miRNA-613在乳腺癌中的表达及作用机制

目的:探讨乳腺癌中微小RNA(microRNA,miRNA)-613表达及作用机制.方法:收集2017年5月至2018年5月91例于南充市中心医院手术切除的乳腺癌患者的组织标本,实时荧光定量PCR检测乳腺癌组织及癌旁组织标本、乳腺癌细胞系(MDA-MB-231、MDA-MB-468、MCF-7)和正常乳腺上皮细胞系HBL-100中miRNA-613的表达水平,分析其与乳腺癌患者临床病理特征的关系.TCGA数据库分析miRNA-613与乳腺癌患者预后的关系.双荧光素酶报告实验检测miRNA-613与SOX9的3'UTR区的结合情况.将miRNA-613模拟物转染至MDA-MB-231细胞,CCK-8法和Transwell侵袭及迁移实验分别检测细胞增殖活性、侵袭和迁移能力的变化,Western blot检测细胞中SOX9、β-catenin、E-Cadherin和Vimentin蛋白的表达变化.结果:miRNA-613在乳腺癌组织中表达明显低于癌旁组织(P<0.05),并且miRNA-613表达与TNM分期和淋巴结转移密切相关(P<0.05),TCGA生存数据显示miRNA-613表达与乳腺癌患者的总生存率无关(P>0.05).乳腺癌细胞系中miRNA-613的表达明显低于正常乳腺上皮细胞系(P<0.05),并且高侵袭转移性乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-468中miRNA-613的表达明显低于低侵袭转移性乳腺癌细胞系MCF-7(P<0.05).双荧光素酶报告实验显示miRNA-613可与SOX9的3'UTR特异性结合.上调miRNA-613的表达能抑制MDA-MB-231细胞的增殖和侵袭迁移能力(P<0.05),同时下调SOX9、β-catenin和Vimentin蛋白的表达(P<0.05),并上调E-Cadherin蛋白的表达(P<0.05).结论:在乳腺癌组织和细胞中miRNA-613异常低表达,miRNA-613可能通过调控SOX9、Wnt/β-catenin信号通路抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭转移及上皮间质转化.

慢病毒介导的性别决定区Y框蛋白9表达下调对抑制Wnt信号通路调控乳腺癌细胞侵袭能力的影响

目的研究慢病毒介导的性别决定区Y框蛋白9(SOX9)表达下调对抑制Wnt信号通路调控乳腺癌细胞侵袭能力的影响。方法以Wnt信号通路抑制剂XAV939处理乳腺癌细胞MDA-MB-436,噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖活性,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测细胞中SOX9蛋白及Wnt信号通路蛋白β-连环蛋白(β-catenin)、下游靶基因c-myc表达水平。SOX9 siRNA慢病毒感染MDA-MB-436细胞,Realtime PCR和蛋白质印迹法检测干扰效果。细胞划痕实验测定细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法检测细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和上皮间质转化(EMT)相关蛋白上皮性钙黏附素(E-cadherin)、神经性钙黏附素(N-cadherin)表达水平。结果 XAV939能够下调MDA-MB-436细胞增殖活性,抑制乳腺癌细胞中SOX9蛋白表达,降低Wnt信号通路蛋白β-catenin、c-myc表达水平。SOX9 siRNA慢病毒感染后的MDA-MB-436细胞中SOX9 m RNA和蛋白水平降低。下调SOX9的MDA-MB-436细胞侵袭数目从(85.56±4.35)降低至(64.15±3.25),迁移率从(74.16±6.25)%降低至(54.12±3.96)%,细胞中MMP-2蛋白水平降低,E-cadherin蛋白水平升高,N-cadherin蛋白水平降低。XAV939也能够下调MDA-MB-436细胞侵袭数目从(85.56±4.35)降低至(51.23±2.87),迁移率从(74.16±6.25)%降低至(45.28±3.59)%,抑制细胞中MMP-2蛋白表达,促进E-cadherin蛋白表达,下调N-cadherin蛋白表达水平。XAV939处理下调SOX9的MDA-MB-436细胞,细胞侵袭数目降低至(34.18±2.59),迁移率降低至(24.78±1.68)%,细胞中MMP-2蛋白表达水平下降更多,E-cadherin蛋白水平升高更多,N-cadherin蛋白水平下降更多。结论抑制Wnt信号通路下调乳腺癌细胞中SOX9的表达水平,敲低其表达能够协同Wnt信号通路抑制剂降低乳腺癌细胞侵袭迁移能力。

Oct-4、SOX2和KPNA2在三阴性乳腺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨三阴性乳腺癌(TNBC)组织中Oct-4、SOX2和KPNA2的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化方法检测Oct-4、SOX2和KPNA2在30例TNBC和30例非TNBC患者癌组织中的表达,分析三者的表达与TNBC患者临床病理因素及预后的关系。结果:与非TNBC组织比较,TNBC组织中Oct-4的阳性表达率(86.7%vs.73.3%,P<0.05)和SOX2的阳性表达率(90.0%vs.70.0%,P<0.05)均明显升高,KPNA2的阳性表达率无统计学差异(P>0.05)。在TNBC组织中,Oct-4、SOX2和KPNA2彼此间的表达均呈正相关(Oct-4和SOX2:r=0.680,P<0.0001;Oct-4和KPNA2:r=0.581,P=0.0008;SOX2和KPNA2:r=0.770,P<0.0001)。在TNBC患者中,Oct-4的表达与年龄、组织学分级、淋巴结转移和TNM分期均有关,SOX2的表达与淋巴结转移和TNM分期有关,KPNA2的表达与淋巴结转移有关(均P<0.05);Oct-4、SOX2、KPNA2阳性表达患者生存率明显低于各自阴性表达患者(均P<0.01)。结论:Oct-4、SOX2在TNBC组织中表达均增加,且两者可能与KPNA2共同参与了TNBC的恶性进展。

微RNA-524-5p通过靶向抑制SOX9基因表达增加胃癌细胞的顺铂敏感性

目的:探讨微RNA-524-5p(microRNA-524-5p,miR-524-5p)介导顺铂治疗胃癌的作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR法检测胃癌组织、癌旁组织以及顺铂耐药和亲本胃癌细胞系中miR-524-5p的表达水平。顺铂耐药性胃癌SGC-7901和MKN-45细胞经miR-524-5p模拟物或对照RNA转染后,采用CCK-8法检测细胞活力。采用荧光素酶报告基因实验和蛋白质印迹法鉴定miR-524-5p靶向蛋白SOX9(SRY-related high mobility group-box 9)的表达情况。采用'拯救'实验检测SOX9过表达后miR-524-5p诱导胃癌细胞对顺铂的耐药性变化。结果:与正常胃上皮黏膜细胞GES1相比,胃癌细胞SGC-7901和MKN-45中miR-524-5p水平明显下调(P值均<0.05);与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-524-5p水平明显下调(P <0.05)。与敏感性亲代细胞相比,顺铂处理后的胃癌耐药细胞SGC-7901和MKN-45中miR-524-5p表达水平均降低(P值均<0.05)。miR-524-5p模拟物转染后,顺铂耐药性胃癌细胞SGC-7901和MKN-45的化疗敏感性均明显增强(P值均<0.05)。SOX9是miR-524-5p的功能靶蛋白;SOX9过表达可以抵消miR-524-5p的化疗增敏作用,即与单独miR-524-5p模拟物转染组相比,SOX9过表达质粒+miR-524-5p模拟物转染后的胃癌细胞SGC-7901和MKN-45对顺铂的敏感性均明显降低(P值均<0.05)。结论:miR-524-5p影响人胃癌细胞对顺铂作用的敏感性,提示其可能成为治疗化疗耐药性胃癌患者的新靶点。

石榴皮多酚对金黄地鼠皮脂腺斑及AKT/Sox9信号通路的影响

目的探讨石榴皮多酚对金黄地鼠皮脂分泌的影响及作用机制。方法将30只金黄地鼠随机分为基质组和0.48%、0.96%、1.92%石榴皮多酚软膏组及维A酸乳膏组,每组6只,分别于双侧皮脂腺斑处涂抹1 g相应的软膏或乳膏连续4周,每日2次,于干预后第0、7、14、21、28天测量双侧皮脂腺斑,以最大纵径×最大横径来计算皮脂腺斑面积,并采用免疫组化法检测皮脂腺斑AKT/sox9信号通路表达水平。各组间不同时间点皮脂腺斑面积大小采用重复测量方差分析,其他数据采用单因素方差分析或Kruskal-Wallis H检验。结果0.96%石榴皮多酚组金黄地鼠皮脂腺斑面积为(50.48±2.41)mm2,1.92%石榴皮多酚组为(48.24±2.56)mm^(2),维A酸组为(48.31±2.76)mm^(2),均明显小于基质组(57.99±3.29)mm2,差异均有统计学意义(t值分别为2.69、3.98、3.65,P值分别为0.012、0.001、0.001)。1.92%石榴皮多酚组(0.39±0.04)和维A酸组(0.38±0.03)Sox9表达水平低于基质组(0.44±0.02),差异有统计学意义(P=0.040)。各组间AKT表达水平差异无无统计学意义(F=1.645,P=0.199)。结论石榴皮多酚可以减小金黄地鼠皮脂腺斑面积,抑制皮脂分泌,其作用机制可能与抑制Sox9表达有关。