冰冻切片应用SP免疫组化染色法的体会

链霉菌亲生物素蛋白-过氧化物酶连接法（streptavidin peroxidase conjugated method,SP法）是美国ZYMED公司于1986年首创的免疫组化方法。我们用SP法研究了SARS冠状病毒（SARS—CoV）S蛋白的功能性受体血管紧张索转换酶2（ACE2）在大鼠内脏尤其在胰腺内外分泌腺的表达，效果满意。现结合我们所做的实验对免疫组化程序中的一些主要技术问题总结如下。

应用SP免疫组化法检测宫颈鳞癌组织中SOX2蛋白表达水平的临床价值分析

目的:观察SOX2蛋白在宫颈鳞癌组织的表达及意义。方法:收集96例宫颈鳞癌组织、75例宫颈CIN组织、44例正常宫颈组织行SP免疫组化法检测,观察SOX2蛋白表达情况,并探讨肿瘤分期、病理分化以及淋巴转移与SOX2-mRNA水平的关系。结果:宫颈鳞癌组织的SOX2-mRNA相对表达量为0.895±0.197明显高于CIN组织(0.453±0.068)和正常宫颈组织(0.218±0.065),差异具有统计学意义(P<0.05)。Ⅱa期宫颈鳞癌组织的SOX2阳性表达率为82.50%,显著高于Ⅰ期的51.79%,低分化宫颈鳞癌组织的SOX2阳性表达率94.44%,显著高于中分化(69.70%)和高分化(51.85%);有淋巴结转移宫颈鳞癌组织的SOX2阳性表达率84.21%,显著高于无淋巴结转移的50.34%,以上差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:SOX2蛋白可能参与宫颈鳞癌的发生、发展中,在了解肿瘤分期。淋巴结转移情况以及预后评估中具有较高的应用价值。

微波免疫组化SP法在长角血蜱体内伯氏疏螺旋体形态研究中的应用

目的 观察长角血蜱体内伯氏疏螺旋体的免疫形态特征。方法 1996年 5月 ,对北京西山采集的羊体表长角血蜱寄生蜱标本行微波免疫组化SP法检测和伯氏疏螺旋体形态观察。结果 光镜下 ,寄生蜱中肠内显示伯氏疏螺旋体菌体数量多且形态多样。螺旋体螺旋波纹呈不规则锯齿形 ,或呈纤细疏螺旋形。短形螺旋体有 3～ 10个疏螺旋 ,而长形螺旋体达 30个以上的疏螺旋。结论 微波抗原修复免疫组化SP法染色 ,蜱中肠标本中伯氏疏螺旋体显示强阳性 ,易于伯氏疏螺旋体的检出和形态观察。

胃癌p53、rasp21和nm23/DNPK的免疫组化研究

目的探讨p53、rasp21和nm23/DNPK的表达在胃癌的发生、浸润和转移中的作用。方法应用免疫组化SP法,检测82例胃癌及其癌旁组织中p53、rasp21和nm23/DNPK表达。结果胃癌中p53、rasp21和nm23/DNPK表达分别为68.3%、61.0%、56.1%;癌旁组织中rasp21、nm23/DNPK分别为17.1%、48.8%,p53无阳性表达;rasp21过度表达与浸润深度有关(P<0.05),p53过度表达,nm23/DNPK低表达与淋巴结转移有关(P<0.05)。p53的表达与rasp21的表达之间有显著相关(P<0.05)。结论p53突变和ras基因的激活与胃癌的发生发展有关,两者之间具有协同作用。nm23/DNPK低表达与淋巴结转移有关。

微波-免疫组化SP法在天疱疮诊断中的初步应用研究

目的 : 探讨免疫组化技术在天疱疮诊断中的应用价值。方法 : 微波—免疫组化SP法和单纯SP法检测天疱疮患者水疱周围皮肤石蜡切片IgG和C3的表达。结果 : 微波—免疫组化SP法 35例中31例阳性 ,对照组均为阴性。灵敏度 (Se) 88.5 7% ,特异度 (Sp)达 10 0 %。重复实验一致率达 97.1%。结论 : 石蜡切片微波—免疫组化SP法可用于天疱疮的诊断。

葛根素对大鼠急性脑缺血损伤Hsp70表达的影响

目的:探讨葛根素对大鼠急性脑缺血损伤Hsp70表达的影响。方法:采用闭夹大脑中动脉造成局部脑缺血模型,对脑组织用免疫组化SP法作Hsp70染色,观察其Hsp70表达情况。结果:葛根素干预组Hsp70表达强度显著强于单纯缺血组(P<001)。结论:葛根素有上调大鼠急性脑缺血损伤时Hsp70表达的作用。

TGF-β_1和TIL在喉癌局部免疫反应中作用的研究

目的 :检测喉癌组织TGF β1的表达 ,分析TGF β1与喉癌临床指标的关系 ,明确TGF β1表达对TIL细胞浸润和局部免疫功能的影响。方法 :38例原发性喉癌标本 ,应用免疫组化SP法 ,检测喉癌组织CD3 、CD4 、CD8、CD57、CD68和CD2 5的浸润及TGF β1的表达 ;同时以 10例声带息肉做对照组。结果 :与对照组相比 ,喉癌组织TGF β1蛋白表达减少 ,且TGF β1表达与喉癌病人性别、年龄、临床分期及不同发生部位无关 ,随着恶性度的增高 ,TGF β1表达减少 ,淋巴结转移组TGF β1阳性率多于未转移组 ,TGF β1表达与CD4 细胞浸润无关 ,而与CD8浸润有显著正相关 ,TGF β1表达能诱发CD4/CD8比值倒置。结论 :喉癌组织TGF β1蛋白表达减少 ,TGF β1对喉癌细胞的生长可能起抑制作用 ,有利于肿瘤细胞的转移 ,通过影响CD8细胞的浸润 ,改变CD4/CD8比值 ,进而抑制肿瘤局部免疫功能。

鼻咽癌HSP90β的表达及临床意义

目的:探讨鼻咽癌组织中HSP90β表达及其与组织分级、预后之间的关系。方法:应用免疫组化SP法检测50例鼻咽癌组织中HSP90β的表达情况,并分析其表达与鼻咽癌临床与预后之间的关系。结果:鼻咽癌中HSP90β阳性率高于鼻咽部正常组织,而且鼻咽癌分化程度越低,HSP90β的表达越强;HSP90β阴性表达者5年生存率明显高于阳性者。结论:说明HSP90β过度表达可能与鼻咽癌的发生、发展以及预后有关。

不同乳腺病变组织中TSP-1、CD44V5、HER4表达对微血管密度的影响

目的 探讨不同乳腺病变组织中微血管密度(MVD )的差异及其与TSP 1,CD44V 5 ,HER 4表达情况的关系。方法 采用免疫组化SP法,检测乳腺纤维腺瘤、小叶增生和乳腺浸润性导管癌(IDC )组织中TSP 1,CD 44V 5 ,HER 4的表达情况及MVD。结果 在IDC组织中的MVD明显高于其它两种组织(P <0 .0 5 ) ;在3种组织中MVD与TSP 1,CD 44V 5的表达均无关(P >0 .0 5 ) ,但在IDC中,MVD值与HER4表达有关(P <0 .0 5 ) ,HER 4阳性的IDC组织MVD较高。结论 IDC组织的MVD高于良性病变;HER4的表达可促进IDC组织中MVD的增加。

PCNA、HSP70在星形胶质细胞瘤中的表达及其临床意义

目的:研究增殖细胞核抗原(PCNA)、热休克蛋白70(HSP70)在星形胶质细胞瘤中的表达及其临床意义.方法:采用免疫组化SP法对43例人脑胶质瘤石蜡标本中PCNA、HSP70进行检测.标本均为星形胶质细胞瘤,病理级别为Ⅰ～Ⅳ级.观察其与胶质瘤临床病理分级的关系及其相关性.结果:PCNA和HSP70在脑星形细胞瘤中的表达程度明显增高,并且发现二者表达的阳性率随着胶质瘤病理级别的升高而升高,不同级别之间存在显著性差异,二者呈正相关.结论:检测脑胶质瘤组织中PCNA、HSP70表达能够快速、准确地反映肿瘤细胞的增殖状态及评价预后,对判定胶质瘤的恶性程度及指导治疗有一定意义.

HBV感染相关蛋白Human Annexin-V在卵巢组织表达

目的:观察HBV感染相关蛋白—人膜联蛋白V(Human Annexin-V,HA-V)在卵巢组织,特别是卵细胞上的表达,探讨其在HBV感染卵巢及卵细胞中的可能作用。方法:用SP免疫组化的方法检测HA-V在引产胎儿卵巢及卵细胞,血清HBsAg阳性及阴性的成人卵巢、卵细胞上HA-V的表达及分布。结果:①所有卵巢组织均有HA-V的表达,与HBsAg阳性与否及卵巢成熟无关。阳性表达分布于卵巢的卵细胞(包括原始卵细胞、初级卵母细胞、次级卵母细胞及成熟卵母细胞)、颗粒细胞及间质细胞。②免疫组化图像分析系统显示血清HBsAg阳性成人卵巢与血清HBsAg阴性成人卵巢及胎儿卵巢HA-V表达无明显差别。结论:HA-V是卵巢组织及卵细胞上的一种固有蛋白;HA-V可能作为HBsAg的特异性受体介导了HBV与卵巢组织各种细胞,特别是卵细胞的粘附、内化等过程并最终导致了HBV对卵巢及卵细胞的感染。

人乳头状瘤病毒16/18型、p53、p16蛋白在口腔疣状癌中的表达

目的 研究人乳头状瘤病毒 16 / 18型、p5 3、p16蛋白在口腔疣状癌中的表达状况 ,探讨它们在口腔疣状癌发生发展中的生物学意义。方法 采用SP免疫组化和原位杂交方法分别检测 8例正常口腔粘膜、13例疣状癌、10例高分化鳞癌、10例低分化鳞癌组织中HPV16 / 18E6、p5 3、p16蛋白和HPV16 / 18DNA的表达。结果 1.疣状癌HPV16 / 18E6蛋白和p5 3蛋白阳性表达率均为 6 9.2 % (9/ 13) ,p16蛋白表达缺失率为 2 3.1% (3/ 13) ,过度表达率为 6 9.2 % (9/ 13) ,平均染色强度与高分化鳞癌和低化分鳞癌组比均有显著性差异 (P <0 .0 5 )。 2 .免疫组化方法检测HPV16 / 18E6蛋白与原位杂交方法检测HPV16 / 18DNA结果有良好的一致性。 3.疣状癌HPV16 / 18E6蛋白与p5 3蛋白、p5 3蛋白与p16蛋白表达之间无相关性 (P <0 .0 5 ) ,而HPV16 / 18E6蛋白与p16蛋白表达之间呈正相关 (P<0 .0 5 )。结论 1.进一步证实HPV16 / 18型感染是口腔疣状癌的重要致病因子。 2 .疣状癌的发生过程中可能存在p5 3基因突变。 3.p16基因变异在疣状癌的发生中起一定作用 ,用疣状癌中p16蛋白过度表达与HPV16 / 18型感染有关。 4 .HPV16 / 18、p5 3、p16蛋白在疣状癌与高分化鳞癌、低分化鳞癌组织中的表达存在明显差异 。

人手皮肤环层小体分布的形态学研究

目的研究S-100蛋白和髓鞘碱性蛋白(MBP)在人手指皮肤环层小体上的表达情况。方法采用SP免疫组化方法检测S-100蛋白和MBP在人手指皮肤环层小体上的表达。结果真皮乳头嵴存在于表皮嵴下,与指纹并行排列。环层小体广泛分布在真皮网织层和皮下组织层。皮神经和感觉小体分布在血管和汗腺附近。结论 S-100蛋白和MBP免疫过氧化物酶染色标记施万细胞具有特异性。掌指关节区、鱼际区的环层小体平均数量偏高。

人手皮肤触觉小体分布的形态学

目的研究S-100蛋白和MBP蛋白在人手指皮肤触觉小体上的表达情况。方法采用SP免疫组化方法检测S-100蛋白和MBP蛋白在人手指皮肤触觉小体上的表达。结果真皮乳头嵴存在于表皮嵴下,与指纹并行排列。真皮乳头层内有触觉小体存在。皮神经和感觉小体分布在血管和汗腺附近。结论本研究为解决手指损伤后的感觉障碍提供了形态学资料。

米非司酮对人输卵管肥大细胞数量的影响

目的:探讨米非司酮对人输卵管肌层及粘膜肥大细胞数量的影响。方法:取育龄妇女的输卵管,米非司酮组(10例)于术前12h给予米非司酮25mg口服,对照组(10例)不服用米非司酮,常规石蜡切片,用SP免疫组化法和图像分析法检测和计数肥大细胞。结果:对照组中,无论月经周期的增殖期或分泌期,肌层和粘膜的肥大细胞在相同部位的数量无明显差别(P>0.05);在肌层峡部肥大细胞数最多,壶腹部次之,伞部较少,各部位间两两比较差异有显著性(P<0.05);粘膜的肥大细胞计数,壶腹部和伞部差异无显著性(P>0.05)。米非司酮组在月经的不同周期阶段,峡部和壶腹部肌层的肥大细胞数均明显少于对照组(P<0.05),但伞部无显著差异(P>0.05)。米非司酮组的壶腹部粘膜肥大细胞数明显低于对照组(P<0.05),伞部则未见明显差异(P>0.05)。结论:人输卵管肌层及粘膜的肥大细胞数不受月经周期的影响;在米非司酮作用下,输卵管壁的肥大细胞数(除伞部粘膜外)均明显低于对照组。由于肥大细胞可使输卵管血流量减少及平滑肌收缩受阻,米非司酮可能影响受精卵的输送。

间隙连接蛋白Cx32在胃癌和胃癌前病变的表达及意义

目的 通过观察间隙连接蛋白 Cx32在正常胃粘膜、胃癌前病变和胃癌中的表达和分布情况 ,探讨 Cx基因表达与胃癌发生的关系。 方法 运用 SP免疫组化方法检测 Cx32在 70例原发性胃癌、6 2例胃癌前病变和16例正常胃粘膜中表达规律。 结果 Cx32在正常胃粘膜上皮呈一致性强阳性表达 ,Cx32在胃癌前病变、胃癌中表达的阳性率分别为 90 .3% ,18.6 % ,Cx32在正常胃粘膜上皮、胃癌前病变和胃癌中阳性率比较差异均有显著性(P<0 .0 5 )。 结论 Cx32是人正常胃上皮细胞间隙连接通道的主要成分 ,Cx32表达降低在胃癌发生发展中起重要作用。

连接蛋白43在正常胎儿和室间隔缺损患儿心脏的表达

目的 探讨正常胎儿和室间隔缺损患者心脏连接蛋白 43(Cx43)表达的分布规律。方法 应用SP免疫组化方法 ,检测 1 0例正常胎儿和 5例室间隔缺损患者心肌细胞Cx43的蛋白表达。结果 1 .Cx43主要在心室肌表达 ,心房较少。 2 .正常胎儿心室肌细胞的Cx43多数分布于细胞表面 ,少数位于闰盘处。 3 .室间隔缺损心肌Cx43表达的颗粒细小 ,分布不均。结论 Cx43的表达在胎儿时期主要位于心肌细胞表面 ,闰盘处少。

浆液性卵巢肿瘤组织微血管密度测定的临床意义

目的 探讨肿瘤血管形成与卵巢浆液性癌生长和转移的关系。方法 应用SP免疫组化法检测10例良性、10例交界性和28例恶性浆液性卵巢肿瘤组织中微血管密度 (MVD)。 结果 卵巢浆液性肿瘤的MVD值恶性高于良性和交界性肿瘤 (均P<0.01) ,而良性与交界性浆液性肿瘤组织的MVD值差别无显著性意义 (P>0.05)。恶性浆液性肿瘤组织的MVD值与临床分期 (P<0.01)、初次手术结果 (P<0.05)密切相关 ,而与年龄、细胞分化、原发灶和转移灶的大小无关 (均P>0.05)。结论 卵巢浆液性肿瘤中血管形成与其生长、浸润和转移密切相关 ,MVD值可作为反映卵巢浆液性肿瘤生物学行为的指标之一。