免疫组织化学染色技术SP三步法与PV二步法比较探讨

免疫组织化学技术在临床病理诊断和形态学研究中，是一种很重要的技术和手段。该技术于20世纪70年代应用于病理诊断，现在我国病理界已广泛应用。影响免疫组织化学结果的因素很多，如组织固定、脱水的过程、修复的好坏以及免疫组织化学的过程和免疫组织化学试剂盒的选取以及显色步骤均对结果有影响。

HPV 16、HPV 18 E_6单抗SP法染色体会

ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８Ｅ６单抗ＳＰ法染色体会任占平作者单位：广西柳州市第一人民医院病理科５４５００１近年来，人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）１６、１８感染已被证实与人宫颈癌、肺癌、食管癌、大肠癌等恶性肿瘤病因学密切相关〔１，２〕。但目前国内对ＨＰＶ１６、ＨＰＶ...

脾虚大鼠胰岛胰多肽免疫阳性物质分布变化

脾虚证的临床表现以消化系统功能障碍为主,其中胰腺外分泌功能减退明显,且伴有食欲与体质量的显著下降。胰多肽(PP)是胰岛周边F细胞分泌的主要胃肠激素,对胰腺外分泌功能与食欲的调节有抑制作用,可导致氧化代谢增强,引起体质量下降。本试验旨在揭示大鼠胰岛胰多肽分泌变化与脾虚证发病之间的关系。笔者以利血平脾虚大鼠模型为研究对象,采用SP染色进行免疫组织化学研究,观察大鼠胰岛中胰多肽免疫阳性物质的分布情况。脾虚组与对照组的大鼠胰岛中胰多肽免疫阳性物质面积与胰岛面积百分比相比,胰头部分未见明显差异(P>0.05);但脾虚组胰中、胰尾的PP免疫阳性物质所占面积极显著大于对照组(P<0.01)。结果表明,脾虚证大鼠胰岛中胰多肽总分泌量极显著增加。因此,胰多肽的分泌增加是导致脾虚证动物出现胰腺外分泌功能低下、食欲减退以及体质量下降的主要因素。

免疫组化法检测促黄体素受体在多浪羊和卡拉库尔羊卵巢上的分布

为从形态学角度理解内分泌调节过程,揭示促黄体生成素(luteotropic hormone,LH)对雌性哺乳动物卵巢调节作用机制,试验采用免疫组织化学SP方法研究促黄体生成素受体(luteotropic hormone receptors,LHR)在多浪羊和卡拉库尔羊卵巢组织中的分布与表达,分别选取相邻的5张连续切片,光镜观察、图像分析。结果显示,多浪羊与卡拉库尔羊的LHR阳性物质主要见于膜细胞、卵母细胞、颗粒细胞和血管周围间质,尤其在膜细胞和卵泡颗粒细胞的胞质中分布最多。原始卵泡卵母细胞中便有LHR受体阳性物质分布,在各级卵泡中LHR阳性细胞数量和染色强度随卵泡发育呈正向增加趋势。

根除幽门螺杆菌对慢性萎缩性胃炎组织中生长抑素及其受体的蛋白和mRNA表达的影响

目的:分析幽门螺杆(Hpylori)感染及根除对慢性萎缩性胃炎(CAG)组织中的生长抑素及其受体蛋白和mRNA表达的影响,探讨Hpylori的致病机制及其在胃癌发生中的作用. 方法:采用快速尿素酶试验、Giemsa染色及Warthin—Starry 银染色检测Hpylori;应用免疫组织化学SP法和RT—PCR技术检测56例萎缩性胃炎组织中的生长抑素(somatostatin, SS)及其受体hSSTR2、hSSTR5蛋白和mRNA表达情况, 以及Hpylori根除前后慢性萎缩性胃炎组织中的生长抑素蛋白和mRNA表达的变化. 结果:H pylori阳性组慢性萎缩性胃炎组织中的SS蛋白和mRNA表达均显著低于Hpylori阴性组(16.00±1.50 vs 21.38±1.38,0.30±0.05 vs 0.57±0.13,P<0.001),而H pylori 阳性组萎缩性胃炎组织中的hSSTR2 mRNA和hSSTR5 mRNA表达与H pylori阴性组比较无明显变化.经三联治疗根除H Pylori后,慢性萎缩性胃炎组织中的SS蛋白和mRNA表达较治疗前显著增加(23.16±2.74 vs 17.30±1.67, 0.54±0.11 vs 0.31±0.09,P<0.001),而Hpylori仍为阳性者,慢性萎缩性胃炎组织中的SS蛋白和mRNA表达与治疗前比较则无明显变化. 结论:Hpylori感染可以抑制慢性萎缩性胃炎组织中的生长抑素蛋白和mRNA表达,及早根除H pylori,可以纠正生长抑素基因的异常表达,这可能是Hpylori感染导致慢性胃炎的重要机制之一.

猪肺静脉肌袖PGP9.5免疫组织化学和组织学特点研究

目的检测猪肺静脉肌袖的PGP9.5(proteingeneproduct9.5)抗原表达和组织学特点,步探讨肺静脉源性心房颤动的发病机制。方法健康家猪11只,取其肺静脉,10%中性福尔马林固定石蜡切片行HE染色及SP免疫组织化学染色。结果(1)HE染色显示,4个左上肺静脉的肌袖组织观察到染色浅淡的单个苍白样细胞,2个肺静脉内膜下层见条索状聚集分布的苍白样细胞群;(2)免组织化学染色显示,6个左上肺静脉、2个右上肺静脉的肌袖组织中存在PGP9.5免疫组织化学染色性的细胞和神经纤维。结论通过HE染色方法,观察到肺静脉肌袖组织中存在与窦房结P细胞形相似的苍白样细胞,以及与心室内膜下束支形态相似的苍白样细胞群。应用免疫组织化学方法,证明些细胞与心脏传导系统有相同的PGP9.5抗原表达。

催产素受体在雌性山羊颈前神经节中的分布

【目的】研究催产素受体(Oxytocin Receptor,OTR)在雌性山羊颈前神经节中的分布情况。【方法】以健康未怀孕的成年雌性山羊为研究对象,采用SP免疫组织化学染色法研究雌性山羊颈前神经节中OTR的分布特点。【结果】OTR在雌性山羊颈前神经节中分布广泛,OTR免疫阳性产物主要分布在神经元胞质,有的呈黄褐色,为中等阳性,有的呈棕褐色,为强阳性;细胞核呈空泡状,着色极淡或不着色,为阴性。支持细胞和血管内皮细胞内也有少量OTR阳性产物存在,呈淡黄色,为弱阳性。图像分析表明,颈前神经节内神经元细胞OTR的相对表达量与非神经元差异极显著(P<0.01)。【结论】在雌山羊颈前神经节中,OTR主要分布于神经元中,说明颈前神经节的交感节后神经元具备接受OT调节的条件,提示颈前神经节的交感节后神经元可能是OT对头颈部内脏器官进行内分泌调节以及颈前神经节对颈部内脏器官进行神经调节2种途径相互协调作用的节点。

促性腺激素释放激素受体在雌性山羊颈胸神经节中的分布

目的探讨颈胸神经节是否具备接受促性腺激素释放激素(GnRH)作用的条件。方法实验采用免疫组织化学SP法,观察GnRH受体在雌性山羊颈胸神经节中的分布特点。结果在颈胸神经节中,神经元胞体均为GnRH受体免疫反应阳性,其细胞膜以及膜下胞质中的颗粒状物质呈棕黄色,GnRH受体为强阳性表达,而胞核呈阴性表达。部分神经元可见其突起,呈黄色,GnRH受体为中等阳性表达。卫星细胞也呈黄色,GnRH受体为中等阳性表达。图像分析表明,呈阳性反应的神经元胞体与节内其他阳性成分相比,其GnRH受体相对表达量差异性极显著(P<0.01)。结论在雌性山羊颈胸神经节中,神经元胞体是GnRH发挥作用的主要靶细胞,颈胸神经节具备接受GnRH作用的条件。提示GnRH有可能通过作用于颈胸神经节交感节后神经元上的GnRH受体来影响心肺器官的功能活动,即颈胸神经节可能是心肺功能活动中协调GnRH内分泌调节和该神经节自主神经调节两途径之间的中继站。

抑癌基因CHD5在胃癌中的表达及临床意义

目的:探讨染色体质域解螺旋酶DNA结合蛋白5(chromodomain helicase DNA-binding protein5,CHD5)mRNA和蛋白的表达与胃癌发生、发展的关系.方法:采用RT-PCR和免疫组织化学方法(链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法,streptavidin-perosidase法),检测63例胃癌组织及相应癌旁组织(距癌5cm)中CHD5 mRNA和蛋白的表达情况,并分析胃癌组织中CHD5 mRNA和蛋白的表达与临床病理特征之间的关系.结果:CHD5 mRNA在63例胃癌组织中的表达量相对值明显低于在癌旁组织中的表达相对值(0.06±0.04vs0.34±0.06,t=59.204,P<0.01).在胃癌组织中,CHD5 mRNA的表达与肿瘤的分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关(均P<0.05).CHD5基因的蛋白在胃癌组织和相应癌旁组织中的表达阳性率分别为36.5%和71.4%.在胃癌组织中CHD5蛋白的表达与肿瘤的分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关(均P<0.05).结论:CHD5基因的低表达与胃癌的恶性程度及侵袭性关系密切,提示其可能是胃癌发生、发展过程中的一个重要的抑癌基因.

GnRH受体在雌性山羊肠系膜后神经节中的分布

本试验旨在研究促性腺激素释放激素受体(GnRHR)在雌性山羊肠系膜后神经节(CMG)中的分布,以探讨CMG中存在的GnRHR在协调动物生殖活动中GnRH的内分泌调节与自主神经调节两种途径中的功能地位。试验采用免疫组织化学SP法,观察GnRHR在CMG中的分布特点。结果显示,在CMG中,神经元均为GnRHR免疫反应阳性细胞,其神经元细胞膜和细胞质呈棕黄色,GnRHR为强阳性。神经元突起呈黄色,GnRHR为中等阳性。卫星细胞和神经纤维中只有GnRHR弱阳性物质。图像分析表明,与其他非神经元成分相比,神经元胞体上GnRHR的相对表达量差异极显著(P<0.01)。结果表明:雌性山羊CMG中神经元胞体是GnRH发挥作用的主要靶细胞,提示GnRH有可能通过CMG的交感节后神经元上的GnRHR来调节该神经节所支配的生殖器官的功能活动,从而使CMG中存在的GnRHR成为协调生殖活动中GnRH内分泌调节与自主神经调节两种调节机制的功能中转站。

子宫内膜癌中PTEN突变研究

目的:研究抑癌基因PTEN在子宫内膜癌中的表达,探讨其临床意义。方法:采用免疫组化法,检测对正常子宫内膜、子宫内膜增生过长、子宫内膜不典型增生各20例,子宫内膜癌50例及子宫内膜癌旁组织50例中PTEN的表达情况。结果:PTEN在正常子宫内膜、子宫内膜增生过长、子宫内膜不典型增生、子宫内膜癌旁组织及子宫内膜癌中表达缺失率逐渐上升,P<0.05,差异有统计学意义。表达缺失率与组织学类型、组织学分级有关,P<0.05,与子宫内膜腺癌肌层浸润深度、临床分期、淋巴结转移无关,P>0.05。结论:PTEN表达缺失是早期诊断子宫内膜腺癌的较好的生物标志,参与子宫内膜腺癌的发生、发展。

抑癌基因CDKN2和癌基因ras产物与喉癌临床特征关系的初步探讨

为探讨抑癌基因 CDKN2和癌基因 ras 与喉癌临床特征的关系,分别采用免疫组织化学染色 SP 法和双抗体标记流式细胞法,检测57例喉癌及正常喉粘膜上皮细胞内 CDKN2基因产物 P16蛋白和 ras 基因产物 P21蛋白的表达。结果显示,正常喉粘膜上皮细胞内 P16阳性率(95%)显著高于喉癌细胞(45.6%),P<0.01;P16阳性率在喉癌Ⅰ期(66.7%)和Ⅱ期(57.1%),都分别显著高于喉癌Ⅲ期(37.5%)和Ⅳ期(38.9%),P<0.05;颈淋巴结转移组 P16蛋白阳性率(36.4%)显著低于非转移组(47.8%);正常喉粘膜上皮细胞内 P21蛋白为阴性,喉癌细胞内 P21蛋白的阳性率为78.9%;高分化鳞癌组 P21蛋白的阳性率(89.5%)显著高于低分化组(70%),P<0.05。结论:抑癌基因 CDKN2的失活、丢失和癌基因 ras 的激活参与了喉癌的发生;P16蛋白的表达缺失、P21蛋白的阳性表达是反映喉癌细胞生物学行为及临床特征的较好指标。

P^(27)蛋白表达与下咽癌临床生物学行为及预后

目的 :研究 P2 7蛋白在下咽癌及癌旁正常组织中表达情况 ,探讨 P2 7表达与下咽癌临床生物学行为及预后的关系。方法 :用免疫组织化学染色 SP法检测 4 8例下咽癌手术标本和同期 15例癌旁正常组织标本 P2 7的表达 ,结合临床与随访资料进行分析。结果 :下咽癌组 P2 7阳性率为 6 8.75 % (33/ 4 8) ,癌旁组阳性率为 80 .0 0 % (12 / 15 ) ,P2 7表达水平在肿瘤组显著低于癌旁组 ,且与癌的临床分期、组织分化程度、颈淋巴结转移及预后相关 ,而与肿瘤的发生部位无显著关系。结论 :下咽癌中 P2

腮腺阻塞性萎缩动物模型细胞凋亡及再生的研究

目的:探究大鼠腮腺萎缩再生过程的规律。方法:结扎198只Wistar大鼠保侧腮腺主导管7(A组)、14(B组)、21 d(C组)(n=66)后分别实现导管再通,采用HE染色、免疫组织化学染色和Tunel荧光检测观察再通后第0、1、3、5、7、10、14、21、28、60、90 d(记为A_0……A_(90)、B_0……B_(90)、C_0……C_(90),n=6)腮腺组织萎缩再生规律。另取6只鼠不结扎为对照组。结果:导管再通第0天,腺泡萎缩,导管扩张,管腔增大,PCNA、P53表达量以及细胞凋亡比例较正常对照组高,随后逐渐增多,并于A3、B5天达到最高值,后逐步减少,至A14、B21接近正常对照组水平,腺体组织结构恢复正常,而C组未见明显恢复。结论:腮腺导管结扎7、14 d后实现再通,腺体可完全恢复;结扎21 d后,则不能完全恢复甚至完全不能恢复。

α-连接素在非小细胞肺癌中的表达及其与预后的关系

目的 探讨非小细胞肺癌 (NSCL C)肿瘤组织中 α-连接素 (alpha- catenin,α- cat)的表达以及与其临床分期和预后的关系。 方法 采用 SP免疫组织化学染色方法分析 NSCL C组织中α- cat的表达。 结果 肿瘤的临床分期与 α- cat的表达呈显著相关 (r=0 .978,P<0 .0 5 ) , 期患者 α- cat的异常表达高于 期患者 ;α- cat的表达与 NSCL C患者组织学类型和术后生存时间无关 (P>0 .0 5 )。 结论 NSCL C组织中α- cat的表达不能作为临床判断 NSCL C患者预后的指标。

B细胞特异性激活蛋白在神经内分泌肿瘤中的表达

目的:观察B细胞特异性激活蛋白(PAX5)在神经内分泌肿瘤(NEN)中的表达。方法:经证实为NEN病例标本56例,用免疫组化SP法检测其石蜡包埋肿瘤组织中PAX5和Ki67表达,比较PAX5在不同肿瘤大小(肿块直径≤2 cm或>2 cm)、Ki67表达率(Ki67≤20%或>20%)及TNM分期(早期或晚期)中的表达情况。结果:PAX5在Ki67>20%病例中的阳性表达率(59.52%)高于Ki67≤20%病例(21.43%),在晚期病例(62.16%)高于早期病例(26.32%),差异有统计学意义(P<0.05);在不同肿块直径病例中的阳性率比较,差异无统计学意义(P=0.78)。结论:PAX5在NEN中有一定表达,表达与肿瘤增殖活性(Ki67表达率)及TNM分期有关。

MiR-26a和异黏蛋白的关系及在裸鼠体内荷瘤实验的验证

目的探讨miR-26a和异黏蛋白(MTDH)的关系。方法采用免疫组织化学SP染色法检测86例食管癌病理组织芯片中MTDH的表达,采用原位杂交检测miR-26a的表达,分析两者表达的相关性。通过生物信息学预测软件Targetscan Human7.2预测MTDH在miR-26a序列上的结合片段。采用荧光素酶报告实验验证MTDH与miR-26a的靶向调控关系。用慢病毒干扰和过表达的食管癌细胞系进行裸鼠皮下注射,观察瘤块的形成,采用免疫组织化学染色法和原位杂交法检测各组瘤体中MTDH和miR-26a的表达,分析其关系。结果MiR-26a在食管癌组织中的表达明显低于配对癌旁正常食管组织,而MTDH在食管癌组织中的表达明显高于配对癌旁正常食管组织。MiR-26a的表达与患者病理分级(P<0.05)、N分期(P<0.05)、肿瘤体积(P<0.01)有关。MTDH在食管癌中的表达与N分期(P<0.05)、分化程度(P<0.01)有关。采用Targetscan Human7.2生物信息学软件预测发现,MTDH基因中含有1个hsa-miR-26a的靶序列。荧光素酶报告基因实验也证实了miR-26a与MTDH的靶向调控关系。MiR-26a在KYSE-450细胞中表达最高,在Eca109细胞中表达量最低,本研究采用KYSE-450细胞系进行miR-26a干扰实验的裸鼠实验,采用Eca109细胞系进行过表达实验。过表达miR-26a慢病毒转染的细胞注射裸鼠皮下,成瘤后miR-26a的表达升高,MTDH的表达降低。干扰miR-26a慢病毒转染的细胞注射裸鼠皮下,成瘤后瘤块中miR-26a的表达降低,MTDH表达升高。结论MiR-26a能抑制食管癌细胞MTDH表达,在体外和体内实验,均可验证miR-26a与MTDH的靶向调控关系,miR-26a可能通过MTDH通路在食管癌的发生和发展中扮演着癌基因的角色。

生长抑素受体亚型在结直肠癌组织中的表达

目的 探讨结直肠癌组织中生长抑素受体亚型(SSTR1 SSTR5 )的表达和临床病理学意义。方法 免疫组织化学染色方法(SP法)检测12 7例结直肠癌组织和40例正常结直肠黏膜中SSTR 5种亚型的表达。结果 SSTR 5种亚型在结直肠癌组织和正常结直肠黏膜均有表达,两组SSTR表达的优势亚型都是SSTR1,结直肠癌组织中SSTR4表达明显高于正常结直肠黏膜(18.9%比2 .5 % ,P <0 .0 5 )。SSTR2、SSTR4、SSTR5在中高分化结直肠癌表达明显高于低分化结直肠癌表达(P <0 .0 5 ) ;淋巴结转移的结直肠癌SSTR1表达明显高于无淋巴结转移者(72 .2 %比5 4.5 % ,P <0 .0 5 ) ;溃疡型结直肠癌SSTR2表达明显降低(P <0 .0 5 ) ;此外,SSTR1表达率随Dukes分期呈升高趋势,而SSTR3 ,SSTR5则呈下降趋势,但没达到统计学水平。SSTR5种亚型表达均与患者年龄、性别、肿瘤位置、浸润深度、远处转移无明显相关。结论 结直肠癌组织中SSTR1是优势表达亚型,SSTR2、SSTR4、SSTR5亚型表达与癌恶性程度有关,可能在结直肠癌发展过程中发挥重要作用。

儿童腹腔非霍奇金B细胞淋巴瘤的临床病理及免疫表型分析

为了探讨儿童腹腔原发性非霍奇金B细胞淋巴瘤的临床病理、免疫表型与EBER特征及其病理诊断和鉴别诊断，江西省儿童医院病理科杨文萍等按WHO（2008年）淋巴瘤分类标准分析74例儿童腹腔原发性非霍奇金B细胞淋巴瘤的临床病理资料，制备组织芯片，进行免疫组织化学SP法染色，