乳腺癌MCF-7肿瘤细胞SP亚群初步分析

目的鉴定乳腺癌干细胞系MCF-7中是否包含肿瘤干细胞相关的SP(side popu lation)亚群。方法制备MCF-7细胞悬液,经Hoechst33342和PI染色(其中一组同时加入拮抗剂维拉帕米作为对照),流式细胞仪分析SP亚群。另取贴壁生长的MCF-7细胞,用Hoechst33342和羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)原位染色,荧光显微镜下观察细胞染色情况。结果SP亚群占MCF-7细胞的4%,维拉帕米阻断后减少为0.5%。荧光显微镜下见Hoechst33342阳性细胞约占95%。结论人乳腺癌细胞系MCF-7中存在SP亚群,即提示乳腺癌干细胞的存在;维拉帕米可抑制染料外排而减少SP细胞的比例。

人乳腺癌MCF-7细胞中SP亚群细胞的分离及其生物学行为研究

目的:了解肿瘤干细胞的生物学行为及相关的调控机制。方法:采用干细胞对Hoechst33342染料外排的特性进行MCF-7细胞系肿瘤干细胞的流式分选。并对其增殖、自我更新、分化能力等生物学行为进行研究。还利用流式细胞仪、免疫荧光技术、荧光定量PCR等技术进行了与干细胞生物学行为密切相关的Wnt信号转导通路中相关分子的表达特征研究。结果:MCF-7细胞系中包含SP亚群(side population);且SP细胞具有分化潜能,高增殖能力,及自我更新特性;而且Wnt通路的各种关键分子在该细胞系SP亚群细胞中呈活化状态。结论:MCF-7细胞系的SP亚群可以代表该细胞系的肿瘤干细胞,Wnt通路在该肿瘤细胞系肿瘤干细胞的自我更新等其它生物学行为的调控中起重要作用。

肠癌SW480肿瘤细胞SP亚群分析

目的分选肠癌细胞株SW480中边群细胞(SP)亚群,观察SP细胞是否具有肿瘤干细胞样生物学特性。方法将1×107个/mL对数期生长的SW480细胞进行Hoechest33342和PI染色,80μg/mL维拉帕米阻断,流式细胞仪分选SP细胞。将分选后的SP细胞和非SP细胞,采用MTT法绘制细胞生长曲线和进行细胞克隆形成实验;并将两种细胞接种于裸鼠皮下,观察移植瘤的形成情况。结果 Hoechest33342染色显示:SP细胞亚群的平均含量为(1.43±0.05)%,加入维拉帕米后SP细胞亚群比例减少为(0.01±0.01)%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。细胞生长曲线显示:非SP组细胞生长速度较SP组明显降低,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。克隆形成实验表明,移植第15天后SP细胞克隆体积大,边界平滑,细胞呈巢状隆起生长,结构致密,细胞体积小,平均克隆数为49.33±8.21,显著高于非SP细胞组的31.03±5.29,两组比较差异也有统计学意义(P<0.01)。在移植量为1×105个SP细胞组中有50%小鼠成瘤,而非SP细胞组小鼠均未见明显成瘤(P<0.01)。结论人肠癌细胞株SW480中存在SP亚群细胞,生长曲线和克隆形成实验表明其增殖能力较非SP细胞强;裸鼠成瘤试验提示SP细胞尚需进一步纯化。

肠癌细胞系SW-620中肿瘤干细胞相关SP亚群分析

背景:在某些恶性肿瘤中,SP细胞具有肿瘤干细胞的特性,如人脑瘤、乳腺癌等肿瘤干细胞的研究就是采用了这种方法。目前关于肠癌干细胞的研究尚处于探索阶段,国内外尚无肠癌干细胞分离、鉴定成功的报道。目的:分析肠癌细胞系SW-620中是否包含肿瘤干细胞相关的SP亚群。方法:制备SW-620细胞悬液,经Hoechst33342和PI染色,实验组加入Hoechst33342至终浓度为5mg/L,维拉帕米组同时加入维拉帕米至终浓度5mg/L,流式细胞仪分析SP亚群,共选取3次实验的结果。结果与结论:通过Hoechest33342蓝光和红光双参图,实验组SP细胞亚群位于左下角两种荧光均阴性或很弱的区域,经3次检测,肠癌细胞株SW620中SP比例分别为0.1%,1.0%和0.5%,经维拉帕米阻断后SP细胞比例均为0。提示人肠癌细胞系SW620中存在SP亚群细胞,即提示肠癌干细胞存在的可能;维拉帕米可抑制染料外从排而明显减少SP细胞的比例。

胃癌MKN-28肿瘤细胞系SP细胞亚群初步分析

目的:分析胃癌细胞株MKN-28中是否包含肿瘤干细胞相关的SP(side population)细胞亚群.方法:采用免疫荧光方法检测干细胞标记ABcG2在胃癌细胞株MKN-28的表达;制备MKN-28细胞悬液,经Hoechst33342染色,流式细胞仪分析SP亚群.结果:ABCG2在胃癌细胞系MKN-28中有少量表达,ABCG2阳性细胞约占1.7%.SP亚群占MKN-28细胞的0.25%,维拉帕米阻断后减少为0.05%.结论:人胃癌细胞株MKN-28中存在SP细胞亚群,提示胃癌干细胞的存在.

肠癌SW-620肿瘤细胞SP亚群研究

目的 观察肠癌细胞株SW-620中肿瘤干细胞相关的SP（side population）亚群比例,分选出相关的SP和NSP细胞,并鉴别相关的SP是否具有干细胞某些生物学特性.方法 制备SW-620细胞悬液,经Hoechst33342和PI染色（其中对照组同时加入拮抗剂维拉帕米）,流式细胞仪分析SP亚群.通过流式细胞仪分选出肠癌细胞株SW-620中SP细胞.克隆形成实验和噻唑蓝（MTT）实验检测SP和NSP细胞增殖能力的差异.裸鼠体内成瘤对比实验验证SP细胞和NSP细胞致瘤性.结果 SP亚群占SW-620细胞的1.0%左右,维拉帕米阻断后减少为0.01%左右.流式细胞仪分选出SP细胞7.5×105个,大部分为NSP细胞.克隆形成实验和MTT证实SP细胞和NSP细胞增殖能力有差异.裸鼠体内成瘤实验发现：1×105个SP细胞可以致裸鼠成瘤,1×105个NSP细胞及以下数量级别细胞不能致裸鼠成瘤.结论 人肠癌细胞株SW-620中存在SP亚群细胞,维拉帕米可抑制染料外排而明显减少SP细胞的比例.可以通过流式细胞仪分选出SP细胞,通过克隆形成实验和MTT实验检测SP和NSP细胞增殖能力有差异.裸鼠成瘤对比实验证实SP比NSP细胞更具致瘤性.

人胃癌细胞系HGC-27细胞中SP亚群的初步研究

目的分析人胃癌细胞系HGC-27细胞中肿瘤干细胞相关的SP（sidepopulation）亚群比例，分选出相关的sP和NSP细胞，并鉴别相关的sP是否具有干细胞某些生物学特性。方法制备人胃癌细胞系HGC-27细胞中细胞悬液，经Hoechst33342和PI染色（其中对照组同时加入拮抗剂维拉帕米），流式细胞仪分析相关SP亚群。通过流式细胞仪分选出人胃癌细胞系HGC-27细胞中相关的sP细胞。克隆形成实验和MTY实验检测相关的sP和NSP细胞增殖能力差异。结果SP亚群占HGC-27细胞中的6．00％左右，维拉帕米阻断后减少为0．01％左右。流式细胞仪分选出sP细胞8．5×105个，大部分为NSP细胞。克隆形成实验和MTY实验证实相关的SP细胞和NSP细胞增殖能力有差异。结论人胃癌细胞系HGC-27细胞中存在相关的sP亚群细胞，维拉帕米可抑制染料外排而明显减少sP细胞的比例。可以通过流式细胞仪分选出相关的sP细胞，通过克隆形成实验和MTr实验检测相关的sP和NSP细胞增殖能力有差异。但尚需从分子水平证实胃癌细胞SP细胞相关干细胞特异性。

吉非替尼对人肺腺癌A549干细胞增殖的影响

目的从人肺腺癌A549细胞系分离出SP亚群细胞,并观察吉非替尼对其生长增殖、细胞周期的影响。方法经Hoechst33342和碘化丙啶(PI)染色,流式细胞仪分离出具有干细胞特性的SP亚群。用0～40μmol.L-1浓度的吉非替尼和SP细胞共培养24、48、72h,采用MTT法检测吉非替尼对细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测其对细胞周期分布的影响。结果 SP亚群占A549细胞的1.89%,维拉帕米阻断后减少为0.39%。吉非替尼在0～40μmol.L-1浓度范围内能明显抑制A549细胞的增殖,并存在浓度和时间依赖性。流式细胞仪检测显示吉非替尼抑制A549SP细胞增殖是通过阻滞细胞周期使其停留在G0/G1期实现的。结论 A549细胞中存在SP细胞亚群,吉非替尼抑制A549干细胞的增殖是通过阻滞A549SP细胞于G0/G1期实现的。