异有统计学意义(HR=2. 381,95%CI:1. 103～5. 137,P=0. 034 3),COX多因素分析显示:调整了性别、年龄、肿瘤分化程度、手术方式、是否行术后辅助化疗、肿瘤T分期、肿瘤N分期、免疫组化分组等因素后,提示肿瘤T分期(HR=2. 118,95%CI:1. 109～4. 046,P=0. 023)、肿瘤N分期(HR=2. 487,95%CI:1. 103～5. 610,P=0. 028)及免疫组化分组(HR=2. 795,95%CI:1. 272～6. 139,P=0. 010)是结直肠癌患者预后不良的独立危险因素。结论 K-ras蛋白可能与结直肠癌病情进展有关,K-ras蛋白和SOS1蛋白共阳性表达的结直肠癌患者的预后更差。

胡杨PeSOS1对拟南芥盐诱导H_2O_2信号途径的调控

【目的】研究胡杨质膜Na+/H+逆向转运蛋白(SOS1)通过H2O2信号途径对盐胁迫的感知和适应作用。【方法】克隆胡杨质膜SOS1基因(PeSOS1),并将其转化到拟南芥中,比较野生型和转PeSOS1基因拟南芥在100mmol/L NaCl胁迫下的萌发率,根长,干质量,K+、Na+和Ca2+含量,活体植株根尖离子流(K+、Na+和H+)的流动情况,H2O2的产生和抗氧化酶活性的变化以及抑制剂对根尖离子流的影响,分析100mmol/L NaCl胁迫下异源表达PeSOS1基因拟南芥与野生型拟南芥耐盐性的差异。【结果】在NaCl胁迫下,转PeSOS1基因拟南芥株系的萌发率、根长和干质量明显高于野生型拟南芥;转PeSOS1基因拟南芥K+和Ca2+含量也高于野生型拟南芥,而Na+含量较野生型拟南芥低。100mmol/L NaCl处理后,转PeSOS1基因拟南芥中K+和Na+的平衡(K+/Na+值)与NaCl胁迫前相比下降幅度较小。转PeSOS1基因植株在NaCl胁迫下能更快地产生H2O2,并使抗氧化酶保持较高的活性。SOS1抑制剂阿米洛利(Amiloride)对NaCl胁迫下野生型和转基因拟南芥根尖离子流的变化有明显影响,用质膜NADPH氧化酶抑制剂DPI(抑制H2O2的产生)处理后,转PeSOS1基因拟南芥根尖K+内流减弱,Na+外流和H+内流增强,植株维持K+和Na+平衡的能力减弱。【结论】在拟南芥中异源表达PeSOS1基因可促进H2O2快速产生,维持了SOS1mRNA的稳定性,调控了K+和Na+平衡,并激活了抗氧化防御系统,因而显著提高了其耐盐性。

大叶补血草Na^+/H^+逆向转运蛋白基因(SOS1)的克隆与序列分析

用RT-PCR及RACE方法从盐生植物大叶补血草Limonium gmelinii(Willd.)Kuntze中分离出Na+/H+逆向转运蛋白基因的cDNA(LgSOS1,GenBank登录号EU780458),LgSOS1的cDNA全长为3910bp,5′非翻译区为79bp,3′非翻译区为376bp,开放阅读框为3455bp,编码1151个氨基酸,推测分子量为126kD。氨基酸同源性分析表明,LgSOS1与冰叶午时花、沙拐枣、番茄、盐芥和拟南芥质膜型Na+/H+逆向转运蛋白的一致性分别为69.02%,64.42%,61.96%,60.12%和59.62%。预测分析表明,LgSOS1有12个跨膜结构区域。系统发育分析表明该蛋白与质膜型的Na+/H+逆向转运蛋白的亲缘关系较近,与液泡型的Na+/H+逆向转运蛋白亲缘关系较远。

獐茅耐盐基因SOS1的克隆及序列分析

采用RT-PCR和RLM-RACE方法从单子叶盐生植物獐茅(Aeluropus littoralis(Gouan)Parl)中克隆了质膜Na+/H+逆向转运蛋白基因(AlSOS1,JN936862),并对其基因序列进行了分析。Southern杂交试验显示:AlSOS1基因在獐茅基因组中以单拷贝形式存在。AlSOS1基因cDNA全长3 641bp,其中编码区3 420bp,编码一个1 139氨基酸的蛋白。AlSOS1编码蛋白与芦苇、水稻质膜Na+/H+逆向转运蛋白亲缘关系最为接近,达到82%和77%,与双子叶植物拟南芥的亲缘关系仅为58%;系统发育分析显示AlSOS1基因编码蛋白与其他植物质膜型Na+/H+逆向转运蛋白属于同一分支,而与液泡型Na+/H+逆向转运蛋白属于不同的分支;疏水性分析显示AlSOS1基因编码蛋白N-末端具有12个跨膜结构域,C-末端具有一个很长且面向质膜内腔的亲水尾部。这是獐茅SOS1基因编码区首次被完整克隆,将进一步应用于单子叶农作物耐盐性状改良的基因工程之中。