SOX13抗体放射配体检测法的建立与临床应用

目的 建立SOX13抗体的放射配体检测法，初步探讨其对自身免疫糖尿病的诊断价值。方法 采用SOX13质粒，经体外转录与翻译，获得^35S标记SOX13。^35S-SOX13与血清在旋转孵育器中混匀过夜，用蛋白A琼脂糖沉淀抗原抗体复合物。沉淀复合物经TBST缓冲液洗涤后，置液体闪烁计数仪上计数，结果以国际标准化的抗体指数表示。检测162例急性起病、328例隐匿起病糖尿病患者以及120例正常人血清中SOX13抗体指数。结果 （1）方法的批内CV3．9％～9．2％，批间CV5．2％～12．0％，28例标本重复检测3次，结果判断一致；（2）120例正常人的SOX13抗体指数呈偏态分布，取97．5％的百分位点，阳性阈值为0．10；（3）检测急性起病患者162例，阳性15例，阳性率9．3％；隐匿起病患者328例，阳性34例，阳性率10．4％，均显著高于正常组（P〈0．05）。结论 （1）建立的SOX13抗体放射配体检测法灵敏度和重复性好，可应用于临床；（2）SOX13抗体对自身免疫性糖尿病（特别是GAD-Ab、IA-2Ab、CPH-Ab阴性者）具有独特的诊断价值。

皮肤恶性黑色素瘤组织中微小RNA-185-5p、SOX13的表达及临床意义

目的检测微小RNA-185-5p(miR-185-5p)和SOX13在皮肤恶性黑色素瘤(CMM)组织中的表达情况,并探讨其临床意义。方法选择行手术治疗的61例CMM患者为观察对象(CMM组),另外,选择61例同时期诊断为皮肤良性色素痣的患者组织标本为对照组。根据miR-185-5p在CMM组织中表达水平,将CMM患者分为miR-185-5p高表达组(miR-185-5p表达水平≥0.47)31例和miR-185-5p低表达组(miR-185-5p表达水平<0.47)30例。根据SOX13蛋白在CMM组织中的表达结果,将CMM患者分为SOX13阳性表达组36例和SOX13阴性表达组25例。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测CMM组织与色素痣组织中miR-185-5p、SOX13 mRNA的表达水平,采用免疫组织化学法检测SOX13蛋白表达水平,采用Pearson法分析CMM组织中miR-185-5p与SOX13 mRNA表达水平的相关性,采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-185-5p、SOX13表达与CMM患者生存率的关系,采用Cox回归模型分析CMM患者的预后影响因素。结果CMM组织中,miR-185-5p表达水平为(0.47±0.08),低于色素痣组织的(1.01±0.13),差异有统计学意义(t=27.630,P<0.05);CMM组织中SOX13 mRNA的表达水平为(2.32±0.51),高于色素痣组织的(1.05±0.11),差异有统计学意义(t=19.012,P<0.05);CMM组织中SOX13蛋白阳性表达率(59.02%)高于色素痣组织(13.11%),差异有统计学意义(P<0.05);CMM组织中miR-185-5p与SOX13 mRNA的表达呈负相关(r=-0.635,P<0.05);CMM组织中,miR-185-5p、SOX13表达与浸润程度和淋巴结转移有关(P<0.05);miR-185-5p高表达组3年生存率高于miR-185-5p低表达组,差异有统计学意义(χ^(2)=5.871,P=0.015);SOX13阳性表达组3年生存率低于SOX13阴性表达组(χ^(2)=5.030,P=0.020);淋巴结转移、SOX13是CMM患者不良预后的独立危险因素,而miR-185-5p是CMM患者不良预后的保护因素(P<0.05)。结论CMM组织中miR-185-5p呈低表达,SOX13呈高表达,且两者的表达与CMM患者淋巴结转移等临床病理特征和预后有关,或可作为CMM潜在的预后标志物。

SOX13抗体对急性起病自身免疫糖尿病的诊断意义

目的探讨SOX13抗体(SOX13Ab)对急性起病自身免疫糖尿病的诊断价值。方法162例急性起病糖尿病患者根据谷氨酸脱羧酶抗体(GADAb)和蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA2Ab)阳性与否分为经典[GADAb和(或)IA2Ab阳性]和非经典1型糖尿病(DM)(GADAb和IA2Ab均阴性)两亚组,正常对照组120名,分析SOX13Ab分布规律、该抗体阳性患者临床特征及其对胰岛功能的影响。结果(1)急性起病组和经典1型DM亚组SOX13Ab阳性率均高于正常对照组(9.3%vs2.5%,9.9%vs2.5%;均P<0.05);SOX13Ab(+)/GADAb(+)双阳性者6例(3.7%),无1例SOX13Ab(+)/IA2Ab(+)双阳性者;(2)SOX13Ab分布峰值处于发病年龄61～70岁;(3)SOX13Ab单一阳性组临床特征(包括代谢综合征相关指标异常程度等)与GADAb、IA2Ab单一阳性和抗体阴性组间差异无统计学意义(P>0.05);(4)SOX13Ab单一阳性组C肽介于GADAb、IA2Ab单一阳性和抗体阴性组之间。结论SOX13Ab检测可提高诊断急性起病自身免疫糖尿病的敏感性。

GADA阴性2型糖尿病患者SOX13抗体的检测

目的探讨SOX13抗体（SOX13-Ab）在谷氨酸脱羧酶抗体（GAD-Ab）阴性的2型糖尿病（T2DM）患者中的分布规律及其与胰岛β细胞功能的关系。方法对301例GAD-Ab检测阴性的T2DM患者及120例正常对照者，采用放射配体法检测血清SOX13-Ab指数，比较SOX13-Ab在不同病程、不同发病年龄、不同体重指数（BMI）以及不同空腹C肽（FCP）组的阳性率，分析SOX13-Ab阳性与阴性患者的临床特征。结果T2DM组SOX13-Ab阳性率显著高于正常对照组（6．0％VS．0．8％）（P〈0．05）；T2DM组中SOX13-Ab分布峰值处于发病年龄61～70岁；SOX13-Ab阳性患者病程显著低于阴性患者，而糖化血红蛋白（HbAlc）显著高于阴性患者（P〈0．05）。结论SOX13-Ab不能作为诊断成人隐匿性自身免疫糖尿病（LADA）的独立指标。

SOX13基因来源环状RNA hsacirc0004777的特征分析及功能预测

目的探索SOX13基因来源的环状RNA hsairc004777的特征分析及功能预测。方法探究了hsairc004777的基本特征, 包括验证反向剪接位点, RNase R消化实验, 细胞内RNA的胞质胞核分布, 蛋白翻译潜能的预测。此外, 使用生物信息学方法, 预测hsairc004777结合的微小RNA(microRNA, miRNA)以及miRNA的靶基因, 并且构建了circRNA-miRNA-mRNA的网络图。再对预测到的miRNA的靶基因进行基因本体论(gene ontology, GO)功能富集分析和信号通路富集分析。结果 hsairc004777的形成是由SOX13基因第4号外显子反向剪接至第2号外显子, hsairc004777能抵抗RNase R处理, 主要分布在细胞质。生信预测hsairc004777通过作为hsa-miR-1225-3p、hsa-miR-637、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-384、hsa-miR-660-5p、hsa-miR-942-5p、hsa-miR-331-3p这8个miRNA的海绵来发挥作用;hsairc004777潜在结合的8个miRNA的靶基因在对聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、DNA模板、骨骼肌细胞分化等生物过程显著富集。结论成功探索了SOX13基因来源的环状RNA hsairc004777的特征, 并且从circRNA-miRNA-mRNA网络图中预测了它的功能, 为进一步研究hsairc004777奠定了基础, 也为更深入研究SOX13提供了思路。

SOX13抗体对酮症倾向糖尿病患者胰岛功能的影响

目的 探讨SOX13抗体(sry related HMG box 13-antibody,SOX13-Ab)对酮症倾向糖尿病(KPD)患者胰岛功能的影响,进一步确定SOX13-Ab在KPD患者中的自身免疫反应特征.方法 2005年1月至2009年11月对南京鼓楼医院内分泌科就诊的245例KPD患者[男138例,女107例,年龄33(1～80)岁]均检测SOX13-Ab、谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-Ab)和蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A),以SOX13-Ab单一阳性患者为病例组,以GAD-Ab、IA-2A单一阳性及抗体均阴性组患者为对照组,比较4组患者的胰岛功能.各组平均C肽水平采用中位数(四分位数间距)表示,经自然对数转化后进一步采用方差分析比较组间差异.结果 (1)女性患者中SOX13-Ab单一阳性、GAD-Ab单一阳性组空腹C肽(FCP)和餐后2 h C肽(PCP)水平分别为166.0(300.0)和166.5(159.3)、285.0(527.0)和231.0(502.5)pmol/L,均显著低于抗体阴性组[FCP为287.5(302.7)pmol/L、PCP为528.0(774.0)pmol/L;均P＜0.05];(2)发病年龄≤40岁或病程≤5年的KPD患者中,其FCP水平SOX13-Ab组[166.0(56.0)vs 228.0(250.0)pmol/L]、GAD-Ab单一阳性组[191.0(137.5)vs 324.0(340.0)pmol/L]均显著低于抗体阴性组[167.1(223.1)vs 324.0(340.0)pmol/L];而在病程＞5年的KPD患者中,GAD-Ab单一阳性组FCP水平为130.0(458.8)pmol/L、SOX13-Ab单一阳性组为189.5(357.7)pmol/L,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);(3)协方差分析显示SOX13-Ab单一阳性与抗体阴性组之间FCP、PCP比较差异无统计学意义(P＞0.05);而GAD-Ab/SOX13-Ab双阳性组FCP与抗体阴性组比较差异有统计学意义(P＜0.05);(4)GAD-Ab、IA-2A单一阳性组内FCP与病程均呈显著负相关(r值分别为-0.500、-0.821,P值分别为0.007、0.023),而SOX13-Ab单一阳性组内FCP与病程之间无显著负相关性(r=-0.104,P=0.606).结论 SOX13-Ab对KPD患者胰岛功能的影响弱于GAD-Ab.

SOX13抗体与2型糖尿病患者颈动脉内中膜厚度的关系

目的探讨SOX13抗体(SOX13-Ab)与2型糖尿病(T2DM)患者颈动脉内中膜厚度(IMT)的关系。方法选取248例谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-Ab)阴性的T2DM患者,检测SOX13-Ab指数等,彩色B超测量受试者颈动脉IMT及可视斑块范围。探讨SOX13-Ab指数与IMT增厚、斑块发生的相互关系。结果 (1)IMT与发病年龄呈显著正相关,与SOX13-Ab指数呈显著负相关(P均<0.05)。(2)随SOX13 Ab指数升高,IMT、内膜增厚(IMT>0.9mm)风险性及斑块阳性率渐降;SOX13-Ab最低五分位组IMT显著高于其他各分位;内膜增厚风险性显著高于4^(th)1/5、5^(th)1/5分位组,斑块阳性率显著高于4^(th)1/5分位组(P均<0.05)。(3)随斑块严重程度的增加,SOX13-Ab指数递减;0级组患者SOX13-Ab指数显著高于2级组(P<0.05)。结论 SOX13-Ab指数与T2DM患者IMT具有良好负相关性,可望成为判断T2DM患者发生IMT增厚及动脉粥样硬化危险性的新指标。

SOX13 gene downregulation in peripheral blood mononuclear cells of patients with Klinefelter syndrome

Klinefelter syndrome(KS)is the most common sex chromosome disorder in men.It is characterized by germ cell loss and other variable clinical features,including autoimmunity.The sex-determining region of Y(SRY)-box 13(Sox13)gene is expressed in mouse spermatogonia.In addition,it has been identified as islet cell autoantigen 12(ICA12),which is involved in the pathogenesis of autoimmune diseases,including type 1 diabetes mellitus(DM)and primary biliary cirrhosis.SOX13 expression has never been investigated in patients with KS.In this age-matched,case-control study performed on ten patients with KS and ten controls,we found that SOX13 is significantly downregulated in peripheral blood mononuclear cells of patients with KS compared to controls.This finding might be consistent with the germ cell loss typical of patients with KS.However,the role of SOX13 in the pathogenesis of germ cell loss and humoral autoimmunity in patients with KS deserves to be further explored.

中老年糖尿病患者胰岛自身抗体检测的意义

目的探讨谷氨酸脱羧酶抗体（GAD—Ab）和SOX13抗体（SOX13-Ab）在／〉50岁糖尿病患者中的分布规律及其与胰岛功能的关系。方法检测211例≥50岁糖尿病患者GAD—Ab和SOX13-Ab，分析两种抗体在不同病程、体质指数（BMI）及空腹C肽（FCP）组的阳性率，比较抗体阳性与阴性患者的临床特征。结果①单独GAD—Ab与单独SOX13-Ab阳性率（9．0％与9．9％）之间无显著差异，但均显著高于抗体双阳性者（0．9％，P〈0．05）；②SOX13-Ab单一阳性组病程显著低于抗体阴性组，而GAD—Ab单一阳性组病程显著高于抗体阴性组（P均〈0．05）；③不同病程（〈5、≥5年）范围内，GAD—Ab单一阳性组FCP、2hPCP显著低于抗体阴性组（P〈0．05），而SOX13-Ab单一阳性组FCP、2hPCP与抗体阴性组无显著差异。结论中老年糖尿病患者GAD—Ab与SOX13-Ab分布的重叠性低，联合检测有助于分型诊断；这两种抗体对中老年糖尿病患者胰岛功能的影响程度不同，此可能部分解释了中老年糖尿病患者胰岛功能的异质性。