大肠癌组织中SOX4蛋白的表达变化及意义

目的观察SOX4蛋白在大肠癌组织中的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化SP法对大肠正常黏膜及原发大肠癌组织中的SOX4蛋白进行检测。结果 SOX4蛋白在大肠癌组织中的表达水平显著高于大肠正常黏膜组织(P<0.01);有淋巴结转移的大肠癌组织中SOX4蛋白表达水平明显高于无淋巴结转移者(P<0.01);SOX4蛋白表达水平与癌组织浸润肠壁深度有关(P<0.01),而与癌细胞分化程度无关(P>0.05)。结论SOX4蛋白在大肠癌组织中高表达,与大肠癌的浸润转移有关,可作为大肠癌发生发展的预测指标之一。

miRNA-138模拟物转染对人乳腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响及其机制

目的观察miRNA-138模拟物(miRNA-138 mimics)对人乳腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响,并探讨其可能机制。方法选取人高侵袭性乳腺细胞系(MDA-MB-231、MDA-MB-468)及人低侵袭性乳腺癌细胞系(MCF-7)和人正常乳腺上皮细胞系(HBL-100),qRT-PCR法检测微小RNA-138(miRNA-138);取MDA-MB-231并分为两组,miRNA-138 mimics组细胞系以miRNA-138 mimics转染,miR-NC组细胞系以miR阴性对照模拟物(miR-NC)转染,qRT-PCR法检测miRNA-138,Transwell迁移和侵袭实验测算迁移细胞数、侵袭细胞数,Western blotting法检测SOX4蛋白及上皮间质转化(EMT)相关标志物(E-cadherin、Fibronectin、Vimentin蛋白)。结果 MDA-MB-231、MDA-MB-468、MCF-7、HBL-100中miRNA-138相对表达量分别为0.23±0.08、0.42±0.05、0.56±0.11、1.03±0.04,MDAMB-231、MDA-MB-468、MCF-7与HBL-100比较,MDA-MB-231、MDA-MB-468与MCF-7比较,P均<0.05。miRNA-138 mimics组和miR-NC组miRNA-138相对表达量分别为13.35±0.35、0.98±0.05,两组比较,P <0.05。miRNA-138 mimics组和miR-NC组迁移细胞数分别为(210±30)、(340±18)个,侵袭细胞数分别为(100±16)、(190±26)个,两组比较,P均<0.05。miRNA-138 mimics组SOX、E-cadherin、Fibronectin、Vimentin蛋白灰度值分别为0.16±0.08、0.59±0.16、0.42±0.14、0.17±0.09,miR-NC组分别为0.77±0.19、0.12±0.06、1.19±0.21、0.44±0.12,两组比较,P均<0.05。结论 miRNA-138 mimics能够抑制乳腺癌细胞侵袭和迁移,机制可能与其调控SOX4基因抑制乳腺癌细胞EMT有关。

SOX4单克隆抗体的制备及其在肿瘤细胞表达分析中的应用

应用分子生物学技术,构建了含SOX4编码序列的原核表达载体,在大肠杆菌DH5α中获得了GST-SOX4融合蛋白的可溶性表达。应用谷胱甘肽-Sepharose 4B对重组蛋白进行了纯化,利用纯化的融合蛋白免疫小鼠,制备了可特异性识别SOX4的单克隆抗体。通过间接ELISA法鉴定了抗体的效价为1×10-5,Western blotting分析证实了抗体的特异性。结果显示,该抗体可识别细胞内外源性过表达及内源性的SOX4蛋白。在培养细胞系、小鼠不同组织中,SOX4蛋白的表达存在显著的差异。本研究制备的SOX4单克隆抗体具有良好的特异性,为进一步研究SOX4在肿瘤发生中的作用提供了重要的工具。

应用酵母双杂交筛选与hSOX4相互作用的蛋白质

目的:寻找与hSOX4相互作用的蛋白质,为该基因的功能研究提供新的线索.方法:采用酵母双杂交方法,以hSOX4的第1～133位氨基酸SOX4(1-133)和第130～380位氨基酸SOX4(130-380)分别作为诱饵筛选人乳腺文库,经过重复验证排除假阳性以确定阳性克隆.结果:以SOX4(1-133)作为诱饵最终筛出了4个阳性克隆,经测序及生物信息学分析,这4个克隆为同一基因来源:UBE2I(ubiquitin-conjugating enzyme E2I, Ubc9).以SOX4(130-380)为诱饵未能筛出阳性克隆.结论:Ubc9能与SOX4(1-133)发生相互作用,它们的相互作用可能与SOX4的转录调控有关.

转录因子sox4在宣威女性肺腺癌XWLC-05细胞生长和转移中的作用

目的:研究RNA干扰抑制宣威女性肺癌细胞XWLC-05中转录因子sox4的表达对细胞生长、侵袭和迁移能力的影响。方法:从不同类型肺癌细胞株中,通过实时荧光定量PCR法筛选出高表达sox4的宣威女性肺癌细胞XWLC-05作为研究细胞。将sox4-siRNA转染入XWLC-05细胞后,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测sox4表达水平的变化。分别采用MTS法、细胞划痕实验和Transwell细胞侵袭实验分析抑制sox4表达对XWLC-05细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的影响。FCM评估抑制sox4表达对细胞凋亡和细胞周期的影响。结果:转染sox4-siRNA的实验组细胞在转染后24h时与空白对照组和阴性对照组相比,sox4mRNA及蛋白表达水平差异均无统计学意义(P>0.05);转染后48h和72h时与空白对照组和阴性对照组相比,sox4mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。转染sox4-siRNA的XWLC-05细胞的增殖活性与空白对照组和阴性对照组相比,差异均无统计学意义(P值分别为0.059和0.113),而其迁移能力和侵袭能力却明显低于空白对照组(P值均为0.000)和阴性对照组组(P值分别为0.023和0.000)。转染sox4-siRNA的XWLC-05细胞的凋亡率明显高于空白对照组和阴性对照组(P值均为0.000),但sox4-siRNA转染组的细胞增殖指数与空白对照组和阴性对照组相比,差异均无统计学意义(P值分别为0.168和0.225)。结论:转录因子sox4可能通过抑制凋亡并促进肿瘤细胞的迁移和侵袭能力,在宣威女性肺癌的生长和转移中发挥作用。

肺腺癌组织中miR-206的表达及其对肺腺癌细胞迁移侵袭的影响

目的研究miR-206在人肺腺癌组织中的表达情况，探讨miR-206是否通过下调SOX4影响肺腺癌细胞系（A549）细胞的侵袭。方法收集94例肺腺癌组织标本及癌旁正常肺组织，通过实时荧光定量PCR（RT—PCR）检测各组组织中与肺腺癌相关的miR-206、miR-21、miR-34、miR-78、miR-138、miR-32、SOX4mRNA的表达情况，Pearson相关分析检验miR-206表达量与SOX4的相关性；免疫印迹法检测两组标本中SOX4的表达情况，进一步在细胞实验中，通过转染miR-206mimic和miR-NC至离体培养的A549细胞中，免疫印迹法检测A549细胞中MMP-2、MMP-9、SOX4表达情况，划痕试验和Transwell法观察细胞迁移侵袭情况，利用荧光素酶素试验验证SOX4是miR-206的靶基因；再通过转染过表达SOX4的质粒至A549细胞，检测A549细胞中MMP-2、MMP-9、SOX4的表达情况，划痕试验和Transwell法观察细胞迁移侵袭情况。结果相比于正常肺组织，miR-206、miR-21在肺腺癌组织中的表达降低（P〈0．01）；miR-34、miR-378、miR．138、miR-32的表达在两组之间没有明显区别；肺腺癌组织中SOX4mRNA的表达增加（P〈0．01）；miR-206与SOX4mRNA的表达量成负相关（r=-0．344，P〈0．01）。在细胞实验中，相比于miR—NC组，转染miR-206mimic后，A549细胞中MMP-2、MMP-9、SOX4的表达减少（P〈0．05），A549细胞的迁移侵袭减少（P〈0．01）；荧光素酶试验结果显示，miR-206能降低SOX4—3-UTR质粒的荧光素活性（P〈0．05）；转染过表达SOX4质粒后，相比于miR-206＋空质粒组，A549细胞中MMP-2和MMP-9表达增加（P〈0．05），细胞的迁移侵袭增加（P〈0．01）。结论在肺腺癌组织中，miR-206低表达；miR-206可以通过下调SOX4从而抑制A549的迁移和侵袭。