川续断总皂苷调节miR-19a对大鼠骨关节炎软骨细胞SOX9/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨川续断总皂苷调节miR-19a对大鼠骨关节炎软骨细胞SOX9/核因子κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:120只SD大鼠随机分成6组:正常对照组、模型组、地塞米松组(30 mg·kg-1)、川续断总皂苷低、中、高剂量组(10,20,40 mg·kg-1),每组20只。除正常对照组外,其余各组制备大鼠膝关节骨性关节炎模型,地塞米松组、川续断总皂苷各剂量组于造模成功第1天开始给予相应剂量药物灌胃(灌胃体积1.0 ml/100g),持续给药4周,正常对照组和模型组给予等体积生理盐水。给药结束后,进行大鼠关节炎症积分评分,测定机械痛阈(PWT)及热刺激潜伏期(PWTL),实时荧光定量PCR(RT-PCR)法及Western-Blot法测定膝关节软骨细胞miR-19a基因及SOX9、NF-κB基因和蛋白水平。结果:与正常对照组比较,模型组PWTL、PWT评分、miR-19a mRNA表达水平显著降低,关节炎症积分、SOX9、NF-κB mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,地塞米松组、川续断总皂苷各剂量组PWTL、PWT评分、miR-19a mRNA表达水平显著升高,关节炎症积分、SOX9、NF-κB mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05),且川续断总皂苷组给药剂量与各指标变化呈正相关(P<0.05);川续断总皂苷组低、中剂量组与地塞米松组比较,各指标差异有统计学意义(P<0.05)。正常对照组关节软骨结构完整,未见炎症细胞浸润;模型组软骨层明显增厚,软骨细胞疏松紊乱,大量炎症细胞浸润及软骨成纤维细胞增生;地塞米松组及川续断总皂苷高剂量组关节软骨结构较为完整,纤维组织增生、炎症细胞浸润及软骨细胞坏死均减少;川续断总皂苷低、中剂量组具有少量炎症细胞浸润,但软骨结构疏松紊乱,剂量依赖效应明显。结论:川续断总皂苷能明显减轻骨关节炎软骨损伤,减轻骨关节炎软骨炎症反应;其机制与川续断总皂苷可上调miR-19a的表达进而激活SOX9 mRNA和蛋白表达,抑制NF-κB mRNA和蛋白表达有关。

食管鳞癌中Versican、NF-κB和MMP-9的表达及其与临床病理特征的关系

目的:观察食管鳞癌组织中多功能蛋白聚糖(Versican)、核因子-κB(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白及mRNA的表达及其与临床病理特征的关系。方法:采用免疫组化及原位杂交方法检测47例食管鳞癌组织及癌旁正常食管黏膜组织中Versican、NF-κB和MMP-9蛋白及mRNA的表达情况,并分析其与临床病理特征的关系及三者的相关性。结果:食管鳞癌组织中Versican、NFκB和MMP-9蛋白及mRNA表达的阳性率均明显高于癌旁正常食管黏膜组织中的表达(P<0.05);食管鳞癌组织中Versican、NF-κB和MMP-9蛋白及mRNA的高表达与浸润深度越深、淋巴结有转移、TNM分期越晚均有关(P<0.05),与性别、年龄、组织分级均无关;食管鳞癌组织中,Versican、NF-κB和MMP-9三者在蛋白及mRNA水平的表达均呈正相关(P<0.05)。结论:Versican、NF-κB和MMP-9在食管鳞癌中的高表达与肿瘤的生成、浸润及转移密切相关,并且三者具有相关性,为我们进一步探索食管鳞癌浸润转移的潜在机制奠定了基础。

PCSK9介导NF-κB信号通路致小鼠肝脏脂肪变性的机制研究

目的探讨PCSK9对小鼠肝脏脂肪变性的机制。方法以腺相关病毒8.2(adeno-associated virus 8.2,AAV8.2)为载体构建绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和人源PCSK9经尾静脉转染至小鼠肝脏表达。将36只C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分为空白组、GFP组和PCSK9组,每组各12只,共饲养24周。通过苏木精-伊红(hematoxylin eosin,HE)染色观察肝脏组织形态,天狼星红染色(sirius red staining,SRS)观察肝脏纤维化程度,油红O(oil red O,ORO)染色观察肝脏脂质浸润程度。通过酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清PCSK9、白细胞介素(interleukin,IL)-1β,流式细胞术检测肝脏单核细胞胞内炎性细胞因子,包括IL-2、IL-4、γ-干扰素(interferon-γ,INF-γ)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、颗粒酶B(granulase B,GrB)。免疫组化检测肝组织巨噬细胞标志物CD68阳性细胞百分比。Western blot法检测PCSK9干预小鼠单核-吞噬细胞白血病细胞(RAW264.7)细胞胆固醇流出蛋白、清道夫受体相关蛋白、NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果PCSK9组小鼠肝脏组织脂滴总量、脂肪变性、空泡化、纤维化程度明显增加或增强(P<0.001)。免疫组化检测结果显示,PCSK9组巨噬细胞标志物CD68阳性细胞百分比显著高于GFP组及空白组(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,PCSK9组IL-2、TNF-α在CD4+、CD8+细胞亚群百分比明显高于高脂GFP组(P<0.05),而IL-4、INF-γ、GrB在组间各细胞群中比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot法检测结果显示,与空白组比较,PCSK9显著降低LDLR水平,升高ATP结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)、清道夫受体B(scavenger receptor B,SRB或CD36)、Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、磷酸化IκBα激酶(phosphorylated inhibit kappa Bαkinase,p-IκBα)、磷酸化p65蛋白(phosphorylated p65,p-p65)蛋白水平(P<0.05)。结论PCSK9介导NF-κB信号通路致小鼠肝脏脂肪代谢失衡及炎性细胞因子浸润加速了肝脏脂肪变性。

基于NF-κB通路探讨宣肺解痉方治疗支气管哮喘气道重塑机制研究

目的观察宣肺解痉方治疗支气管哮喘的临床疗效,并基于核因子(nuclear factor,NF)-κB通路探讨宣肺解痉方改善气道重塑的作用机制。方法将河北中医药大学第一附属医院呼吸二科收治的68例支气管哮喘慢性持续期患者随机分为2组,对照组患者使用布地奈德福莫特罗粉吸入剂(160μg/4.5μg)治疗,治疗组患者在此基础上加用宣肺解痉方中药汤剂,连续治疗30 d后,比较2组患者临床症状评分、哮喘控制测试(asthma control test,ACT)评分、迷你哮喘生活质量问卷(mini asthma quality of life questionnaire,MiniAQLQ)评分及肺功能、气道重塑血清指标的变化。结果治疗组患者总有效率、ACT与MiniAQLQ评分、肺功能指标、人核因子κB抑制蛋白(nuclear factor-kappa-b inhibitor,IκB)α表达水平均较对照组明显上升(P<0.05);临床症状评分、转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-9与NF-κB p65表达水平均较对照组明显下降(P<0.05)。结论宣肺解痉方可以明显降低支气管哮喘慢性持续期患者血清中TGF-β1、MMP-9表达,提高临床疗效,其作用机制可能与通过下调NF-κB信号通路降低气道炎症水平有关。

基于NF-κB/MMP9信号轴研究姜黄素对卵巢癌细胞增殖的抑制作用

目的探讨核因子-κB(NF-κB)/基质金属蛋白酶9(MMP9)信号轴在姜黄素抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖中的作用,为姜黄素的利用提供依据。方法体外培养卵巢癌SKOV3细胞,随机分为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L姜黄素组和对照组,乳酸脱氢酶(LDH)实验检测姜黄素对SKOV3细胞毒性,MTT法检测卵巢癌SKOV3细胞的增殖情况。根据LDH和MTT实验结果,对10μmol/L、20μmol/L姜黄素组和对照组进行进一步分析,RT-PCR和Western blot检测卵巢癌SKOV3细胞中NF-κB、MMP9 mRNA和蛋白相对表达水平。结果随着剂量的增加,姜黄素对SKOV3细胞的毒性增强,并具有剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,随着剂量的增加,姜黄素可以显著降低卵巢癌SKOV3细胞的存活率,并具有剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。姜黄素可以显著降低SKOV3细胞中NF-κB和MMP9 mRNA相对表达水平,降低SKOV3细胞中p-NF-κB和MMP9蛋白表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论姜黄素能够有效抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖,NF-κB/MMP9信号轴在此过程中起到重要的调节作用。

miR-9-5p通过SIRT1/NF-κB通路促进胰腺癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨miR-9-5p通过调控SIRT1及NF-κB表达对胰腺癌细胞(PANC-1)凋亡相关基因Caspase-3表达的影响。方法使用miR-9-5p mimic慢病毒转染人胰腺癌PANC-1细胞建立稳转株(mimic组),空载体转染作为阴性对照组(NC组),以未处理的PANC-1细胞作为空白对照组(空白组)。采用qRT-PCR检测PANC-1细胞中miR-9-5p、SIRT1及Caspase-3 mRNA的表达水平;Western Blot检测SIRT1、NF-κB通路相关蛋白及Caspase-3蛋白表达量;ELISA检测细胞裂解液中SIRT1及Caspase-3蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验明确miR-9-5p和SIRT1的靶向关系;Pearson相关分析确定miR-9-5p、SIRT1及Caspase-3 mRNA表达的相互关系。结果mimic组miR-9-5p mRNA表达较对照组明显升高,结果有统计学意义,提示转染成功。与空白组及NC组相比,mimic组SIRT1 mRNA及蛋白表达水平下调(P<0.01),p-NF-κB p65与NF-κB p65上调(P<0.01),Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平上调(P<0.01)。双荧光素酶报告基因显示miR-9-5p可抑制野生型SIRT1细胞的荧光活性,miR-9-5p可靶向调控SIRT1的表达;Pearson相关分析发现miR-9-5p和SIRT1的表达水平呈负相关(r=-0.849,P<0.05);miR-9-5p和Caspase-3的表达水平呈正相关(r=0.796,P<0.05)。结论过表达miR-9-5p可促进PANC-1细胞凋亡相关基因Caspase-3的表达,其机制可能与靶向调控SIRT1继而调节NF-κB通路有关,这将为胰腺癌的诊断及治疗提供新的思路。

抑制NF-_κB对鼻咽癌细胞CNE-2中MMP-9表达的影响

目的 为探讨高转移性和高复发性的鼻咽癌中ＭＭＰ－９的表达及ＮＦ－κＢ抑制剂ＰＤＴＣ对其表达的影响。方法 采用常规培养的鼻咽癌细胞ＣＮＥ－２，通过流式细胞仪检测ＣＮＥ－２中ＭＭＰ－９的表达及核因子κＢ抑制剂ＰＤＴＣ对其表达的影响。结果 ＣＮＥ－２中有高表达的ＭＭＰ－９，ＰＤＴＣ可有效抑制其ＭＭＰ－９的表达。结论 ＭＭＰ－９在肿瘤转移过程中起重要作用，抑制ＮＦ－κＢ和ＭＭＰ－９可抑制肿瘤转移。

Thioredoxin domain-containing protein 9 protects cells against UV-B-provoked apoptosis via NF-κB/p65 activation in cutaneous squamous cell carcinoma

Cutaneous squamous cell carcinoma(cSCC),a type of non-melanoma skin cancer(NMSC),is the most common malignancy worldwide.Thioredoxin(TXN)domain-containing protein 9(TXNDC9)is a member of the TXN family that is important in cell differentiation.However,the biological function of this protein in cancer,particularly cSCC,is still unknown.In the present study,our experiments revealed the protective effects of TXNDC9 on UV-B-irritated cSCC cells.The initial findings showed that TXNDC9 is significantly upregulated in cSCC tissue and cells compared to normal skin tissue and keratinocytes.UV-B radiation robustly induces the expression of TXNDC9,and UV-B-induced cSCC cell death is boosted by TXNDC9 deficiency.Moreover,cSCC cells lacking TXNDC9 displayed attenuated activation of the NF-κB pathway.Additional studies by inhibiting TXNDC9 confirmed this finding,as TXNDC9 deficiency attenuated UV-B radiation-induced translocation of NF-κB p65 from the cytoplasm to the nucleus of cSCC.In conclusion,our work demonstrates the biological roles of TXNDC9 in cSCC progression and may provide a novel therapeutic target to treat cSCC in the future.

参苓白术散调控TLR4/NF-κB通路抑制LPS诱导心肌细胞炎性损伤的机制

目的基于Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路探讨参苓白术散含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导H9C2心肌细胞炎性损伤的调控机制。方法将分化完全的H9C2心肌细胞分为空白血清组、模型组、参苓白术散含药血清组、TLR4抑制剂(TAK-242)组,每组6个复孔。除空白血清组外,其余各组以10μg·mL^(-1) LPS处理细胞,构建心肌细胞炎症损伤体外模型。空白血清组、模型组及TAK-242组以10%空白血清进行培养,参苓白术散含药血清组用10%含药血清培养,均培养24 h。采用CCK-8法测定各组细胞增殖情况;采用ELISA法及免疫荧光法检测细胞白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量及蛋白表达水平;采用Western blot法检测TLR4、NF-κB、NF-κB抑制蛋白α(degradation of proteinκB-α,IκBα)蛋白表达情况。结果CCK-8法结果发现,10%参苓白术散含药血清对细胞增殖无抑制作用。与空白血清组比较,模型组细胞的TNF-α、IL-1β含量及荧光表达量明显增高(P<0.01),TLR4、NF-κB、Iκ-Bα蛋白表达明显上调(P<0.01)。与模型组比较,参苓白术散含药血清组IL-1β、TNF-α含量显著降低(P<0.01),TLR4、NF-κB、IκBα蛋白表达明显下调(P<0.01)。结论参苓白术散含药血清能抑制LPS诱导的心肌细胞炎性反应,其作用机制可能与调控TLR4/NF-κB通路,下调细胞炎症因子TNF-α、IL-1β表达有关。

鲤鱼中Sox9b基因的克隆和表达

Sox9基因是一个重要的转录调控因子,参与性别决定及软骨等多种组织和器官的发育过程。本研究利用简并引物扩增鲤鱼基因组DNA,首次发现在鲤鱼中存在两种形式的Sox9基因。二者在保守盒区编码的氨基酸序列相同,并都存在一个内含子,但内含子序列差异很大,分别长704bp和616bp。在此基础上采用RACE技术克隆了鲤鱼Sox9b基因的5’端和3’端,通过拼接获得了2447bp 的全长cDNA序列,编码428个氨基酸。其中96-174位共79个氨基酸为HMG保守盒。将鲤鱼Sox9b基因与三刺鱼等九种动物的氨基酸序列相比较发现,它们的同源性高达75%以上,显示Sox9 基因在进化中较保守。应用半定量RT-PCR技术对成体鲤鱼不同组织中Sox9b基因的表达进行了分析,结果表明该基因广泛表达,尤以脑及精巢中表达最为丰富。

山柰酚通过下调NF-κB信号通路减轻猪源甲型H9N2流感病毒所致小鼠急性肺损伤

目的:探讨山柰酚是否通过下调转录因子NF-κB信号通路的表达而保护感染猪源甲型H9N2流感病毒引起急性肺损伤的小鼠。方法:猪源甲型H9N2流感病毒感染BALB/c小鼠建立急性肺损伤模型,山柰酚干预后检测肺湿重与干重比,观察肺组织的病理学变化,检测支气管肺泡灌洗液内炎性细胞数量以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β)含量同时检测肺组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)和髓过氧化物酶(MPO)活性以及丙二醛(MDA)含量,Western blot检测小鼠肺内NF-κB P65的表达,ELISA检测小鼠肺组织匀浆细胞核提取物中NF-κB P65和NF-κB P50的核转位。结果:山柰酚能降低小鼠死亡率,改善肺组织的病理学变化和肺水肿程度,并能降低肺内巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞等炎性细胞的数量同时降低TNF-α、IL-6、IL-1β和MDA的含量,抑制MPO的活性并升高SOD的活性。另外,山柰酚可以下调NF-κB P65的表达增加细胞核提取物中NF-κB P65和NF-κB P50的核转位。结论:山柰酚通过下调NF-κB信号通路的表达从而降低猪源甲型H9N2流感病毒所致急性肺损伤小鼠的炎症程度和氧化应激损伤,最终减轻流感病毒所致的急性肺损伤。

NF-κB信号通路介导AngⅡ诱导THP-1巨噬细胞表达MMP-9

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人单核/巨噬细胞(THP-1细胞)基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的机制。方法:用0.1μmol/L佛波酯(PMA)作用48h,诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞后,随机分为4组:(1)PMA组,即对照组;(2)PMA+AngⅡ组(10-7mol/L,1h);(3)PMA+AngⅡ+2-硫代氨基甲酸吡咯烷组[PDTC(10μmol/L,30min)];(4)PDTC组。用Western blotting蛋白印记技术分别检测总蛋白MMP-9及磷酸化核转录因子-κBp65(NF-κBp65)的变化,用RT-PCR检测MMP-9 mRNA表达的变化。结果:与对照组相比,AngⅡ诱导THP-1巨噬细胞磷酸化NF-κBp65增加(1.02±0.10,P<0.05),MMP-9蛋白量也增加(1.06±0.11,P<0.05),MMP-9 mRNA表达上调(1.22±0.08,P<0.05),而使用NF-κB的抑制剂PDTC后磷酸化NF-κBp65(0.99±0.12,P<0.01)减少,MMP-9表达明显受到抑制(1.04±0.14,P<0.01),MMP-9 mR-NA表达下调(0.90±0.06,P<0.01)。结论:NF-κB信号转导途径是AngⅡ诱导THP-1巨噬细胞表达MMP-9的重要途径之一。

丹皮酚通过抑制NF-κB信号通路下调MMP-9的表达改善心梗后大鼠的心室重构

目的探讨丹皮酚对大鼠心肌梗死后,NF-κB、MMP-9表达的影响。方法将结扎左冠状动脉前降支后24 h的Wistar大鼠随机分为模型组、丹皮酚[4、6、8 mg/(kg·d)]组、卡托普利组及假手术组。给药4周后。测量各组大鼠心/体比,采用Western-blot法检测各组大鼠左室后壁心肌组织NF-κB-P65、MMP-9的表达。结果与假手术组比较,模型组心/体比明显增加(P<0.05),NF-κB-P65、MMP-9的表达显著升高(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,丹皮酚[4、6、8 mg/(kg·d)]组、卡托普利组心/体比明显降低(P<0.05),NF-кB-P65、MMP-9的表达显著降低(P<0.05)。结论心梗后心室重构过程,NF-кB-P65、MMP-9的表达增加,共同参与了心室重构,丹皮酚通过抑制NF-кB-P65,下调MMP-9,逆转心梗后的心室重构。

桦褐孔菌多糖通过PI3K/Akt/NF-κB/MMP-9抑制哮喘小鼠气道重构

目的:探讨桦褐孔菌多糖(PIO)对哮喘气道重构的作用以及可能的作用机制。方法:40只雌性BALB/c小鼠随机分成对照组、模型组、桦褐孔菌多糖低剂量组(PIO-100)、桦褐孔菌多糖高剂量组(PIO-200)。体外卵清蛋白(OVA)诱导建立哮喘小鼠模型,支气管肺泡灌洗液(BALF)内细胞Diff-quik染色后观察细胞总数和各分类细胞数。肺组织切片HE染色和Masson染色观察肺部炎症情况。末次激发后检测小鼠气道高反应性,ELISA方法检测PIO对BALF中白细胞介素-4(IL-4)、IL-5、IL-13和MMP-9表达的影响。Western blot方法检测PI3K、Akt、NF-κB以及MMP-9表达水平的变化。结果:与对照组相比,模型组中炎症细胞计数、IL-4、IL-5和IL-13表达升高,p-PI3K、p-Akt和MMP-9的表达以及NF-κB p65核转位增高(P<0. 05); PIO干预后,炎症细胞数、IL-4、IL-5和IL-13的表达明显下降,p-PI3K、p-Akt和MMP-9的表达以及NF-κB p65核转位明显降低(P<0. 05)。结论:PIO通过调控PI3K/Akt/NF-κB/MMP-9信号通路发挥对哮喘小鼠气道重构的抑制作用。

骨肉瘤组织中MICA、MMP-9和NF-κB蛋白的表达及相关性

目的探讨骨肉瘤组织中MHCⅠ类链相关蛋白A(MHC class Ⅰ chain-related A,MICA)、MMP-9和NF-κB的表达及相互间的关系,为研究骨肉瘤组织中MICA蛋白表达和脱落机制提供组织学依据。方法应用免疫组织化学方法检测66例骨肉瘤、11例骨母细胞瘤,8例骨化性纤维瘤和6例正常骨组织中MICA蛋白的表达情况,并检测66例骨肉瘤组织中MMP-9和NF-κB蛋白的表达情况。结果(1)MICA蛋白在骨肉瘤组织、骨母细胞瘤、骨化性纤维瘤和正常骨组织的表达率分别为51.6%(34/66)、9%(1/11)、0(0/8)、0(0/6),骨肉瘤组织中MICA表达与骨母细胞瘤(P=0.01)、骨化性纤维瘤(P<0.01)和正常骨组织(P<0.05的差异有显著性。(2)骨肉瘤组织中MMP-9和NF-κB表达率分别为55%(36/66)和73%(48/66);NF-κB与MICA(r=0.373,P<0.01)和MMP-9(r=0.536,P<0.01)的表达呈正相关关系。结论MICA蛋白可作为骨肉瘤诊断的分子标志物;NF-κB可能参与MICA蛋白表达和脱落的分子机制,NF-κB可作为骨肉瘤免疫治疗的候选靶点。

NIBP在结肠癌细胞中通过调控NF-κB信号通路促进MMP2、MMP9表达

目的:观察慢病毒介导的NIBP(NIK and IKKβbinding protein)基因转染结肠癌细胞株HT29后,细胞迁移能力以及细胞内p65、MMP2、MMP9 m RNA和蛋白表达的变化。方法:分为未经转染的HT29细胞(HT29组)、转染空载的HT29细胞(HT29-NC组)和转染NIBP的HT29细胞(HT29-NIBP稳转组)。采用Transwell试验检测细胞迁移能力;Q-PCR法检测NIBP、p65、MMP2、MMP9的m RNA表达;Western Blot法检测NIBP、p65、磷酸化p65(p-p65)的蛋白表达;ELISA法检测MMP2、MMP9的分泌。结果:高表达NIBP能增强结肠癌细胞株HT29的迁移能力,并主要通过增加p-p65从而促进MMP2、MMP9 m RNA及蛋白表达(P<0.05)。结论:NIBP可能通过激活NF-κB信号通路促进结肠癌细胞分泌MMP-2、MMP-9,从而促进结肠癌细胞的侵袭转移。

NF-κB抑制剂PDTC对人白血病Jurkat细胞凋亡及MMP-9表达的影响

目的研究NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对Jurkat细胞凋亡及基质金属蛋白酶-9(matrx metallo preteinases-9,MMP-9)基因表达的影响,探讨转录因子NF-κB与MMP-9在白血病发生发展及浸润转移过程中的作用及2者之间的关系。方法取处于对数生长期的Jurkat细胞随机分为6组,包括对照组(培养基中不含PDTC),试验组(培养基中分别含有50、100、150μmol/L PDTC、1μg/m L VCR、1μg/m L VCR+150μmol/L PDTC);MTT法测定PDTC对Jurkat细胞增殖的抑制作用;使用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测PDTC联合长春新碱(vincristine oncovin,VCR)诱导Jurkat细胞凋亡的情况;使用半定量RT-PCR检测Jurkat细胞中MMP-9基因的表达。结果不同浓度的PDTC(50、100、150μmol/L)作用不同时间(12~48 h)后对Jurkat细胞的增殖抑制率随PDTC浓度的增高及作用时间的延长而逐渐增加(P<0.05),但在PDTC处理48 h后,细胞增殖抑制率无明显增加。在不同浓度的PDTC分别处理细胞48 h后,随着PDTC浓度增高,Jurkat细胞凋亡率逐渐增加,各实验组凋亡率显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与单纯VCR组相比,VCR+PDTC组Jurkat细胞凋亡率显著增高,差异有统计学意义(P<0.05),显示PDTC可以增强VCR诱导的Jurkat细胞凋亡作用。不同浓度的PDTC分别处理各组细胞48 h,RT-PCR结果显示各实验组细胞MMP-9基因表达水平与对照组相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论白血病细胞中存在MMP-9基因高表达,导致细胞基底膜及细胞外基质降解,促进了白血病的浸润和转移,并引起化疗耐药,而这一过程可被NF-κB抑制剂PDTC所抑制,为临床上白血病的治疗探索了一条新的途径。

NF-κB及MMP-9在1型糖尿病模型INS2^(AKITA)小鼠颈动脉中的表达及意义

目的探讨细胞核因子-κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在1型糖尿病模型INS2AKITA小鼠颈动脉中的表达及意义。方法取INS2AKITA雄性小鼠和同窝出生的野生型C57BL/6雄性小鼠各10只,分别作为1型糖尿病模型组和正常对照组。在两组小鼠第16周龄时麻醉处死,处死前检测空腹血糖、测量体重。处死后取双侧颈动脉标本,分别行HE染色及免疫组化,检测颈动脉内皮NF-κB,MMP-9的表达;采用EMSA检测颈动脉组织NF-κB核蛋白结合活性,Rea-ltime PCR检测颈动脉组织MMP-9mRNA的表达。结果与对照组比较,1型糖尿病模型组血糖明显增高(P<0.001),体重明显减轻(P<0.05)。HE染色结果显示两组均未见内膜明显增生。INS2AKITA小鼠颈动脉内皮NF-κB和MMP-9表达明显高于对照组,NF-κB核蛋白结合活性明显增高(P<0.01)。与对照组比较,1型糖尿病小鼠颈动脉MMP-9mRNA表达明显增强(P<0.05)。结论 1型糖尿病模型INS2AKITA小鼠造模后16周颈动脉内皮无增生,但NF-κB、MMP-9表达明显增强,NF-κB核蛋白结合活性及MMP-9mRNA表达明显增高,可能是反映1型糖尿病颈动脉粥样硬化早期改变的指标。

COPD患者外周血SIRT1及NF-KB、MMP-9的表达水平分析

探讨COPD患者外周血沉默信息调节因子相关酶1(SIRT1)及核因子κB(NF-κB)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平及作用。比较患者SIRT1、NF-κB、MMP-9等水平情况。结果显示患者血清SIRT1水平随病情加重而降低,患者血清NF-κB、MMP-9水平随病情加重而增高。COPD稳定期组和急性加重组患者SIRT1mRNA和蛋白相对表达量明显低于对照组;NF-κB、MMP-9mRNA和蛋白相对表达量明显高于对照组。实验证明COPD患者SIRT1表达水平降低与肺功能下降相关,可作为COPD潜在标志物;SIRT1可能通过对NF-κB、MMP-9的调节作用来调控COPD的发生与发展。

芝麻素对代谢综合症大鼠心肌NT、NF-κB和MMP-9蛋白表达的影响

目的探讨芝麻素改善代谢综合症(metabolic syndrome,MS)大鼠心肌重构的作用机制。方法采用两肾一夹术伴高脂高糖饮食制备MS大鼠模型,灌服不同剂量芝麻素(120、60、30 mg.kg-1.d-1)8周后处死动物,称全心湿重和左心室湿重,测血清总抗氧化能力(total antioxidant capability,T-AOC),Western blot检测心肌硝基酪氨酸(nitroty-rosine,NT)、核因子-κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达,HE和Masson染色观察心肌病理变化并测定胶原容积分数。结果与模型组相比,60、120 mg.kg-1芝麻素组全心湿重降低,T-AOC升高,心肌NT、NF-κB和MMP-9蛋白表达降低。120 mg.kg-1芝麻素组左心室湿重和胶原容积分数降低,心肌病理损伤明显改善。结论芝麻素具有改善MS大鼠心肌重构的作用,其机制除抗氧化应激外,还与下调NF-κB和MMP-9蛋白表达有关。