血清SOX9蛋白对胃癌的诊断及其与临床病理特征的相关性

目的探讨血清SOX9蛋白水平诊断胃癌的应用价值及其与胃癌临床病理特征的相关性。方法选取2015年1月至2017年12月湖州市中心医院收治的胃癌患者85例,另收集同期慢性胃炎患者65例和健康体检者63例作为对照组。三组的血清SOX9蛋白水平检测采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法,收集三组的血清学资料以及胃癌患者的临床资料,并绘制受试者工作特征曲线(ROC),计算血清SOX9蛋白水平对胃癌的诊断价值,分析血清SOX9蛋白水平与胃癌患者临床病理特征的相关性。结果胃癌组的血清SOX9蛋白水平为76.8(48.1,84.3)ng/mL,慢性胃炎对照组的血清SOX9蛋白水平为33.7(27.0,44.0)ng/mL,健康对照组的血清SOX9蛋白水平15.5(9.9,25.9)ng/mL,组间差异有统计学意义(P<0.05)。血清SOX9蛋白水平区分胃癌与非胃癌的ROC曲线下面积(AUC)为0.897(95%CI:0.851~0.944)。以SOX9蛋白水平46.0 ng/mL为临界值诊断胃癌的敏感度为81.2%,特异度为88.3%。血清SOX9蛋白水平与肿瘤分期、分化程度、淋巴结转移及浸润深度等临床病理特征具有相关性(P<0.05)。结论血清SOX9蛋白可以作为胃癌的辅助诊断标志物,对胃癌患者预后评估有潜在应用前景。

SOX9蛋白、K-Ras蛋白在胃癌组织中表达及临床意义

目的:探讨SOX9蛋白和K-Ras蛋白在胃癌组织中表达及临床意义。方法:选择义乌市中心医院于2016年1月至2020年1月行手术且经病理检查证实为胃癌患者120例为观察对象,取癌组织及癌旁组织。采用免疫组织化学法检测SOX9蛋白和K-Ras蛋白阳性表达;采用Western Blot检测SOX9蛋白和K-Ras蛋白表达灰度值。比较癌组织与癌旁组织SOX9蛋白和K-Ras蛋白阳性率,不同病理特征SOX9蛋白和K-Ras蛋白阳性率,及癌组织与癌旁组织SOX9蛋白和K-Ras蛋白表达灰度值。结果:癌组织SOX9蛋白阳性率[69.17%(83/120)]和K-Ras蛋白阳性率[58.33%(70/120)]高于癌旁组织[15.00%(18/120)和11.67%(14/120)](χ2=72.227、57.436,均P<0.05)。不同性别、年龄、分化程度和TNM分期SOX9蛋白表达阳性率和K-Ras蛋白表达阳性率比较差异无统计学意义(均P>0.05);淋巴结转移患者SOX9蛋白表达阳性率(92.45%)高于无淋巴结转移患者(50.75%)(χ2=24.136,P<0.05)。淋巴结转移患者K-Ras蛋白表达阳性率(79.25%)高于无淋巴结转移患者(41.79%)(χ2=17.079,P<0.05)。癌组织SOX9蛋白表达灰度值(0.87±0.15)和K-Ras蛋白表达灰度值(0.56±0.13)高于癌旁组织(0.12±0.03)和(0.10±0.03)(t=53.079、37.769,均P<0.05)。结论:SOX9蛋白和K-Ras蛋白在胃癌组织中高表达,且与淋巴结转移密切相关。

软骨肉瘤相关基因Sox9(siRNA)表达质粒的构建鉴定以及对肿瘤细胞生长和凋亡的影响

目的:利用小干扰阻断目的基因的原理将构建的目的基因Sox9的pSilencer3,1-H1 neo siRNA(small interfering RNA)表达质粒转染人体软骨肉瘤细胞HTB-94,观察目的基因被阻断后肿瘤细胞目的基因的表达、肿瘤细胞生长和凋亡所受到的影响。方法:设计并合成Sox9(siRNA),鉴定后将其转染HTB-94肿瘤细胞,观察肿瘤细胞的Sox9基因的mRNA和蛋白表达的变化,以及被转染肿瘤细胞的生长曲线和肿瘤细胞凋亡的情况。结果:Sox9(siRNA)的插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致,被转染的HTB-94Sox9基因的mRNA的表达量下降了35.4%,蛋白的表达量下降了31.3%;Sox9(siRNA)转染HTB-94细胞24h和96h的光吸收值分别为0.146±0.037和0.412±0.036,而正常对照细胞组两个同样时间段的光吸收值分别为0.152±0.0367和0.607±0.029。其中细胞生长增殖速度的差异为32.0%,肿瘤细胞的生长明显受到抑制;Sox9(siRNA)转染HTB-94细胞的干扰组细胞凋亡率为39.2%;而未经干扰的HTB-94肿瘤细胞的细胞凋亡率为0.1%。结论:经过设计合成的Sox9(siRNA)表达质粒可以稳定转染人体软骨肉瘤细胞HTB-94肿瘤细胞,被Sox9(siRNA)表达质粒转染的人体软骨肉瘤细胞HTB-94肿瘤细胞Sox9基因的mRNA和蛋白的表达都受到抑制,同时肿瘤细胞的生长繁殖也受到明显抑制,肿瘤细胞的凋亡明显增加。

Sox蛋白在软骨内成骨中的作用

颅颌面骨成骨的方式有膜内成骨和软骨内成骨两种。Sox9、L-Sox5和Sox6在软骨组织的发生和发育中具有十分重要的作用。Sox9促进间充质细胞凝集,L-Sox5和Sox6使间充质细胞进一步分化为成软骨细胞。Sox9具有转录激活结构域,直接调控转录,L-Sox5和Sox6缺少转录激活结构域,可能是作为构型蛋白,促成蛋白质—DNA复合体的形成,起到增强转录的作用。本文主要对这3种Sox蛋白在软骨内成骨中的作用及其机制进行综述。

SOX9基因调控雄性哺乳动物生殖活动的研究进展

SRY-盒包含蛋白9(Sex determining region Y-box 9,SOX9)基因属于SRY-盒包含蛋白(SRY-type HMG box,SOX)基因家族中的重要成员,是继Y染色体性别决定基因(Sex-determining region of Y chromosome,SRY)后发现的又一重要的性别决定基因。近些年研究表明,SOX9基因在哺乳动物生殖活动中发挥着重要的调控作用,与性别分化、精子发生等生殖活动密切相关。本文主要从SOX9基因的结构特点和在胚胎期及生后哺乳动物生殖活动中的作用机制等方面的研究进展进行综述,旨在为进一步深入研究其在调控哺乳动物生殖活动中的分子作用机制及与其他基因的联合调控机制提供参考。

沉默GCN5或SOX9基因对Thy-1肾炎大鼠肾组织中TGF-β1生成的影响

目的:研究沉默大鼠肾组织中通用控制核苷酸合成5(general control nonderepressible 5,GCN5)基因、性别决定区Y框蛋白9(SRY related HMG box-9,SOX9)基因对Thy-1肾炎(Thy-1 nephritis,Thy-1N)大鼠肾组织内转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)生成的影响。方法:分别用慢病毒(lentivirus,LV)包装GCN5和SOX9发夹状小干扰RNA(shRNA),即制备LV-shGCN5和LV-shSOX9重组病毒。然后行大鼠肾动脉灌注术将LV-shGCN5和LV-shSOX9分别导入大鼠肾脏,再经尾静脉注射兔抗大鼠胸腺细胞抗血清(anti-thymocyte serum,ATS)复制Thy-1N模型。在注射ATS后3 h,取大鼠肾组织,用RTPCR和Western blot检查各组大鼠肾组织中GCN5和SOX9的mRNA及蛋白表达水平,以验证干扰效果及GCN5、SOX9对TGF-β1产生的影响。结果:利用肾动脉灌注术将LV-shGCN5或LV-shSOX9重组病毒导入大鼠肾组织后,不仅能有效沉默相应的靶基因,而且还能下调TGF-β1的表达。结论:沉默大鼠肾组织中GCN5或SOX9基因后能显著抑制Thy-1N大鼠肾内TGF-β1的生成。

SOX9和ETS-1蛋白在人毛囊隆突区迁出细胞中的表达及意义

目的观察SOX9和ETS-1蛋白在人毛囊隆突区迁出细胞中的表达及定位,探讨其在白癜风毛囊周围复色机制中的意义。方法取6份正常头皮组织,显微镜下分离出单个毛囊并体外培养人毛囊神经嵴干细胞,镜下观察毛囊隆突区干细胞迁出和生长情况,免疫荧光染色法检测SOX9、ETS-1蛋白表达情况。结果体外培养的人单个毛囊的隆突区可迁出神经嵴干细胞,迁出神经嵴干细胞传代的长满时间和长满密度分别为[(3.17±1.17)d]、[(2.79±0.48)×10^(6)个/mL];SOX9和ETS-1蛋白在人毛囊隆突区迁出神经嵴干细胞均呈阳性表达,且均定位于细胞核。结论人毛囊隆突区存在神经嵴干细胞,SOX9、ETS-1可能是其标志物。

SOX9在胃癌组织中的表达及与预后的关系

目的探讨蛋白质分子生物标记物SOX9在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征及预后的关系。方法回顾性分析2004．2006年浙江省人民医院收治的112例胃癌患者的临床资料．通过免疫组织化学（IHC）法检测112例原发胃癌组织及70例癌旁非肿瘤组织中SOX9蛋白表达情况。结果70例癌旁非肿瘤胃黏膜上皮中仅有5例（7．1％）为SOX9低表达；112例胃癌组织中94例（83．9％）出现不同程度的表达，其中SOX9高表达51例（45．5％）。胃癌组织中SOX9的表达与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小及其分化程度无关（P〉0．05），而与肿瘤的Lauren分型（P〈0．05）、浸润深度（P〈0．01）、淋巴结转移（P〈0．05）、远处转移（P〈0．05）及肿瘤TNM分期（P〈0．05）有关。Kaplan-Meier生存分析显示．SOX9高表达患者的5年生存率显著低于SOX9低表达者（29．4％比49．2％．P=0．031）。多因素cox回归分析显示，分化程度（P=0．046）、浸润深度（P=0．001）和远处转移（P〈0．01）是影响胃癌患者预后的独立因素．而SOX9的高表达（P=0．948）不能作为影响胃癌预后的独立因素。结论胃癌组织中SOX9蛋白的表达与胃癌生长发展和侵袭转移有关并对胃癌患者预后有影响．但不是影响预后的独立因素。

子宫内膜癌患者癌组织中miR-136-5p、SOX9的表达水平及临床意义

目的 研究微小RNA(miR)-136-5p与性别决定区Y框蛋白9(SOX9)在子宫内膜癌(EC)患者癌组织中的表达水平、临床意义。方法 收集2018年3月至2020年3月108例在杭州市第一人民医院进行手术治疗的EC患者癌组织与癌旁组织。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法测定组织中miR-136-5p、SOX9相对表达量;分析miR-136-5p、SOX9表达的相关性分析;分析EC癌组织miR-136-5p与SOX9表达与生存的关系;分析EC患者预后的影响因素。结果 EC癌组织miR-136-5p水平低于癌旁组织(P<0.001),SOX9水平高于癌旁组织(P<0.001)。癌组织中SOX9表达率高于癌旁组织(χ^(2)=53.042,P<0.001)。miR-136-5p与SOX9间存在结合位点,且两者在EC患者癌组织中呈负相关(r=-0.325,P<0.001)。浸润深度、FIGO分期、组织分化程度、淋巴结转移与癌组织中miR-136-5p与SOX9有关(P<0.001)且为EC的影响因素。癌组织miR-136-5p高表达利于EC患者生存(χ^(2)=6.142,P=0.013),而SOX9低表达利于EC患者生存(χ^(2)=5.656,P=0.017)。结论 EC患者癌组织中miR-136-5p低表达,SOX9高表达,二者呈负相关关系,且影响患者临床病理特征以及预后。

SD大鼠脊柱侧凸模型构建及凸凹方向应力对骨结构发育的影响

背景:脊柱侧凸是一种发生于脊柱的三维复杂畸形,研究发现聚集蛋白聚糖、Ⅱ型胶原蛋白、Sox9、血管内皮生长因子蛋白等分子机制参与了脊柱侧凸病程,并可能发挥着与力学机制相似的不良作用,但目前缺少对脊柱侧凸发生发展机制的实验性研究。目的:构建SD大鼠脊柱侧凸模型,并探讨凸凹方向应力对骨结构发育的影响。方法:选取6只断乳前SD大鼠进行肩关节离断及鼠尾截断,高笼喂养3个月后进行X射线摄片。采用Mimics软件进行脊柱三维重建,分析不对称张力分布。采用μCT扫描检测骨小梁结构。麻醉处死大鼠后,提取凹侧及凸侧椎体骺软骨,检测聚集蛋白聚糖、Ⅱ型胶原蛋白、Sox9、血管内皮生长因子蛋白的表达水平。结果与结论:(1)6只SD大鼠均成功造模,均出现明显的后凸及左侧胸廓畸形;(2)应力结果显示,椎体承受的应力不对称,凸侧垂直方向的应力显著高于凹侧;(3)Western-Blot检测结果显示,凸侧的聚集蛋白聚糖、Ⅱ型胶原蛋白、Sox9、血管内皮生长因子蛋白的表达水平显著高于凹侧;且相应的凸侧积分吸光度值也显著增高,差异均有显著性意义(P <0.05);(4)凸、凹两侧的骨小梁微结构存在显著的不对称性。与凹侧相比,凸侧的骨体积分数、骨小梁数目显著增高(P <0.05),而骨小梁分离、结构模型指数明显降低(P <0.05);(5)结果表明,凸凹方向的不对称应力可能通过影响相关蛋白表达及骨小梁结构的变化,促进脊柱侧凸的发生发展。

周期性动态压力对海藻酸钠培养间充质干细胞成软骨分化的作用

目的观察延迟性周期性动态压缩应力对立体培养条件下骨髓间充质干细胞成软骨分化的影响,探讨力学因素在软骨分化过程中的作用机制。方法 KM小鼠骨髓间充质干细胞分离,体外培养至第3代,与海藻酸钠混匀制作成海藻酸钠凝胶。根据实验设计,进行7 d的相应的预培养。实验分为4组:空白对照组:普通培养液组,静态培养;实验组:完全成软骨诱导液,后7 d加力培养;单纯诱导组:完全成软骨诱导液,静态培养14 d;阴性对照组:普通培养液,后7 d加力培养。于培养第7和14天分离各组细胞,采用RT-PCR分析SOX9、ROCK1及Col2的表达,应用免疫荧光技术对各组处理前后的Ⅱ型胶原蛋白(Col2)表达进行检测,Image J软件进行图像定量检测。正态计量资料采用均数±标准差表示,组间计量资料采用单因素方差分析,组间多重比较采用SNKq检验法。结果预培养7 d后,实验组SOX9、Col2及ROCK1的mRNA表达与对照组比较有统计学差异(P<0.01)。14 d后,实验组中压力干预组SOX9及Col2的mRNA表达与未受力组比较有统计学差异(P<0.01),ROCK1的mRNA表达与未受力组比较有统计学差异(P<0.01)。免疫荧光显示压力组Col2蛋白表达高于未受力组。结论延迟性周期性动态压缩应力可促进间充质干细胞成软骨分化,ROCK信号通路可能参与有关调控。